应用于眼疾的药物疗法中的适合体治疗剂制造技术

本发明专利技术提供了能与细胞因子，生长因子和细胞表面蛋白质，个别地，或两种或多种的组合地结合的核酸治疗组合物，以及在青光眼和其他眼部增生类疾病的治疗过程中核酸治疗剂的传递方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利技术的领域本专利技术主要涉及核酸治疗剂领域，更具体地，涉及可以与细胞因子，生长因子和细胞表面受体中的一个、两个或多个结合核酸治疗组合物，进一步涉及在青光眼和其他眼部增生类疾病的治疗过程中这些核酸治疗剂的传递方法。专利技术的背景适合体是一种核酸分子，与分子间相互作用具有特殊的亲和作用力，这种亲和力与经典的Watson-Crick碱基对作用力是不同的。适合体，与噬菌体产生的多肽或单克隆抗体(MAbs)一样，可以特异的结合到选择性靶位点，并抑制靶位点的生理功能。从随机序列的寡核苷酸库中经过体外筛选(附图说明图1)，100多种蛋白质，包括生长因子，转录因子，酶，免疫球蛋白和受体蛋白都可以产生出适合体。一个典型的适合体有10-15kDa大小(30-45个核苷酸)，与靶位点的结合依靠亚克分子亲和力，对靶位点有很强的识别能力(例如可以和特异的靶位点结合，但不能与该靶位点同一基因家族的蛋白结合)。使抗原抗体缀合物具有亲和性和特异性的相互作用包括氢键作用、静电补偿、疏水作用及空间位阻等，一系列研究表明，适合体也可以用这些类型的相互作用与靶位点结合。适合体在治疗和诊断中有很多有价值的特点，包括高的亲和性和特异性，生物学功效和极好的药物动力学价值。除此之外，它们还提供在与抗体和其他生物蛋白竞争中特定的竞争优越性，例如1)速度和控制。适合体完全由体外过程产生，允许初始治疗前体的快速产生。体外选择允许适合体的特异性和亲和性被很好的控制，允许对应毒性的和非免疫原性的靶位点产生前体物质。2)毒性和免疫原性。适合体已经阐明没有或几乎没有毒性或免疫原性。对老鼠和土拨鼠进行慢速高剂量水平注射适合体(10mg/kg每天，注射90天)，从临床上，分子水平或生化测量，均未观察到任何毒性。而很多单克隆抗体的效力可以被与抗体自身的免疫反应严格的限制，很难诱导产生适合体的抗体(最可能是因为适合体不能被T-细胞经过主要组织相容性复合体(MHC)呈现出来，故免疫反应不能识别核酸片段)。3)给药。目前已经批准用于治疗的抗体都是通过静脉注射(一般2-4小时以上)给药，适合体还可以皮下注射给药。这种不同首先取决于大多数单克隆抗体相当低的溶解度，因此在治疗时需要大量的溶剂溶解。而适合体具有良好的溶解性(＞150mg/mL)和相当低的分子量(适合体10-50kDa；抗体150kDa)，适合体一个星期的注射剂量低于0.5mL，在猴实验中，经皮下注射的生物利用率＞80％。(Tucker et.al.，J.Chromatography B.732203-212，1999)此外，适合体分子小，可以穿过结构紧密的组织结构，而抗体或抗体片段则不能穿过，这也显示了适合体治疗和预防的另一个优点。4)生产规模和成本。治疗性适合体是化学合成的，因而可以很容易根据生产需求去控制生产规模。而规模化生产的困难目前正限制着很多生物制品的生产能力，而且大规模蛋白质生产车间的资金消耗是巨大的，一个单独的大规模合成器每年可以生产至少100kg寡核苷酸，而且起始投资需要需要较少。目前按公斤规模进行适合体的合成，成本为$500/g，可比得上高优化的抗体生产。对过程发展的继续改进有望在五年内使生产成本降低到＜$100/g。5)稳定性。治疗剂适合体是化学稳定的。它们可以在暴露在热环境和变性剂中后很快恢复活性，其冻干粉可以在室温下长期储存(＞1年)。相反，抗体必须储存在冷藏环境中。青光眼导致失明的两大原因是青光眼和年龄相关性黄斑变性(AMD)。青光眼是一种增生性疾病，困扰着220万美国受试体和全世界65,000万受试体。青光眼疾病跟房水排出减少和眼内压(IOP)升高有关。当眼内压升高，受试体的神经纤维细胞死亡，导致失明。目前尚无阻止青光眼发生的方法，但可以通过药物治疗，通过调整房水生成和眼内压来减缓其发生。目前治疗青光眼是通过小梁切除并周边虹膜切除手术来治疗的，每年在美国约有120,000例青光眼受试体进行了此项手术。青光眼治疗的第一步是用药物调节眼内房水水平。青光眼的过滤显微手术，或小梁切除手术是治疗的第二步，它通过在巩膜上微穿刺排出房水，从而降低眼内压。尽管如此，手术后的并发症是不容忽视的，甚至可以导致失明。手术后伤口未完全愈合和瘢痕将会导致眼内压升高，从而需要再次手术。在小梁切除中，可以在穹隆中注射抗生素和皮质类固醇，或者用胶原蛋白覆盖住眼睛，以控制手术后瘢痕的扩大。可以用抗代谢药物，例如丝裂霉素C和氟尿嘧啶等控制术后瘢痕的扩大。若小梁切除手术后眼内压降低少于25％，则可以认为失败，需要第二次房水排出手术。为了确保小梁切除手术的成功，通常要用类固醇和抗生素药物。一般用1％泼尼松龙乙酸酯每天搽4-6次，4-8周后逐渐减少。每天用1％阿托品之类的睫状肌麻醉剂作用于眼球前房。为了防止术后结膜纤维化，需要用丝裂霉素C和氟尿嘧啶等抗代谢药物。它们可以抑制成纤维细胞增生，使不能进一步形成瘢痕组织。丝裂霉素C的药效是氟尿嘧啶的100倍，但有高的成功率的同时也伴随高的并发症几率，因此要根据实际情况来选择。在巩膜手术前可以先用丝裂霉素C(0.2-0.5mg/mL溶液)或氟尿嘧啶(25-50mg/mL溶液)浸泡1-5分钟的纱布或棉花覆盖在巩膜表层，时间取决于预期纤维化风险系数。手术中，用纱布保护好结膜，避免与伤口边缘接触。切除后，整个用生理盐水彻底清洗。氟尿嘧啶可以以每次5mg的剂量注射到结膜下，总量取决于角膜上皮的容忍度和滤疱的功能。与氟尿嘧啶相关的并发症包括角膜和结膜上皮毒性，角膜溃疡，结膜伤口渗漏，结膜下出血及非故意的氟尿嘧啶眼内扩散。重复小梁切除手术和抗代谢药物的使用会增加并发症的严重程度，包括房水泄漏，眼内压过低和主要组织的毒性(Blindish，et al.，Ophthalmology(2002)，1091336-1341；Belyea，et al.，Am J Ophthalmol(1999)，12440-45；Kupinet al.，Am J Ophthamol(1995)，11930-39)。抗代谢药物会进一步损伤眼组织，导致眼内压过低，甚至失明。在青光眼治疗中使用抗代谢药物失败的标准已经通过视力敏锐度测验规定了(Membrey，et al.，(2000).Br JOphthalmology，841154-58)。青光眼的发病过程与眼内转化生长因子水平上升有关。转化生长因子β包括三种转化生长因子β1(TGFβ1)，转化生长因子β2(TGFβ2)，转化生长因子β3(TGFβ3)。转化生长因子是控制生长、分化和发展的多功能细胞因子。它可以由多种类型的细胞表达，大多数细胞对转化生长因子敏感。转化生长因子β2是一种25kD的同二聚体细胞生长因子，与细胞增生、分化和胞外基质形成有关。多种受体(I-V型)介导各种细胞与转化生长因子β2及其同分异构体转化生长因子β1、转化生长因子β3的反应。II型受体是与转化生长因子β2反应的主要信号受体，虽然III型受体与转化生长因子β2间有强亲和力，但没有信号受体。在身体的很多部分，转化生长因子β1是占主要地位的，但是在眼睛中，转化生长因子β2是主要形式。转化生长因子β2影响到眼睛伤口的愈合，在青光眼手术中与瘢痕的形成有关。眼部瘢痕的形成是由转化生长因子β2介导的(Cor本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗眼病症的药物组合物，包括：与所述病症相关的靶分子特异性结合的适合体，其中适合体与靶分子的结合大大地降低了靶分子的作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫爱泼斯坦，迪拉尔格拉特，杰弗里库尔兹，尼古拉斯玛莎，托马斯G卡尤利，查尔斯威尔逊，
申请(专利权)人：阿切埃米克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]