一种免疫球蛋白的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫球蛋白（ＩｇＧ）的提取方法，免疫球蛋白普遍存在于哺乳动物和人类的血液、组织液和外分泌中，并广泛用于生物医学各部个领域。发明专利技术人将血清按比例加入醋酸盐缓冲液，用ＮａＯＨ　　ｐＨ调整ｐＨ值，加入辛酸，平衡、离心、滤脂，按升体积比加入ＰＢＳ，再用ＮａＯＨ调整ｐＨ值，加干粉硫酸铵，通过静置、平衡、离心，沉淀，透析，过滤等工艺，经测定应用这种改进方法提取的免疫球蛋白比用常规方法得到的免疫球蛋白的纯度从６５％提高到９７％，可广泛用于提取家兔血清、马血清、羊血清、鸡血清和鼠血清中的免疫球蛋白，使用本提取方法可有效提高产品质量，降低生产成本，缩短生产周期，提高生产效率，有利于迅速开拓市场。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种免疫球蛋白(IgG)的提取方法，具体地说是以动物血清为原料在简单条件下提取较高纯度免疫球蛋白的方法。
技术介绍
免疫球蛋白(immunoglobulim，Ig)是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。因为最初有人用电泳证明血清中抗体活性在γ球蛋白部分，故曾把抗体统称为两种(γ)球蛋白。后来证明，抗体并不都在γ区；而且位于γ区的球蛋白，也不一定都具有抗体活性。1964年，世界卫生组织举行专门会议，将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig)。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白以及“正常人”天然存在的免疫球蛋白亚单位等。因而免疫球蛋白是结构及化学的概念，而抗体是生物学及功能的概念。可以说，所有抗体都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗体。免疫球蛋白普遍存在于哺乳动物和人类的血液、组织液和外分泌中，并广泛用于生物医学各部个领域。但在现有技术中，常规使用的是硫酸铵沉淀法，该方法生产成本高，生产周期长，生产效率低，纯度差，在大量提取过程中，该方法因血清溶血过多造成产品外观不良而导致产品质量下降，同时难去除IgG以外的其它杂蛋白。另外，如中国专利申请号为200410029860.4，专利技术名称为“血液中高活性免疫球蛋白提取方法”，公开日为2005年1月12日，公开号CN1563091A，提取纯度只有65％。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术存在的问题，而提供的一种提取高免疫球蛋白的方法。将血清按1∶3比例加入醋酸盐缓冲液，混匀搅拌，用NaOH调将PH至4-4.5，按25-40ul/ml加入辛酸，稀释血清，用吸管滴加辛酸，同时搅拌，用锡纸密封容器。在离心瓶中平衡，4000rpm-6000rpm离心，在滤器中滤去漂浮的脂肪，沉淀保存在冰箱备用。称量溶液体积放入容器中，按升按10％-12％体积比例加入PBS，用NaOH调将PH至7.2-7.6，测NaOH的量，计算溶液总体积溶液体积+所加PBS体积+调PH的NaOH体积＝总体积。加干粉硫酸铵，总体积ml×0.227g/ml＝g为所加硫酸铵量，静置8-24小时。把溶液到入离心管，平衡，4000rpm-6000rpm离心，倒掉上清溶液，收集沉淀，透析。溶液沉淀按10％-15％比例加入PBS，按75％-85％比例加入缓冲液稀释，透析后8000rpm-6000rpm离心，滤膜过滤后测定蛋白含量。经测定应用这种改进方法提取的免疫球蛋白比使用常规提取方法所得到的免疫球蛋白的纯度从65％提高到97％，可广泛用于提取家兔血清、马血清、羊血清、鸡血清和鼠血清中的免疫球蛋白。本专利技术的优点和积极效果是1、本方法简便易行，特别在大量提取过程中当使用常规的硫酸铵沉淀法无法有效去除由于血清溶血过多而造成的产品外观不良而导致产品质量下降时，使用本提取方法可有效去除血清中由于溶血而存在的血红素，显著改善产品外观。2、本方法可有效去除IgG以外的其它杂蛋白，显著提高免疫球蛋白的提取纯度。3、使用本提取方法可有效提高产品质量，降低生产成本，缩短生产周期，提高生产效率，有利于迅速开拓市场。4、本方法提取的免疫球蛋白初级产品，在生物医学研究领域中根据不同试验研究的需要而进行再提纯，广泛用做检测试剂。5、本方法提取的免疫球蛋白产品，纯度高、便于贮存和携带。具体实施例方式本专利技术将通过实施例进一步说明实施例一1、血清体积V---1.0L；2、1体积血清加3体积醋酸盐缓冲液；3、用NaOH调PH至4；4、加辛酸25ul/ml，稀释血清；总体积V---ml×25ul/ml＝---ul5、用吸管滴加辛酸，同时搅拌，锡纸密封容器；6、将液体到入离心瓶中，平衡，离心4000rpm，30分钟；7、将上清液到进滤器，滤去漂浮的脂肪，沉淀从瓶中取出保存在冰箱；8、称量溶液体积，放入适当容器，升(V)---9、按体积10％加加PBS；体积V---x 0.10＝---体积V为所加PBS量；10、用NaOH调PH至7.2，测NaOH的量--- 11、计算溶液总体积溶液体积+所加PBS体积+调PH的NaOH体积＝总体积；12、加干粉硫酸铵0.225g/ml总体积ml×0.227g/ml＝g为所加硫酸铵量；13、静置8小时；14、把溶液到入离心管，平衡，离心4000rpm，30分钟；15、到掉上清溶液，收集所有沉淀，透析；16、溶液沉淀用PBS；大约原始血清体积的10％比如1L×0.10-0.15＝100-150ml1.2L×0.10-0.15＝120-180ml用75％的缓冲液稀释，剩余的用来洗离心管；17、透析后8000rpm，离心；18、用滤膜过滤；19、测定蛋白含量。实施例二；1、血清体积V---1.0L；2、1体积血清加3体积醋酸盐缓冲液；3、用NaOH调PH至5；4、加辛酸40ul/ml，稀释血清；总体积V---ml×40ul/ml＝---ul5、用吸管滴加辛酸，同时搅拌，用锡纸密封容器；6、将液体到入离心瓶中，平衡，离心6000rpm，30分钟； 7、将上清液到进滤器，滤去漂浮的脂肪，沉淀保存在冰箱；8、称量溶液体积，放入适当容器，升(V)---9、加PBS，按体积12％加；体积V---×0.10＝---体积V为所加PBS量；10、用NaOH调PH至7.6，测NaOH的量---11、计算溶液总体积溶液体积+所加PBS体积+调PH的NaOH体积＝总体积；12、加干粉硫酸铵0.229g/ml总体积ml×0.227g/ml＝g为所加硫酸铵量；13、静置24小时；14、把溶液到入离心管，平衡，离心6000rpm，30分钟；15、到掉上清溶液，收集所有沉淀透析；16、溶液沉淀用PBS大约原始血清体积的15％比如1L×0.10-0.15＝100-150ml2.2L×0.10-0.15＝120-180ml用85％的缓冲液稀释，剩余的用来洗离心管；17、透析后6000rpm/分，离心；18、用滤膜过滤；24、测定蛋白含量。权利要求1.，其特征在于将血清按比例加入醋酸盐缓冲液，混匀搅拌，用NaOH调整PH值。2.根据权利要求1所述的，其特征在于血清和醋酸盐缓冲液比例为1∶3。3.根据权利要求1所述的，其特征在于用NaOH调整PH值4-4.5。4.，其特征在于加入辛酸，在离心瓶中平衡、离心，按升体积比例加入PBS，用NaOH调整PH值。5.根据权利要求4所述的，其特征在于按25-40ul/ml加入辛酸，离心4000rpm-6000rpm。6.根据权利要求4所述的，其特征在于按10％-12％体积比例加入PBS。7.根据权利要求4所述的，其特征在于用NaOH调整PH值7.2-7.6。8.，其特征在于加干粉硫酸铵按总体积ml×0.227g/ml＝g为所加硫酸铵量，静置8-24小时9.，其特征在于溶液到入离心管，平衡、离心4000rpm-6000rpm，倒掉上清溶液，收集沉淀，透析。10.，其特征在于溶液沉淀按比例加入PBS，按比例加入缓冲液稀释，透析后离心滤膜过滤后测定蛋白含量。11.根据权利要求10所述的，其特征在于溶液沉淀按10％-15％加入PBS。12.根据权利要求10所述的，溶液沉淀按75％-85％加入缓冲液。全文摘要本专利技术公开了一种免本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫球蛋白的提取方法，其特征在于：将血清按比例加入醋酸盐缓冲液，混匀搅拌，用ＮａＯＨ调整ＰＨ值。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋怀燕，
申请(专利权)人：宋怀燕，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]