用于亨廷顿病诊断的基因及其应用以及由其编码的蛋白和蛋白的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于亨廷顿病诊断的基因及其应用以及由其编码的蛋白和蛋白的应用，其中用于亨廷顿病诊断的基因为Pebp1基因，Pebp1基因的编码序列为SEQ ID No.1所示的DNA序列；用于亨廷顿病诊断的基因编码的蛋白为PEBP1蛋白，PEBP1蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明专利技术根据Pebp1基因或PEBP1蛋白的表达量可应用于制备亨廷顿病的检测试剂盒或芯片，同时设计抑制Pebp1基因或PEBP1蛋白表达的抑制剂或抗体可用于制备治疗亨廷顿病的药物。本发明专利技术使用基因标志物来诊断亨廷顿病(HD)具有及时性、特异性和灵敏性等优势。

Genes for the diagnosis of Huntington's disease and their use, and the applications of proteins and proteins encoded by them

The invention discloses a method for gene diagnosis of Huntington's disease and its application and application by protein and its encoding, which is used for the diagnosis of Huntington's disease gene is Pebp1, encoding sequence of the Pebp1 gene sequence of DNA SEQ ID No.1 shown; for the diagnosis of Huntington's disease gene encoding protein PEBP1 protein, amino acid sequence of PEBP1 protein amino acid sequence SEQ ID NO.2 shown. The invention can be applied to the preparation of Huntington's disease detection kit or chip according to the expression of Pebp1 gene or PEBP1 protein, and is designed to inhibit Pebp1 gene or PEBP1 protein inhibitor or antibody can be used for preparing drugs for the treatment of Huntington's disease. The invention uses gene markers to diagnose Huntington's disease (HD), and has the advantages of timeliness, specificity, sensitivity, etc..

【技术实现步骤摘要】
用于亨廷顿病诊断的基因及其应用以及由其编码的蛋白和蛋白的应用
本专利技术涉及医药生物
，具体涉及一种用于亨廷顿病诊断的基因及其应用以及由其编码的蛋白和蛋白的应用。
技术介绍
亨廷顿病(Huntington'sdisease,HD)为一种迟发性神经退行性遗传病，以舞蹈样症状为典型表现的进行性加重的运动障碍、认知功能衰退及精神疾病症状为临床特征，本病呈世界性分布，发生于所有的种族，人群患病率约为5/10万，发病年龄一般为30～50岁，发病后15～20年死亡。该病主要侵害基底神经节和大脑皮质，具有高度的区域选择性。基底神经节运动通路受损引发运动过度，即产生亨廷顿病的主要临床症状—舞蹈样动作；同时大脑皮层受损导致患者认知功能障碍，晚期亨廷顿病症多见痴呆。目前，亨廷顿病的治疗方法以经验性对症支持治疗为主，对舞蹈样症状的控制可采用丁苯那嗪或奥氮平等第2代抗精神病药物；抑郁等精神症状的改善多借助抗抑郁药；认知功能障碍则以心理疗法加以干预。然而上述方法仅对善患者生活质量有一定作用，并不能延缓病程进展，许多大样本系统性回顾研究也显示，目前应用于临床的各种药物对亨廷顿病的治疗效果并不明确。因此，如何另辟蹊径，寻找更为有效并能从根本上阻遏疾病进展的治疗方法，成为诸多研究探索的焦点。1993年，HD协作研究小组找到了HD基因，将其定位于4p16.3，并且揭示it15基因的不稳定突变是HD的遗传学基础。HD发病是it15基因外显子1的CAG三核苷酸重复序列的异常扩增，引发其编码的亨廷顿蛋白(Huntington'sHtt)内多聚谷氨酰胺序列(PolyQ)延长产生。健康人的两个等位基因可含有6～25个CAG三联体，而在HD患者中，突变的等位基因中却含有36～120个CAG三联体。It15基因CAG系列重复导致正常的野生型亨廷顿蛋白(WildHuntingtin,wHtt)缺失和异常的突变型亨廷顿蛋白(MutantHuntingtin,mHtt)的产生。迄今，HD研究取得令人瞩目的成就，但发病机制仍然不清，尚无有效疗法。因为亨廷顿病(HD)是一种单基因常染色体显性遗传性神经系统变性疾病，其致病基因是位于染色体4p16.3的it15基因，因此该病的基因诊断方法是运用PCR方法检测ITl5基因中的CAG重复序列数，作为对HD进行确定诊断的主要根据，当其拷贝数目>40次时即具备完全外显率。临床上，亨廷顿病(HD)诊断的主要根据是：该病多在中年起病，具有三大临床特征即舞蹈样动作、精神异常、痴呆，阳性家族史，病情进行性发展。PET和MRI、fMRI检查结果可助诊。头颅CT或MRI检查可发现部分患者的尾状核头部、壳核以及大脑皮质萎缩，脑室扩大，尾状核萎缩程度与疾病的严重程度有关。PET检查发现患者脑内局部葡萄糖代谢率(localcerebralmetabolicrateofGlucose，LCMRGlu)在基底节明显减少。也有研究提示，HD在临床作出诊断的前几年已出现基底节代谢异常。应用fMRI检测能较早发现异常。然而，由于近来发现HD突变的不稳定性、对HD缺乏有效的治疗、中年起病、不同病因所致的相似表现等均使HD的临床诊断复杂化。近年来，血清蛋白质组学理论与技术的出现为寻找包括神经退行性疾病在内的多种疾病有效的临床生物学标志物提供了全新的方法。其中，同位素标记相对和绝对定量(isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation,iTRAQ)技术为解决低丰度蛋白的定性、定量研究提供了有效方法。。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种可用于亨廷顿病(HD)诊断的分子标志物基因Pebp1。相比传统的亨廷顿病(HD)的诊断方法，使用基因标志物来诊断亨廷顿病(HD)具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施，可应用于亨廷顿病的诊断和治疗。本专利技术还提供了以后总用于亨廷顿病(HD)诊断的蛋白PEBP1蛋白，利用蛋白的表达水平来诊断亨廷顿病(HD)具有及时性、特异性和灵敏性。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于亨廷顿病诊断的基因，所述用于亨廷顿病诊断的基因为Pebp1基因，所述Pebp1基因的编码序列为以下a、b、c中的任意一种：a、SEQIDNo.1所示的DNA序列；b、在严格条件下与所述a限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；c、与所述a或b限定的序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。进一步优选的，与所述a或b限定的序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。在本专利技术的上下文中，“Pebp1基因”包括人Pebp1基因以及与人基因的任何功能等同的多核苷酸。Pebp1基因包括与目前国际公共核酸序列数据库中Pebp1基因(NCBIGenebankaccessionNo.NM_002567.3)DNA序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。作为一个总的技术构思，本专利技术还提供了一种权利要求1所述的用于亨廷顿病诊断的基因在制备亨廷顿病的检测试剂盒或芯片中的应用。上述的应用，优选的，所述检测试剂盒包括正向引物和反向引物，所述正向引物的序列为SEQIDNO.3所示的序列，所述反向引物的序列为SEQIDNO.4所示的序列。上述的应用，优选的，所述芯片包括固相载体及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针为用于检测Pebp1基因转录水平的寡核苷酸探针。所述寡核苷酸探针的序列为SEQIDNO.7所示的序列，具体为：5’TGAGCCTGCAAGAAGTGGACGAGC3’。上述的应用，优选的，包括检测试剂盒包括为通过RT﹣PCR、实时定量PCR、免疫检测、核酸杂交或芯片检测Pebp1基因的表达水平以诊断亨廷顿病的产品。进一步，所述用RT﹣PCR诊断亨廷顿病的产品至少包括一对特异扩增Pebp1基因的引物；所述用实时定量PCR诊断亨廷顿病的产品至少包括一对特异扩增Pebp1基因的引物；所述用免疫检测诊断亨廷顿病的产品包括：与PEBP1蛋白特异性结合的抗体；所述用核酸杂交诊断亨廷顿病的产品包括：与Pebp1基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断亨廷顿病的产品包括：蛋白质芯片和基因芯片；其中，蛋白质芯片包括与PEBP1蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与Pebp1基因的核酸序列杂交的探针。作为一个总的技术构思，本专利技术还提供了一种上述的用于亨廷顿病诊断的基因在制备治疗亨廷顿病药物中的应用。所述的药物包括含有Pebp1基因表达产物的抑制剂。进一步，所述抑制剂为抑制Pebp1基因表达产物活性的物质。上述的药物还包括药学上可接受的载体，这类载体包括但并不限于稀释剂、赋形剂如水等、填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯毗咯烷酮；湿润剂，如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂季铰化合物；表面活性剂，如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇等。作为一个总的技术构思，本专利技术还提供了一种上述的用于亨廷顿病诊断的基因编码的蛋白，所述蛋白为PEBP1蛋白，所述PEBP1蛋白的氨基酸序列为以下A、B、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于亨廷顿病诊断的基因，其特征在于，所述用于亨廷顿病诊断的基因为Pebp1基因，所述Pebp1基因的编码序列为以下a、b、c中的任意一种：a、SEQ ID No.1所示的DNA序列；b、在严格条件下与所述a限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；c、与所述a或b限定的序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.一种用于亨廷顿病诊断的基因，其特征在于，所述用于亨廷顿病诊断的基因为Pebp1基因，所述Pebp1基因的编码序列为以下a、b、c中的任意一种：a、SEQIDNo.1所示的DNA序列；b、在严格条件下与所述a限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；c、与所述a或b限定的序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。2.一种权利要求1所述的用于亨廷顿病诊断的基因在制备亨廷顿病的检测试剂盒或芯片中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒包括正向引物和反向引物，所述正向引物的序列为SEQIDNO.3所示的序列，所述反向引物的序列为SEQIDNO.4所示的序列。4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述芯片包括固相载体及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针为用于检测Pebp1基因转录水平的寡核苷酸探针。5.一种权利要求1所述的用于亨廷顿病诊断的基因在制备治疗亨廷顿病药物中的应用。6.一种权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕道远，张沛玲，赖小龙，栗冀长，吴东颖，
申请(专利权)人：湖南中能荆卫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43