The present invention provides a method for obtaining haploid regenerated plants by in vitro culture. First of all, we determined that the medium and small spores of the anthers were in the stage of single core extension, then the male ears were sterilized and crushed with the ordinary soybean milk machine. In the super clean working table, 40 and 60 mesh screens were screened to remove the impurities larger than or less than the anthers. Inoculation in MS+40mg/L sucrose +2.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT cultured under 4 weeks to get the best callus; the callus in the MS+30mg/L +2.0mg/L BA+0.5mg/L KT sucrose differentiation culture conditions the differentiation of adventitious buds; adventitious buds medium for rooting induction in WPM+0.4mg/L IBA+0.2mg/L NAA. After the treatment of two 4H with saturated solution, the results showed that the effect of chromosome contraction was the best. The haploid lines with 3 chromosome numbers of 14 were obtained.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法。本专利技术属农业生物
技术介绍
白桦(Betulaplatyphylla)为桦木科桦木属落叶乔木。自然分布主要在东北地区的北部:大小兴安岭、完达山等林区。因其姿态优美,树皮光滑洁白,作为庭园树、行道树及街心绿地栽培,具独特的观赏价值。白桦属强阳性树种,耐贫寒、生长快、材质优良,为重要工业用材树种之一。花药培养能够获得纯系育种材料,进行单倍体育种,缩短育种年限和提高育种效率,而且在基础生物科学领域具也有广泛应用(王延玲等,山东农业大学学报(自然科学版),2006,37(1):149~151)。花药培养建立的双单倍体群体DH群体,具有遗传学上的纯合基因组,是AFLP,RAPD,SSR等分子标记和基因图谱的理想材料,能极大提高基因定位、标图的准确性。从20世纪60年代,Nitshc通过花药培养得到烟草的单倍体植株后,花药培养得到了很大的发展并于70年代达到了高速发展阶段。自1964年印度的Guha和Maheshwari(GuhaandMaheshwari,Nature,1964,204:497)首次成功地从毛叶曼陀罗离体花药培养中获得单倍体植株,并随后证实是由胚状体途径获得的单倍体花粉植株,从此开创了利用花药培养诱导单倍体的新途径。之后,花药培养诱导单倍体在许多重要作物上获得成功,如在小麦(倪胜利等,甘肃农业大学学报,2004,39(2):141~145)、玉米(付迎军,延边大 ...
【技术保护点】
一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法,其特征在于:以小孢子处于单核靠边期的无菌花药为外植体,通过诱导愈伤组织、诱导分化不定芽、不定芽生根过程,获得花粉再生植株,然后利用根尖染色体制片技术,鉴定再生植株染色体倍数,获得染色体数为14条的单倍体植株;所述内含单核靠边期小孢子无菌花药的快速获得方法为:于8月下旬到9月初期间,不断取材,利用醋酸洋红法于光学显微镜下观察小孢子的发育时期,确定花药中小孢子处于单核靠边期后,采集雄穗,在超净工作台内用70%酒精消毒3分钟,无菌水冲洗后,用灭菌滤纸吸干水份,事先将普通豆浆机的杯和刀片在超净工作台内用70%酒精消好毒,然后将雄穗放于杯内,拧好刀片,拿出超净工作台,插到电机上进行粉碎,之后在超净工作台内将粉碎物取出,分别以40目和60目网筛过筛,出去大于和小于花药的杂质,快速获得大量无菌花药用于接种;所述的获得花粉再生植株的方法为:花药接种于在MS+40mg/L蔗糖+2.0mg/L 2,4‑D+0.5mg/L KT条件下培养4周获得的愈伤组织最好;该愈伤组织在MS+30mg/L蔗糖+2.0mg/L BA+0.5mg/L KT分化培养条件下分化的 ...
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法,其特征在于:
以小孢子处于单核靠边期的无菌花药为外植体,通过诱导愈伤组织、诱导分化不定芽、不定芽生根过
程,获得花粉再生植株,然后利用根尖染色体制片技术,鉴定再生植株染色体倍数,获得染色体数为14
条的单倍体植株;
所述内含单核靠边期小孢子无菌花药的快速获得方法为:于8月下旬到9月初期间,不断取材,利用
醋酸洋红法于光学显微镜下观察小孢子的发育时期,确定花药中小孢子处于单核靠边期后,采集雄穗,在
超净工作台内用70%酒精消毒3分钟,无菌水冲洗后,用灭菌滤纸吸干水份,事先将普通豆浆机的杯和刀
片在超净工作台内用70%酒精消好毒,然后将雄穗放于杯内,拧好刀片,拿出超净工作台,插到电机上进
技术研发人员:曲冠证,赵曦阳,李莹,李开隆,由香玲,
申请(专利权)人:东北林业大学,曲冠证,
类型:发明
国别省市:黑龙江;23
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