一种牙齿标本消毒方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种牙齿标本消毒方法。本发明专利技术所述方法将拔出的牙齿标本放入预冷的保存液中，然后取出牙齿标本消毒，接着剔除牙齿表面的牙周膜组织，再次进行消毒，最后将牙齿标本放置在保存液中清洗，所述保存液包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、青霉素、链霉素和两性霉素B。本发明专利技术在消毒的过程中加入了牙齿标本保存液进行消毒，同时在剔除牙周膜组织后再次进行一次消毒，消毒后的牙齿标本能够避免染菌情况的出现，同时所提取的牙髓干细胞仍然保持较高的活性，未受到明显影响。

Tooth sample disinfection method

The invention relates to the technical field of biology, and discloses a disinfection method for dental specimens. The method of the invention will pull out the teeth into preservation fluid pre cooling, and then remove the teeth and periodontal tissue disinfection, remove the tooth surface, disinfected again, the specimens were placed in the teeth cleaning solution, the solution including sodium chloride, potassium chloride, hydrogen phosphate two sodium, potassium dihydrogen phosphate, penicillin, streptomycin and amphotericin B. The present invention in the disinfection process of adding the teeth preservation solution for disinfection and disinfection once again after the elimination of periodontal tissue, after disinfection of teeth to avoid contamination of the extraction of dental pulp stem cells still maintain higher activity was not affected.

【技术实现步骤摘要】
一种牙齿标本消毒方法
本专利技术涉及生物
，具体的说是涉及一种牙齿标本消毒方法。
技术介绍
牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)是存在于牙齿牙髓组织中的一类具有自我更新、增殖能力强，及多向分化能力的间充质干细胞。牙髓干细胞具有多向分化的潜能，它除了能形成矿化结节能力的细胞外，经过不同细胞因子的诱导，还能够分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、神经等细胞系类型。成功从离体的牙齿中提取出足够量符合标准的牙髓干细胞，首先遇到的问题就是离体牙齿消毒的问题。口腔环境较其他组织环境不同，口腔内的细菌数量很多，种类相当繁杂，离体牙齿消毒方式不当极易发生染菌，且牙齿内细胞量较少，离体牙齿消毒方式不当也极易发生牙髓干细晌提取失败的情况。文献《人乳牙牙髓干细胞的体外培养观察》(陆家瑜等，口腔颌面外科杂志，2007年3月第17卷第1期)中公开了从人乳牙中分离牙髓干细胞的研究内容，其中涉及到消毒措施：收集7-8岁儿童因滞留而拔出的乳切牙，拔出前彻底消毒，拔出后立即放入预冷的含高倍双抗的DMEM不完全培养基中，从预冷的培养液中取出牙齿,乙醇消毒牙面,用含双抗的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline,PBS)反复冲洗。但是由于研究的重点是牙髓干细胞体外培养，故该文献并未记载此消毒措施的效果。中国专利CN104705289A公开了一种离体牙齿保存液，每升保存液中有以下组分：青霉素0.3-0.6g、链霉素0.5-1g、甲硝唑0.02-0.04g、两性霉素B0.015-0.025g、羟甲基纤维素5-10g、胰岛素50-100μg，余量为MEM。该保存液能够有效保持牙髓干细胞的活性，并在一定程度上降低细菌污染。虽然上述两个专利公开的
技术实现思路
在对牙齿标本消毒上可能有一定的帮助，但是经过实际的试验研究发现，其消毒效果以及消毒后牙髓干细胞活性并不理想。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种牙齿标本消毒方法，使得所述消毒方法能够避免牙齿染菌情况，并保证提取的牙髓干细胞活性较高，不受明显影响。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种牙齿标本消毒方法，包括：步骤1、将拔出的牙齿标本放入预冷的保存液中；步骤2、从保存液中取出牙齿标本消毒；步骤3、剔除牙齿表面的牙周膜组织，重复步骤2的消毒措施；步骤4、将牙齿标本放置在保存液中清洗；其中，所述保存液包括：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、青霉素、链霉素和两性霉素B。针对现有的消毒方法在消毒效果以及消毒后牙髓干细胞活性上不佳的问题，本专利技术在消毒的过程中加入了牙齿标本保存液进行消毒，同时在剔除牙周膜组织后再次进行一次消毒，最终在两个方面都取得了较好地效果。其中，所述保存液在具体实施过程中各组分浓度为：氯化钠8g/L、氯化钾0.2g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、青霉素50U-500U/mL、链霉素50μg-500μg/mL和两性霉素B0.5μg-5μg/mL，pH值7.2。进一步优选地，所述青霉素浓度为100U/mL，所述链霉素浓度为100μg/mL，所述两性霉素B浓度为1μg/mL。同时，本专利技术还提供了所述保存液的制备方法，配制氯化钠8g/L、氯化钾0.2g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、磷酸二氢钾0.24g/L的混合溶液，调pH值为7.2，灭菌后加入青霉素、链霉素以及两性霉素B，使其终浓度分别为500U-50U/mL、500μg-50μg/mL、5μg-0.5μg/mL。在实际配制过程中，可以定容到1L来进行配制。作为优选，步骤2具体为从保存液中取出牙齿标本消毒进行碘伏消毒或乙醇消毒。更具体地，步骤2为：用无菌镊子取出牙齿标本放入75％乙醇中，如果牙齿完整，无缺损，将牙齿完全浸没于消毒液中3-5min；如果牙齿缺损且暴露牙髓组织，将牙髓暴露缺口朝上，其他部分浸泡于消毒液中3-5min，用无菌纱布浸润75％乙醇擦拭牙髓暴露处30-60秒。作为优选，所述预冷为预先在2-8℃下冷藏。作为优选，步骤1中将拔出的牙齿标本放入预冷的保存液中10min-48h。本专利技术将CN104705289A中公开的保存液替换本专利技术保存液进行消毒作为对照，同时以文献《人乳牙牙髓干细胞的体外培养观察》作为另一个对照，进行牙齿消毒效果和牙髓干细胞活性的检测。结果显示，本专利技术所述消毒方法能够避免牙齿标本染菌情况的出现，同时消毒后牙齿提取的牙髓干细胞的活性也较高，而两个对照组均出现了牙齿染菌情况，并且牙髓干细胞的活性也高低不一。由以上技术效果可知，本专利技术在消毒的过程中加入了牙齿标本保存液进行消毒，同时在剔除牙周膜组织后再次进行一次消毒，消毒后的牙齿标本能够避免染菌情况的出现，同时所提取的牙髓干细胞仍然保持较高的活性，未受到明显影响。具体实施方式本专利技术实施例公开了一种牙齿标本消毒方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术提供的一种牙齿标本消毒方法进行详细说明。实施例1：本专利技术所述消毒方法1、配制本专利技术所述保存液8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)、1.44g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，0.24g磷酸二氢钾(KH2PO4)，调pH7.2，定容1L；然后高压蒸汽灭菌，取10mL溶液加入青霉素，使其终浓度为100U/mL，加入链霉素使其终浓度为100μg/mL,加入两性霉素B，使其终浓度为1μg/ml，放置4℃备用。2、本专利技术消毒方法在牙齿标本采集后，放入经过消毒的装有预冷保存液的容器中10min-48h(根据运送标本时间而具体调整)。然后用无菌镊子取出牙齿标本放入75％乙醇中，如果牙齿完整，无缺损，将牙齿完全浸没于消毒液中3-5min；如果牙齿缺损且暴露牙髓组织，将牙髓暴露缺口朝上，其他部分浸泡于消毒液中3-5min，用无菌纱布浸润75％乙醇擦拭牙髓暴露处30-60秒。取出牙齿，置于无菌平皿中，在用无菌锋利刀片去除牙齿表面的牙周膜组织，将牙齿表面剔除干净后，再放置含有75％的乙醇中浸泡3-5min。如果牙齿完整，无缺损，将牙齿完全浸没于消毒液中3-5min；如果牙齿缺损且暴露牙髓组织，将牙髓暴露缺口朝上，其他部分浸泡于消毒液中3-5min，用无菌纱布浸润75％乙醇擦拭牙髓暴露处30-60秒。经过乙醇消毒后，将牙齿放置在保存液中清洗牙齿，去除乙醇。实施例2：本专利技术所述消毒方法1、配制本专利技术所述保存液8g氯化钠(NaCl)，0.2g氯化钾(KCl)、1.44g磷酸氢二钠(Na2HPO4)，0.24g磷酸二氢钾(KH2PO4)，调pH7.2，定容1L；然后高压蒸汽灭菌，取10mL溶液加入青霉素，使其终浓度为50U/mL，加入链霉素使其终浓度为500μg/mL,加入两性霉素B，使其终浓度为0.5μg/ml，放置4℃备用。2、本专利技术消毒方法在牙齿标本采集后，放入经过消毒的装有预冷保存液的容器中10min本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牙齿标本消毒方法，其特征在于，包括：步骤1、将拔出的牙齿标本放入预冷的保存液中；步骤2、从保存液中取出牙齿标本消毒；步骤3、剔除牙齿表面的牙周膜组织，重复步骤2的消毒措施；步骤4、将牙齿标本放置在保存液中清洗；其中，所述保存液包括：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、青霉素、链霉素和两性霉素B。

【技术特征摘要】
1.一种牙齿标本消毒方法，其特征在于，包括：步骤1、将拔出的牙齿标本放入预冷的保存液中；步骤2、从保存液中取出牙齿标本消毒；步骤3、剔除牙齿表面的牙周膜组织，重复步骤2的消毒措施；步骤4、将牙齿标本放置在保存液中清洗；其中，所述保存液包括：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、青霉素、链霉素和两性霉素B。2.根据权利要求1所述消毒方法，其特征在于，所述保存液包括：氯化钠8g/L、氯化钾0.2g/L、磷酸氢二钠1.44g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、青霉素50U-500U/mL、链霉素50μg-500μg/mL和两性霉素B0.5μg-5μg/mL，pH值7.2。3.根据权利要求2所述消毒方法，其特征在于，所述青霉素浓度为100U/mL。4.根据权利要求2所述消毒方法，其特征在于，所述链霉素浓度为100μg/mL。5.根据权利要求2所述消毒方法，其特征在于，所述两性霉素B浓度为1μg/mL。6.根据权利要求2所述消毒方法，其特征在于，所述保存液...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，陈海佳，王一飞，冯德龙，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44