桦木属植物中提取羽扇豆醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种从桦木属植物中提取羽扇豆醇的方法。取干燥的桦木树皮粉碎成粗粉，用二氯甲烷回流提取。回收二氯甲烷至小体积后，放置沉淀。过滤，滤液弃去，沉淀用少量环己烷多次洗去低极性杂质。用无水乙醇和丙酮重结晶三次，可得到羽扇豆醇。本发明专利技术与其他羽扇豆醇的提取方法相比具有以下优点：原料易得，工艺简单，成本低，能很好地用于工业生产。

【技术实现步骤摘要】
所属领域本专利技术属于天然产物研究，涉及一种有重要应用价值的天然产物提取，特别涉及一种从。
技术介绍
羽扇豆醇具有明显的降压、抗炎作用，Nikinema等对羽扇豆醇及其半合成有机酸酯衍生物进行了抗巴豆油诱导的耳水肿实验，结果表明，在每只耳0.4μmol/L剂量下，它们均有抑制活性性，其中羽扇豆醇的半琥珀酸酯活性最强其抑制率为90％，而相同剂量下，抗炎药物吲哚美辛的抑制率为73％。羽扇豆醇还有抑制肿瘤生长作用，研究表明羽扇豆醇在75μmol/L浓度下可使人白血病细胞发生凋亡细胞内亚二倍体的数量增加了28.5％，并且具有浓度和时间依赖性；Wada等报道了羽扇豆醇的另一种抗肿瘤作用机制即DNA拓扑异构酶II有选择性的抑制作用，其IC50为10.4μmol/L，活性强于抗癌药物依托泊苷(Etoposide，IC50为50.0μmol/L)。羽扇豆醇在多种植物(苏木蓝、祭丹参、麻栎叶、吐烟花、青蛇藤、单刀根、小叶石楠、须花藤)中都有分布，但含量均不高，关于羽扇豆醇的提取方法，文献报道的的方法大多以提取后用不同溶剂萃取，再对不同部分直接进行硅胶或氧化铝层析，梯度洗脱而得。这种方法很难用于工业化生产，因为通常植物提取物成分太复杂，萃取液直接进行层析制备时许多成分容易交叉扩散。
技术实现思路
针对上述植物中的羽扇豆醇含量不高及现有提取羽扇豆醇技术的不足，本专利技术目的在于提供一种简单、低成本、高产率、适合工业生产的从桦木属植物中分离羽扇豆醇的方法。实现上述目的的解决方案是从桦木属植物中分离羽扇豆醇的方法，按以下步骤进行(1)提取方法一将干燥桦木属植物树皮粉碎成粗粉，加入10～20倍量的二氯甲烷回流提取，前两次各两小时，第三次1小时，合并提取液，浓缩成小体后，放置出现少量灰褐色沉淀，再过滤，滤液浓缩得粗品，进一步用少量环己烷多次洗去低极性杂质得淡黄色粗品。方法二将干燥桦木属植物树皮粉碎成粗粉，加入10～20倍量的二氯甲烷采用微波及超声振荡法进行提取。(2)纯化用无水乙醇和丙酮混合溶液加热回流溶解上述粗品，放置析晶，同法重结晶两次得白色针状结晶(含量在80％以上)。进一步在正相硅胶柱上层析分离，以石油醚；乙酸乙酯＝8∶1的有机溶液洗脱，得羽扇豆醇纯品。(3)鉴别。取少量层析获得的羽扇豆醇，与羽扇豆醇标准品同时电样；在硅胶G板上，以展开剂(石油醚∶丙酮＝4∶1；环己烷∶乙酸乙酯＝3∶1；乙醚∶正己烷＝1∶1)上行展开，待有机溶剂挥去后分别用显色剂(10％硫酸溶液；香草醛-浓硫酸溶液；磷钼酸溶液))显色，二者Rf值相同，颜色一致。取少量层析获得的羽扇豆醇，进行熔点测定mp120～121℃证明层析所得物质为羽扇豆醇。本专利技术人惊喜地发现，桦木属植物提取物在无水乙醇和丙酮混合溶液经过多次结晶可以在柱层析之前将很多其它物质除去，使得后面的柱层析效率大大提高，另外在桦木属植物树皮中，红桦、枫桦的树皮的含量按本专利技术的提取方法所得的产物在其收率方面(大于2％)更有优势，因此本专利技术保护了从及红桦、枫桦的树皮在按照权利要求1所述的方法提取羽扇豆醇的应用。具体实施例方式以下结合专利技术人给出的具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。实施例1依本专利技术的技术方案，提取桦木属植物中的羽扇豆醇按以下步骤进行(1)提取取200克干燥的红桦树皮粉碎成20目的粗粉，加2L二氯甲烷回流提取，前两次各两小时，第三次1小时，合并提取液，浓缩成小体后，放置出现少量灰褐色沉淀，再过滤，滤液浓缩得粗品，进一步用少量环己烷多次洗去低极性杂质得淡黄色粗品。(2)纯化用无水乙醇和丙酮混合溶液加热回流溶解上述粗品，放置析晶，同法重结晶两次得白色针状结晶(含量在80％以上)。进一步在正相硅胶柱上层析分离，以石油醚；乙酸乙酯＝8∶1的有机溶液洗脱，得羽扇豆醇纯品。(3)鉴别。取少量层析获得的羽扇豆醇，与羽扇豆醇标准品同时点样；在硅胶G板上，以展开剂(石油醚∶丙酮＝4∶1；环己烷∶乙酸乙酯＝3∶1；乙醚∶正己烷＝1∶1)上行展开，待有机溶剂挥去后分别用显色剂(10％硫酸溶液；香草醛-浓硫酸溶液；磷钼酸溶液))显色，二者Rf值相同，颜色一致。取少量层析获得的羽扇豆醇，进行熔点测定mp120～121℃证明层析所得物质为羽扇豆醇。实施例2本实施例与实施例1所不同的是，在步骤1中所用的桦木属植物为枫桦树皮。实施例3本实施例与实施例1所不同的是，在步骤1中用氯仿进行回流提取。实施例4本实施例与实施例1所不同的是，在步骤1中用二氯甲烷超声震荡法进行提取。实施例5本实施例与实施例1所不同的是，在步骤1中用氯仿超声震荡法进行提取。实施例6本实施例与实施例2所不同的是，在步骤2中用氯仿进行回流提取进行提取。实施例7本实施例与实施2所不同的是，在步骤2中用二氯甲烷超声震荡法进行提取。实施例8本实施例与实施2所不同的是，在步骤2中用氯仿超声震荡法进行提取。参考文献.方玉春，商红强.对吐烟花的化学成分进行研究，中草药，2004，35(11)1218-1219.Nikiema JB，Vanhaenlen-Fastre R，Vanhaeien M，et al.Effects of anti-inflammatorytriterpenes isolate from Leptadenia hastate latex on keratinocyte proliferation.Phytotherapy Res，2001，15(2)131-134Aratanechemuge Y，Hibasami H，Sanpin K，et al.Induction of apoptosis by lupeolisolated from mokmen in human promyeotic leukemia HL-60 cells.Oncology reports，2004，11(2)289-292Wada S，Iida A，Tanaka R.Screening of Triterpenoids isolated from phyllanthusflexuosus for DNA topoisomerase inhibitory activity.J NatProd，2001，64(12)1545-154权利要求1.一种从桦木属植物中分离羽扇豆醇的方法，按以下步骤进行(1)提取方法一将干燥桦木属植物树皮粉碎成粗粉，加入二氯甲烷回流提取，合并提取液，浓缩成小体后，放置出现少量灰褐色沉淀，再过滤，滤液浓缩得粗品，进一步用少量环己烷多次洗去低极性杂质得淡黄色粗品。方法二干燥桦木属植物树皮粉碎成粗粉，加入二氯甲烷采用微波及超声振荡法进行提取。(2)纯化用无水乙醇和丙酮混合溶液加热回流溶解上述淡黄色粗品，放置析晶，同法重结晶两次得白色针状结晶。进一步在正相硅胶柱上层析分离，以石油醚；乙酸乙酯＝8∶1的有机溶液洗脱，得羽扇豆醇纯品。2.如权利要求1所述的从桦木属植物中分离羽扇豆醇的方法，其特征在于桦木属植物可为白桦、黑桦、红桦、枫桦、岳桦。3.如权利要求2所述的从桦木属植物中分离羽扇豆醇的方法，其特征在于桦木属植物可为白桦、黑桦、红桦、枫桦、岳桦，其中优选的桦木属植物为红桦、枫桦。4.如权利要求1所述的从桦木属植物中分离羽扇豆醇的方法，其特征在于所述提取步本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从桦木属植物中分离羽扇豆醇的方法，按以下步骤进行：（１）提取方法一：将干燥桦木属植物树皮粉碎成粗粉，加入二氯甲烷回流提取，合并提取液，浓缩成小体后，放置出现少量灰褐色沉淀，再过滤，滤液浓缩得粗品，进一步用少量环己烷多次洗 去低极性杂质得淡黄色粗品。方法二：干燥桦木属植物树皮粉碎成粗粉，加入二氯甲烷采用微波及超声振荡法进行提取。（２）纯化用无水乙醇和丙酮混合溶液加热回流溶解上述淡黄色粗品，放置析晶，同法重结晶两次得白色针状结晶。进一步在 正相硅胶柱上层析分离，以石油醚；乙酸乙酯＝８∶１的有机溶液洗脱，得羽扇豆醇纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：方玉春，曹秀萍，严孝金，刘培培，顾谦群，朱伟明，王长云，
申请(专利权)人：中国海洋大学，方玉春，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]