The invention relates to a method for detecting two copper ion click chemistry based on the features, including the preparation step, the reaction liquid preparation steps, preparation of colloidal gold colloid gold nanoparticles streptavidin (AuNP-SA) conjugate detection steps and corresponding steps; provide a marked click chemistry test two the price of copper ion with Click kit based on Azide fragment and Click CHCH complementary nucleic acid nucleic acid as the detection line and control, to solve the current operation of two detection methods of copper ion complex, poor repeatability, poor sensitivity, the detection result can be observed with the naked eye, so it is widely used at the basic laboratory.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种二价铜离子的检测方法及试剂盒,特别涉及一种基于点击化学的二价铜离子的检测方法及试剂盒。
技术介绍
环境中离子的浓度直接影响人们的健康,过高或过低都会影响人们的健康。在众多的离子中,重金属离子的危害性更大,因此有必要对其含量进行精确的测定。传统的用于检测重金属离子的方法主要有石墨烯原子吸收光谱法(graphitefurnaceatomicabsorptionspectrometry,AAS)和电感耦合等离子原子发射光谱法(inductivecoupledplasmaatomicemissionspectroscopy,ICP-AES)。这两种方法对于重金属离子的检测准确可靠,但使用的仪器价格昂贵,需要经验丰富的技术人员来操作,因而限制了其在基层实验室的广泛应用。近年来,各种检测重金属离子的生物传感器不断出现,其检测的原理都是依赖于重金属离子能够切割其DNA酶结合的底物链的特定位点,然后使用一系列的方法来检测释放的底物链,检测方法包括:荧光法,比色法,动力学光散射法和胶体金试纸条法等。近年来,基于Cu+的点击化学由于其高效和特异性而得到了广泛的应用,它指的是一个分子的叠氮基团和另一个分子的炔基基团在Cu+的催化下,通过环加成反应形成一个三唑五元环而被连接在一起。并且,叠氮基团和炔基基团的之间的反应不受溶液中其它基团的干扰,特异性好。Cu+可以通过抗坏血酸钠还原Cu2+产生。基于Cu+的点击化学已经用于可视化检测Cu2+,其检测的原理多是基于比色法,操作复杂,重复性差,并且,这些方法的灵敏度都有待进一步 ...
【技术保护点】
一种基于点击化学的二价铜离子的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:制备反应液步骤:将修饰了叠氮基团的短单链核酸(Click Azide序列)、修饰了炔基基团的标记有生物素的短单链核酸(Click CHCH序列)、待检测样品和抗坏血酸钠先后加入磷酸缓冲液中,混匀,20℃‑25℃条件下反应1小时,使Click Azide的叠氮基团和Click CHCH的炔基基团在Cu+催化的作用下环加成反应连接起来,形成一条有生物素标记的长链序列;制备胶体金步骤:在圆底烧瓶中加入100 ml 0.01%的HAuCl4溶液,磁力搅拌加热至沸腾,并向上述溶液中加入4 ml 1%枸橼酸钠,溶液变为酒红色后,继续煮沸10分钟,停止加热继续搅拌15分钟,得到胶体金溶液,胶体金溶液4℃避光保存;制备胶体金颗粒‑链霉亲和素(AuNP‑SA)偶联物步骤:向1 mL 的上述胶体金溶液中加入0.1 M K2CO3 (6 µL)混匀,5分钟后加入10 µg的链霉亲和素(SA),室温振荡30分钟;加入100µL 10 %牛血清白蛋白后封闭30分钟,4°C离心(12×103rpm)10 分钟,得到AuNP‑SA偶联物;弃上清,用1 ...
【技术特征摘要】
2014.10.21 CN 20141056420861.一种基于点击化学的二价铜离子的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
制备反应液步骤:将修饰了叠氮基团的短单链核酸(ClickAzide序列)、修饰了炔基基团的标记有生物素的短单链核酸(ClickCHCH序列)、待检测样品和抗坏血酸钠先后加入磷酸缓冲液中,混匀,20℃-25℃条件下反应1小时,使ClickAzide的叠氮基团和ClickCHCH的炔基基团在Cu+催化的作用下环加成反应连接起来,形成一条有生物素标记的长链序列;
制备胶体金步骤:在圆底烧瓶中加入100ml0.01%的HAuCl4溶液,磁力搅拌加热至沸腾,并向上述溶液中加入4ml1%枸橼酸钠,溶液变为酒红色后,继续煮沸10分钟,停止加热继续搅拌15分钟,得到胶体金溶液,胶体金溶液4℃避光保存;
制备胶体金颗粒-链霉亲和素(AuNP-SA)偶联物步骤:向1mL的上述胶体金溶液中加入0.1MK2CO3(6μL)混匀,5...
【专利技术属性】
技术研发人员:曾令文,王斗,葛晨晨,
申请(专利权)人:中国科学院广州生物医药与健康研究院,
类型:发明
国别省市:广东;44
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