安全的突变病毒疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种安全疫苗以及制备此种疫苗的方法。本发明专利技术的疫苗中包含至少两种活的同一科的突变病毒或是编码所述病毒的核酸分子，其中两种中的每一种病毒或其编码核酸分子都包含能够赋予所需表型的突变，而且病毒中的突变都存在于同一基因组位点上从而使突变病毒无法相互重组来抵消突变。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及适用于给药动物以抗病毒感染的疫苗。更准确地说，本专利技术涉及安全疫苗以及制备此种疫苗的方法。本专利技术的疫苗中包含至少两种活的同一科突变病毒或是编码所述病毒的核酸分子，其中每一种病毒或编码核酸分子中包含能够赋予所需表型的突变，而且病毒中的突变存在于同一基因组位点上从而使突变病毒无法相互重组来抵消(eliminate)突变。
技术介绍
黄病毒科(Flaviviridae)由疫病毒属(Pestivirus)、黄病毒属(Flavivirus)和丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)属组成。疫病毒属(Pestivirus)的代表种有牛病毒性腹泻病毒-1(BVDV-1)、BVDV-2、经典猪瘟病毒(classical swinefever virus)以及羊先天性髓质形成不全症病毒(Border disease virus)。这一病毒科中成员的病毒粒子包封着约9.5到12.3kb的正链RNA基因组。该基因组RNA包含邻接的长的开放读码框(ORFs)，其可以被翻译为多蛋白质再经过细胞和病毒蛋白酶的加工而产生成熟的病毒蛋白。对于疫病毒属(Pestivirus)的成员，开放读码框(ORF)编码大约3900个氨基酸的多蛋白质，其可以被协同翻译和后翻译加工成为下列成熟的病毒蛋白质(从5’端到3’端)Npro、C、Ems、E1、E2、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A以及NS5B。在一些疫病毒属(Pestivirus)成员中，基于它们对组织培养细胞的作用存在两种生物型，即为致细胞病变的(细胞病变的或cp)和非致细胞病变的(非细胞病变的或ncp)。基因组分析显示在致细胞病变的(cp)疫病毒(pestiviruses)基因组中存在细胞序列的插入，有时伴有病毒序列的复制、基因组重排和/或病毒序列的缺失，但在非致细胞病变的(ncp)疫病毒(pestiviruses)相应的RNA中并不存在。这暗示着致细胞病变的(cp)疫病毒(pestiviruses)是由非致细胞病变的(ncp)疫病毒(pestiviruses)通过RNA重组发展而来的。牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是一种广泛分布的牛病原体。BVDV-1在具免疫活性动物体内通常只引起轻度的腹泻，然而BVDV-2则能够引起血小板减少症、大出血以及急性的致命疾病。牛病毒性腹泻病毒(BVDV)能够穿过怀孕牛的胎盘从而引起持续感染(PI)小牛的出生(Malmquist，J.Am.Vet.Mea.Assoc.152763-768(1968)；Ross，et al.，J.Am.Vet.Med.Assoc.188618-619(1986))。病毒血症的(Viremic)小牛对病毒具有免疫耐受而且它们此后的生活中会持续存在病毒血症。它们提供了一个粘膜疾病爆发的根源(Liess，et al.，Dtsch.Tieraerztl.Wschr.81481-487(1974))而且极易被微生物感染而引起例如肺炎或肠道病变这样的疾病(Barber，et al.，Vet.Rec.117459-464(1985))。任一基因型的病毒都可以以为两生物型中的一种存在，致细胞病变的(cp)或者非致细胞病变的(ncp)。致细胞病变的(cp)显型与NS3的表达有关，虽然细胞感染致细胞病变的(cp)或非致细胞病变的(ncp)牛病毒性腹泻病毒(BVDV)都会表达NS2-3，然而NS3却只能在致细胞病变的(cp)牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染以后被检测到。NS3与NS2-3的C末端部分是线性对应的。NS3的表达呈现了一种在致细胞病变的(cp)牛病毒性腹泻病毒(BVDV)中观察到的基因组改造的结果。目前可得到的病毒疫苗包括灭活或减毒的活病毒疫苗、活载体疫苗、亚单位疫苗以及DNA或RNA疫苗。见Roth等“New Technology For ImprovedVaccine Safety And Efficacy”，Veterinary Clinics North AmericaFood AnimalPractice 17(3)585-597(2001)。病毒的减毒可以通过紫外照射、化学处理或者体外的高连续传代(high serial passage)来达成。这些方法导致的突变其数量、位置和种类在没有进行基因组序列分析的情况下是未知的。减毒还可以通过进行确定的基因改造来完成，例如，对已知能够带来毒性的病毒序列进行特异性缺失，或者在病毒基因组中进行序列的插入。关于应用减毒活病毒疫苗的一种顾虑是减毒的突变病毒具有在体内重组的潜力以抵消减毒突变从而恢复毒性。例如，在有毒性(野生型)野外菌株存在的情况下，病毒基因组中存在缺失的减毒病毒会具有与毒性菌株重组从而恢复缺失序列的潜力。见例如，Roth等，同上。还观察到在细胞培养基中具有细胞插入的致细胞病变疫病毒(cytopathic pestiviruses)通过细胞序列的缺失可以产生非致细胞病变疫病毒(noncytopathic pestiviruses)，可能是通过RNA重组完成的。见例如，Baroth等，“Insertion of cellular NEDD8 codingsequences in a pestivirus”，Virology.278(2)456-66，(2000)，以及Becher等，“RNA recombination between persisting pestivirus and a vaccine straingeneration of cytopathogenic virus and induction of lethal disease”，Journal ofVirology 75(14)6256-64(2001)。如果希望在疫苗组合物中包括两种来自于同一种、属或科的减毒突变病毒，那么将存在一种顾虑是两种病毒可能在接种疫苗的动物体内重组从而抵消减毒突变。见例如，Glazenburg等，“Genetic recombination of pseudorabies virusevidence that homologousrecombination between insert sequences is less frequent than betweenautologous sequences”，Archives of Virology，140(4)671-85(1995)。于是，仍在存在着进一步开发能够保护动物抵御病毒感染的安全有效的疫苗的需要。
技术实现思路
本专利技术提供了一种包含至少两种活的同一科突变病毒或是编码所述病毒的核酸分子的安全疫苗，其中每一种病毒或其编码核酸中包含一种能够赋予所需表型的突变，而且病毒中的突变都存在于同一基因组位点上从而使突变病毒无法相互重组来抵消突变。本专利技术还提供了一种通过筛选或构建两种或更多活的同一科、属或种的突变病毒制备一种安全病毒疫苗的方法，其中每一种病毒中都包含能够赋予所需表型的突变，而且病毒中的突变都存在于同一基因组位点上从而使突变病毒无法进行同源重组来抵消突变。本专利技术进一步还提供了一种通过给动物施用本专利技术的疫苗组合物来保护动物抵御病毒感染的方法。附图说明图1、BVDV-1的NADL株和BVDV-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，所述组合物包含同一科的至少两种活的突变病毒，其中每一种病毒在病毒基因组中都包含突变，而且病毒中的突变存在于同一基因组位点上从而使突变病毒无法相互重组来抵消突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：万小坤，杰伊G卡尔弗特，迈克尔K奥哈拉，曹雪梅，
申请(专利权)人：辉瑞产品公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]