一种具有生理活性的核肽复合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种从海产螺中提取制备天然的生理活性复合物，以及该复合物在医药方面的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术保护一种生理活性核肽复合物及其制备方法与应用，该生理活性复合物是从海洋螺类生物组织中提取，具有独特的生理活性，可显著提高ＰＡＤＡＭ患者血中睾丸酮的水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从海产螺中提取制备天然的生理活性的核肽复合物，以及该复合物的制 备方法与在医药方面的应用，属于生物医药
技术背景男性自50岁开始，随着年龄增长睾丸代谢生理性衰退，雄激素合成功能减退，严重者 引起中老年男性部分雄激素缺乏综合征(Partial Androgen Deficiency in Aging Male,PADAM)，该综合征的特征为身体和智力领域的变化，该改变与雄激素环境有关，并能通过调节雄激素环境加以纠正。2002年国际老年男子研究学会(ISSAM)将这一综合征重新命名为迟发性睾丸功能减退 (late onset hypogonadism in腿les， L0H)，把这种疾病界定为发生在中老年男子的一种 与年龄相关的睾丸功能减退，并得到了国际男科学学会和欧洲泌尿科学会的认同。他们认 为PADAM、男性雄激素缺乏症(ADAM)、雄激素缺乏症或继发性睾丸功能减退是一种症状群， 主要临床表现特征是(1)早期征象是性欲和勃起质量减退；(2)情绪改变伴有脑力和空 间定向能力下降，容易疲劳、抑郁和易怒；(3)痩体量减少伴肌肉容积和肌力下降；(4) 体毛减少和皮肤改变；(5)骨矿密度下降，引起骨量减少和骨质疏松；(6)内脏脂肪增加。 上述症状不一定全部出现，其中某一种或几种症状可能更为突出。PADAM最典型的生化特征是血清雄激素水平随年龄老化而降低，不管是否存在基因组 的敏感性降低，可出现多个器官或系统功能异常的症状和导致生活质量下降。雄激素中最 主要的为睾丸酮，睾丸酮通过中枢神经系统和阴茎海绵体局部的作用调节性欲和勃起功能， 外伤、手术或药物去势可导致性欲丧失和勃起功能障碍(ED)。在排除年龄、性激素结合球 蛋白和雌二醇的影响后，睾丸酮有独立的调节阴茎海绵体平滑肌松弛的作用。除了性分化 和生殖器官的生长和发育外，睾丸酮对骨骼、肌肉、脂肪、情绪和认知功能、性功能、血 液和心血管等器官和系统都有重要的生理作用，睾丸酮缺乏将会导致这些器官和系统功能 失常，出现一系列病理生理学改变。在本专利技术中，PADAM、ADAM与L0H的定义表述不影响本专利技术的限定，换言之，本专利技术的 内容涵盖了用于改善和/或治疗PADAM、 ADAM与L0H所述的所有临床症状。据统计，中国男子LOH的患病率随年龄的增长而增高，4(T49岁约为13%， 5(T69岁约 为30%， 70岁以上约为47%。目前，国际提倡PADAM患者进行睾丸酮补充治疗，如睾丸酮的脂肪酸酯(安特尔)、甲 基睾丸酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙，通过外源性睾丸酮结构类似物补充提高血中睾丸酮水 平，维持正常的性活动。由于涉及到不良的副作用，雄激素仅谨慎地用于治疗和激素补充。事实上，雄激素通 常仅用于对确诊为原发性或继发性雄激素缺失的男性进行治疗。显然，雄激素的补充治疗并非理想的可供长期使用的理想治疗方案。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供一种从海洋螺类生物组织中提取的核肽复合物，该复 合物具有天然的生理活性。本专利技术还提供核肽复合物的制备方法及其在医药领域的应用。 本专利技术技术方案如下-一种具有生理活性的核肽复合物，其特征在于，该核肽复合物是从海洋螺类生物组织中 提取的，其成分包括每毫升含有无机氮820-980y g，无机磷61-85yg，不饱和脂质 0. 2-1. 0 y g，水解氨基酸100. 0-180. 0 u g，鸟嘌呤0. 15-1. 12 u g，次黄嘌呤2. 82-7. 08 y g， 尿嘧啶4. 90-12. 85 u g。以上列出的各类成分为本专利技术核肽复合物发挥生物效应的主要物质，其余为与治疗作 用无关或者暂时未知的杂质成分，这部分物质的存在经过实验证明并不会对本专利技术所述的 治疗作用带来不良影响。优选的，上述核肽复合物中还可添加有维生素E，使维生素E在终产品中的重量百分比 为0. 02-0. 05%。一种具有生理活性的核肽复合物的制备方法，具体步骤如下将海洋螺类生物的组织原料捣碎或粉碎，用溶剂提取，合并提取液，降温使提取液温度 低于提取时的温度，析出沉淀，取上层清液，浓縮去除溶剂，净化处理，然后使用色谱柱层 析分离洗脱得到核肽复合物。所述的海洋螺类生物为软体动物门新腹足目骨螺科生物；优选脉红螺、红螺、骨螺、棘 螺或疣荔枝螺；所述海洋螺类生物的组织为除螺壳外的全部组织，优选其中的躯干组织、肝 脏组织和/或生殖器官组织。所述原料可以为新鲜状态，也可以为冷冻状态。在确保原料生物活性的条件下，为使原 料利于生物组织粉碎，优选的原料处理温度在0'C以下。所述的溶剂提取，提取次数不少于2次，以充分提尽所需物质。所述的溶剂提取在10-4(TC范围内进行，以保证不破坏原料中所含成分的生物活性。例 如可以在室温状态进行，也可在低于室温的状态下进行。所述的降温使低提取液温度低于提取时的温度，能够使一类极性较小的杂质析出，达到 去除杂质的作用，采用降低温度的方法，方法简便，成本低廉，是在一系列的试验基础上摸 索到的去除杂质的优选方法，优选的，析出沉淀的温度控制在0-l(TC。所述溶剂提取首次提取采用高浓度醇溶液，优选的，用80—100%的乙醇提取，重复提 取时采用较低浓度的醇溶液，优选的，用30—60的％乙醇提取。本专利技术研究发现采用不同的梯度浓度溶剂进行提取，其提取效果要优于使用相同浓度的 溶剂，高浓度乙醇的溶解域较宽，第一次可提取大部分活性复合物，如果继续用高浓度乙醇 提取，提取液中活性复合物比例降低，绝大部分为杂质。从尽量减少杂质混入的角度考虑， 后续提取选用低浓度乙醇继续提取较好。优选的，所述溶剂提取步骤中溶剂调节为酸性，pH4.0 — 6.5为佳。这样， 一方面可保 证活性复合物提取完全，另一方面尽量控制杂质混入提取液中。可以用盐酸或有机酸调节溶 剂为酸性，本专利技术优选采用有机酸调节提取溶剂为酸性，具体优选的有机酸为乙酸或甲酸。溶剂调节为酸性时提取效果很好，可有效去除糖类、色素、胆固醇氧化产物及其酯等 杂质部分。本专利技术具有生理活性的核肽复合物的制备方法，所述的净化处理分两步，先用净化剂与 提取液以体积比(1-5) : l混合，除去极性最小的一部分杂质，然后用活性炭处理，脱去 色素。优选的，净化剂选自正己烷、环己烷、石油醚之一或组合，净化处理中活性炭用量为 l-5%wt，进一步优选的，活性炭用量为2y。wt。优选的，在净化处理后，加入维生素E，使维生素E在终产品组合物中的重量百分比为 0. 02-0. 05%。这样可以保护复合物在制备过程中不受氧化破坏。本专利技术具有生理活性的核肽复合物的制备方法，柱层析吸附材料为葡聚糖凝胶，优选的， 柱层析吸附材料为葡聚糖凝胶LH20(s印hadexLH20)。该吸附材料具有样品损失少，分离效 果好的优点。本专利技术具有生理活性的核肽复合物的制备方法，柱层析洗脱液为醇-水复合溶剂，优选 的，醇为甲醇、乙醇或丙醇，进一歩优选使用甲醇，其中，复合溶剂中甲醇与水的体积比为 5: (1-5)。优选的，调节洗脱液为酸性，可以大幅度提高洗脱效率。优选用乙酸调节洗脱 液为酸性。本专利技术具有生理活性的核肽复合物在医药方面的应用，其特征在于是在制备用以治疗、 预防、改善PADAM患者的症状的药用物质中的应用。本专利技术的专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有生理活性的核肽复合物，其特征在于，该核肽复合物是从海洋螺类生物组织中提取的，其成分包括每毫升含有：无机氮８２０－９８０μｇ，无机磷６１－８５μｇ，不饱和脂质０．２－１．０μｇ，水解氨基酸１００．０－１８０．０μｇ，鸟嘌呤０．１５－１．１２μｇ，次黄嘌呤２．８２－７．０８μｇ，尿嘧啶４．９０－１２．８５μｇ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘可春，达特森科卓娅，考米沙林科谢尔盖，契克曼伊万，康尼维特娜塔丽娅，莫伊谢耶娃柳米拉，韩利文，柳高夫斯卡，依士丘克，亚斯尼，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]