一种用于产生包含与病原体或肿瘤的天然存在的抗原性蛋白质的至少４６个连续氨基酸具有至少８０％相同性的氨基酸序列的合成蛋白质的方法，其中所述方法包括以下步骤： ａ）化学合成两种或两种以上片段，每种片段由所述氨基酸序列的２－８０个连续氨基酸组成，其中所述两种或两种以上片段在所述氨基酸序列中是邻近且非重叠的； ｂ）将一种片段的Ｃ末端与邻近片段的Ｎ末端化学连接以产生所述合成蛋白质或其一部分； ｃ）任选地，重复步骤Ｂ以顺序连接从步骤Ｂ或步骤Ｃ获得的进一步的邻近片段，以产生所述合成蛋白质。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及医学领域，且更特别地涉及诱导和/或增强针对抗原的T细胞应答，这通过利用合成肽并将这些合成肽连接起来以生成包含所述抗原的所有T细胞表位的合成蛋白质而实现。优选地，将佐剂与合成蛋白质共价连接以生成合成疫苗。本专利技术主要通过以HPV定向免疫作为模型进行举例说明。但是，本专利技术不应当被理解为局限于HPV，而是与很多种免疫相关性疾病或可与免疫相关的疾病有关。
技术介绍
HPV感染在年轻的、性活跃的男性和女性个体中呈高流行性。大规模的前瞻性研究显示从男性伴侣感染HPV是常见的，在3年的随诊期内有40-60％的对象出现了这种情况(Koutsky et al.，Am J Med102(5a)3，1997；Ho et al.，N Eng J Med 338(7)1998；Marrazzo et al.，Am J Obstet Gynecol 183(3)，2000)。因此，HPV可能是最常见的性传播疾病。高危类型的乳头瘤病毒(例如HPV-16、-18、-31、-33和-45)是造成宫颈癌的原因(Bosch et al.，Natl Cancer Inst 87，1995；ZurHausen，Bioch Biophys Acta 1288，F55 1996)。在感染基底上皮细胞之后，表达立即HPV早期基因E1、E2、E6和E7。E6和E7癌蛋白的延长及增加的表达都与HPV诱导的发育异常以及向宫颈癌的转化密切相关。免疫抑制的肾移植患者和感染HIV的患者都显示出比正常对照高17倍的生殖器HPV感染发生率，这一事实表明了免疫系统在抵御人体中的HPV相关性疾病和HPV诱导的癌症中的保护作用(Matorraset al.Am J Obstet Gynecol 164，42，1991；Halpert et al.，Obstet Gynecol68(2)1986)。免疫抑制个体减退HPV感染的能力的减弱间接地指出了免疫系统在感染早期的保护作用。通过CD4+T细胞在退行性生殖器疣中的优势性(Coleman et al.，J.Clin.Pathol.，102，1994)以及通过对大多数患有自发性退行性CIN病变的患者中对HPV 16 E7的迟发型过敏反应的检测(Hopfl et al.，18thint.Papillomavirus conference，pp2000)都表明了HPV特异性Th免疫的积极作用。对人体中的HPV16特异性T细胞免疫的研究表明保护性HPV16特异性免疫的特征是反应性对抗三种HPV16早期蛋白E2、E6和E7的与IFN-γ和白介素-5强相关的Th1/Th2型记忆T辅助细胞应答(de Jong et al.，Cancer Res.62，p472-9，2002；Welters et al.，Cancer Res.63，p631-41，2003)。大多数患有HPV16阳性的癌前病变或宫颈癌的患者都不能诱导出这种类型的T细胞反应性，缺少T细胞辅助可以解释在这些患者中的HPV16特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞的普遍缺失(Ressing et al.，CancerRes.56，1996；Nimako et al.，Cancer Res.57，1997)。重要的是，对毕格尔犬(beagle)和兔中自发诱导的抗乳头瘤病毒的保护性免疫的研究证实了我们的发现，即E2和E6特异性T细胞应答在病毒诱导的病变消退的过程中达到峰值(Moore RA，Virology 2003)。此外，编码早期抗原E2、E6和E7的DNA疫苗的应用阻止了这些动物模型中的持续感染和相关的上皮发育异常(Han et al.，1999，Selvakumar et al.，JVirol 69(1)1995)。这些数据表明抗E2、E6和E7的免疫力作为对乳头瘤病毒感染的免疫预防以及用于HPV诱导的病变和癌症的治疗是有效的。最近，出现了关于导致成功攻击慢性病毒感染或病毒诱导的肿瘤的分子及细胞事件的新观点。对裂解效应细胞的全面动员关键取决于DC的正确激活(成熟)，或经天然免疫触发物例如Toll样受体(TLR)的微生物配体激活和/或经适应性免疫触发物例如活化的CD4+辅助(Th)细胞上的CD40配体(CD40L)激活(Melief et al.，Immunol Rev.188，2002)。因为HPV16对上皮的感染并不伴有(至少在初期)该组织的严重破坏和/或强烈的促炎性刺激，成功的免疫应答可能是依赖于HPV16特异性CD4+T细胞辅助。现在，有可能设计出为诱导效应T细胞和T记忆细胞的全面爆发提供正确的抗原信号及辅助信号的完全合成的疫苗，而不依靠于很不明确的免疫系统触发物例如重组载体以及不具有分子上明确功能的佐剂。这种疫苗的主要标记是它们不仅提供了刺激CD4+和CD8+T细胞的抗原，还含有严格模拟树突状细胞(DC)活化最成功的天然触发物的化合物(Melief et al.，Immunol.Rev.188，2002；Zwaveling J.Immunol.169，2002)。对于免疫对象的临床相关方法，例如抗(分枝)细菌和/或病毒感染的细胞或肿瘤细胞，特别是HPV感染的细胞，优选地都诱导特异T辅助细胞和CTL。我们已经显示用最小CTL表位进行免疫接种在一些模型中形成了抗肿瘤保护(Feltkamp et al.Eur.J.Immunol.23，1993；Kast et al.PNAS，88(6)1991)，而在其它模型中，这可以导致病毒和肿瘤特异性CTL(否则当被诱导时将会是保护性的)的耐受性或功能缺失(Toeset al.PNAS 93(15)1996；Toes et al.，J Immunol 156(10)，1996)。耐受性或功能缺失的发生显著地降低了接种疫苗的效应。因此，参与这一效应的表位不适用于免疫接种的目的。在已知的内源途径之后(Jondalet al.，Immunity 5(4)1996；Reimann et al.Curr.Opin Immunol 9(4)，1997)，通过交叉引发(cross-priming)和其它机制对外源性抗原加工用于I型MHC分子呈递现在被广泛地认为是用于I型MHC呈递的第二条加工途径已知。经此途径对抗原进行加工的正常结果是CTL耐受性，除非发生了CD4+T细胞对APC的激活(Kurts et al.，J ExpMed 186(12)，1997)。此外，在一些鼠病毒感染的研究中，检测到了CTL前体细胞频率和保护性免疫之间的正相关(Sedlik et al.J Virol 74(13)2000；Fu et al.，J Immunol 162(7)1999)。对于CTL的最佳诱导，CTL表位的呈递优选发生在专职抗原呈递细胞(APC)(例如树突状细胞)的表面(Mellman et al.，Trends Cell Biol 8，1998；Rodriguez et al.Nat Cell Biol 1，1999)。尽管任何体细胞都可以在无需专职抗原呈递细胞进行加工的条件下把最小的CTL表位呈递给T细胞，仍可能存在蛋白质需要被专职抗原呈递细胞摄取并加工以用于分别在I型MHC和II型MHC中的CTL和Th表位的最佳呈递(本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：舒尔德·亨里克斯·范德伯格，扬·沃特·德里杰夫豪特，
申请(专利权)人：莱顿大学医学中心，
类型：发明
国别省市：
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