一种竹叶石斛种子快速繁殖方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养技术领域，公开了一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段。本发明专利技术提供的竹叶石斛种子快速繁殖方法，在种子萌发阶段，45d即可出现大量原球茎，种子萌发率高达95％；在原球茎分化阶段，分化出小苗的时间控制在60d以内，最优可到50d；在生根壮苗培养阶段，45d左右组培苗长到3cm以上，根的条数为2条以上。从种子萌发到无菌苗生根，达到炼苗移栽要求，这一周期的时间在150d以内，大大加快了竹叶石斛种子繁殖速度，为竹叶石斛的快速生产提供了便利。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，涉及一种竹叶石斛种子快速繁殖方法。
技术介绍
竹叶石斛又名细叶石斛，学名DendrobiumhancockiiRolfe，是一种名贵中药，具有养阴益胃、生津止渴等功效，药用价值和经济价值极高。此外，竹叶石斛的观赏价值极高，花姿优雅，玲珑可爱，花色鲜艳，气味芳香，被喻为“四大观赏洋花”之一，即可作切花，也可盆栽观赏。竹叶石斛的种子非常细小，自然条件下极难萌发，而传统的分株繁殖和扦插繁殖方法速度较慢，难于满足市场需求。采用植物组织培养技术是大量繁殖种苗的有效途径，但是却未见有关竹叶石斛的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述不足，克服现有技术的缺陷，提供一种竹叶石斛种子快速繁殖方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段；具体步骤如下：步骤(1)、预处理阶段：竹叶石斛的成熟果荚表面依次用75％酒精、0.1wt％升汞消毒，再用无菌水处理，再将果荚浸入75％酒精，取出除去果荚表面水分，置于灭过菌的接种盘中，切开果荚，取出种子；步骤(2)、种子萌发培养阶段：将种子接种于种子萌发培养基中萌发，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d；培养40d～50d得到原球茎；所述的种子萌发培养基为1/2MS培养基；>步骤(3)、原球茎分化培养阶段：原球茎采用原球茎分化培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d，培养50～60d使原球茎分化出竹叶石斛小苗；步骤(4)、生根壮苗培养阶段：原球茎分化培养阶段得到的竹叶石斛小苗采用生根壮苗培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d，培养40d～50d得到组培苗。作为竹叶石斛种子快速繁殖方法进一步优选的技术方案，还包括炼苗移栽阶段：培养在三角瓶中的组培苗在自然光条件下炼苗7d后，先半打开封口膜1d，再完全开瓶炼苗2d；取出组培苗，用清水洗净组培苗根部残留的培养基，并用0.1mg/LNAA水溶液蘸根2～3min，然后移栽至木屑：草炭＝3：1的基质中，根部封土，浇透水，罩上塑料膜进行保温保湿；1周后，撤去塑料膜，并逐渐加大通风、增强光照，注意通风和温湿度的控制，湿度控制在75～90％，温度为20～28℃。1个月后成活率高达90％，完成竹叶石斛种子快速繁殖。步骤(1)中，用75％酒精擦拭成熟果荚表面，然后用0.1wt％升汞处理10min，再用无菌水处理3-5次；再将成熟果荚浸入75％酒精中30s，取出用灭过菌的滤纸吸干果荚表面的水分，置于灭过菌的接种盘中，冷却后切开果荚，取出种子。步骤(3)中，所述的原球茎分化培养基以1/2MS培养基为基础培养基，加入6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)，其中6-BA的浓度为0.5～2.0mg/L，NAA的浓度为0.1～0.5mg/L，原球茎分化培养基的pH值为5.8-6.0；培养基配制完成后放入高温灭菌炉中121℃灭菌20min。作为优选，所述的原球茎分化培养基中6-BA的浓度为2.0mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L。步骤(4)中，所述的生根壮苗培养基以1/2MS培养基为基础培养基，加入NAA，NAA的浓度为0.1～1.0mg/L；生根壮苗培养基的pH值为5.8～6.0；培养基配制完成后放入高温灭菌炉中121℃灭菌20min。作为优选，所述的生根壮苗培养基中NAA的浓度为0.1～0.7mg/L；作为进一步优选，所述的生根壮苗培养基中NAA的浓度为0.7mg/L。作为另一个替代方案，所述的生根壮苗培养基以1/2MS培养基为基础培养基，加入IBA，IBA的浓度为0.1-1.0mg/L；生根壮苗培养基的pH值为5.8-6.0；培养基配制完成后放入高温灭菌炉中121℃灭菌20min。优选的，所述的IBA的浓度为0.1mg/L。所述的组培苗的苗长为3cm以上，根数为2～3条，根系达1～2cm。所述的1/2MS培养基的配置方法为，大量元素母液配制成50倍，其中CaCl2·2H2O需要单独配制置于另一小口瓶中；有机物质、微量元素及Fe盐母液分别配制成100倍，其中Fe盐母液需放置在棕色瓶中保存；蔗糖的质量浓度为30g/L，琼脂的质量浓度7.0g/L；培养基的pH5.8-6.0，配制时根据配制的体积和浓缩的倍数量取所需量；配制完成后放入高温灭菌炉中121℃灭菌20min，放在4℃低温冰箱中保存，保存期限最长1个月左右，如果母液中出现絮状物质时，需重新配制。具体配置方式如表1所示：表11/2MS培养基配置表本专利技术的有益效果：本专利技术提供的竹叶石斛种子快速繁殖方法，是利用植物组织培养技术，将竹叶石斛种子繁殖分为四个阶段，即预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段，考虑到不同阶段培养上的差异性，后三个阶段采用了不同的培养基进行培养，1/2MS更好的满足了种子萌发、原球茎分化和生根壮苗阶段的营养需求，并且结合每个阶段植物组织的成长，在原球茎分化培养阶段和生根壮苗中另外加入物质，来有效调节植物组织的进一步生长。本专利技术提供的竹叶石斛种子快速繁殖方法，在种子萌发阶段，种子萌发率高达95％，45d即可出现大量原球茎；在原球茎分化阶段，分化出小苗的时间控制在60d以内，最优可到50d；在生根壮苗培养阶段，45d左右组培苗长到3cm以上，根的条数为2条以上。从种子萌发到无菌苗生根，达到炼苗移栽要求，这一周期的时间在150d左右，大大加快了竹叶石斛种子繁殖速度，为竹叶石斛的快速生产提供了便利。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术的优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。实施例1一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段，具体步骤如下：步骤(1)、预处理阶段，步骤如下：用75％酒精擦拭成熟果荚表面，然后0.1％升汞处理10min，再用无菌水处理3次；将经前述处理的成熟果荚浸入75％酒精中30s，取出用灭过菌的滤纸吸干果荚表面的水分，置于灭过菌的接种盘中，冷却后切开果荚，取出种子；步骤(2)、种子萌发培养阶段：将种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，其特征在于：包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段，具体步骤如下：步骤(1)、预处理阶段：竹叶石斛的成熟果荚表面依次用75％酒精、0.1wt％升汞消毒，再用无菌水处理，再将果荚浸入75％酒精，取出除去果荚表面水分，置于灭过菌的接种盘中，切开果荚，取出种子；步骤(2)、种子萌发培养阶段：将种子接种于种子萌发培养基中萌发，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d；培养40d～50d得到原球茎；所述的种子萌发培养基为1/2MS培养基；步骤(3)、原球茎分化培养阶段：原球茎采用原球茎分化培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d，培养50～60d使原球茎分化出竹叶石斛小苗；步骤(4)、生根壮苗培养阶段：原球茎分化培养阶段得到的竹叶石斛小苗采用生根壮苗培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d，培养40d～50d得到组培苗。

【技术特征摘要】
1.一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，其特征在于：包括预处理阶段、种子萌发培养阶
段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段，具体步骤如下：
步骤(1)、预处理阶段：竹叶石斛的成熟果荚表面依次用75％酒精、0.1wt％升汞消毒，
再用无菌水处理，再将果荚浸入75％酒精，取出除去果荚表面水分，置于灭过菌的接种盘
中，切开果荚，取出种子；
步骤(2)、种子萌发培养阶段：将种子接种于种子萌发培养基中萌发，培养温度为
25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d；培养40d～50d得到原球茎；
所述的种子萌发培养基为1/2MS培养基；
步骤(3)、原球茎分化培养阶段：原球茎采用原球茎分化培养基进行培养，培养温度为
25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d，培养50～60d使原球茎分化
出竹叶石斛小苗；
步骤(4)、生根壮苗培养阶段：原球茎分化培养阶段得到的竹叶石斛小苗采用生根壮苗
培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d，培
养40d～50d得到组培苗。
2.根据权利要求1所述的竹叶石斛种子快速繁殖方法，其特征在于：还包括炼苗移栽
阶段：培养在三角瓶中的组培苗在自然光条件下炼苗7d后，先半打开封口膜1d，再完全开
瓶炼苗2d；取出组培苗，用清水洗净组培苗根部残留的培养基，并用0.1mg/LNAA水溶液
蘸根2～3min，然后移栽至木屑：草炭＝3：1的基质中，根部封土，浇透水，罩上塑料膜进

【专利技术属性】
技术研发人员：许泉，周年英，张磊，刘欣，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32