用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基、丛生芽培养基及胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基、丛生芽培养基及胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法，MS培养基的组分包括NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H2BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·5H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2‑EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、甘氨酸、盐酸吡哆醇和盐酸硫胺素。丛生芽培养基在MS培养基的基础上组分还包括6‑BA、NAA、2,4‑D、TDZ、KT、蔗糖和琼脂。所述方法步骤包括无菌外植体的获取、初代培养、继代培养、壮苗培养、生根培养及炼苗移栽。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基、丛生芽培养基及胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
胭脂萝卜系十字花科（Brassicaceae）萝卜属（Raphanus）二年生蔬菜作物，又名涪陵红心萝卜，是重庆市涪陵特产，质地致密，心皮全红，以其肉质根为原料提取的天然萝卜红色素含量、品质和溶解性均优于其它红萝卜，色价远高于国家标准水平，在食品、酒类、饮料和化妆品领域有着广阔的应用前景。当前胭脂萝卜以有性繁殖为主，内生病菌感染严重，产量低，品种退化，导致萝卜红色素生产供应不足，而目前胭脂萝卜红色素合成分子机理尚不清楚。因此，需要寻找一种保持优良性状、快速而适合于胭脂萝卜繁殖的方法。然而当前还未见有对胭脂萝卜组织培养相关的研究报道。与此同时，现有的组织培养用培养基并不适用于胭脂萝卜的组织培养，不能诱导萝卜产生愈伤组织和丛生芽，在萝卜组织培养方面存在着繁殖系数低、生根率低、叶片再生困难等问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述不足，本专利技术要解决的技术问题是：针对现有胭脂萝卜以有性繁殖为主，萝卜组织培养方面存在着繁殖系数低、生根率低、叶片再生困难的不足之处，而提供一种繁殖速度快、变异率低、能保持胭脂萝卜优良性状的用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基、丛生芽培养基及胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基，所述MS培养基的溶剂为水，溶质的组分包括MS无机物和MS有机添加物；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS无机物：NH4NO31320~1980mg、KNO31520~2280mg、CaCl2·2H2O352~528mg、MgSO4·7H2O298~442mg、KH2PO4136~204mg、KI0.664~0.996mg、H2BO34.96~6.4mg、MnSO4·4H2O17.84~26.76mg、ZnSO4·7H2O6.88~10.32mg、Na2MoO4·5H2O0.20~0.30mg、CuSO4·5H2O0.020~0.030mg、CoCl2·6H2O0.025~0.030mg、FeSO4·7H2O22.24~33.40mg和Na2-EDTA·2H2O29.84~44.76mg；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS有机添加物：肌醇80~120mg、烟酸0.4~0.6mg、甘氨酸1.6~2.4mg、盐酸吡哆醇0.4~0.6mg和盐酸硫胺素0.08~0.12mg。本专利技术针对萝卜组织培养难以形成愈伤组织，不容易生芽，现有的MS培养基中成分和各成分的浓度难以诱导萝卜产生愈伤组织、诱导出芽率较低的技术问题，而提供了一种胭脂萝卜组织培养用MS培养基，具体地，本专利技术MS培养基中矿质营养元素的种类选择更加适合于胭脂萝卜生长，更能保证萝卜组织生长需求，且本专利技术MS培养基中通过氮、磷、钾、钴、维生素之间的协同配伍作用，能够满足胭脂萝卜在营养上和生理上对细胞脱分化的要求，为胭脂萝卜愈伤组织产生提供能量，能够促进加速胭脂萝卜愈伤组织的生长，采用本专利技术MS培养基对多种分类的胭脂萝卜都具有愈伤组织诱导效果，解决了现有MS培养基不能够使胭脂萝卜产生愈伤组织的技术问题。进一步，每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS无机物：NH4NO31650mg、KNO31900mg、CaCl2·2H2O440mg、MgSO4·7H2O370mg、KH2PO4170mg、KI0.83mg、H2BO36.2mg、MnSO4·4H2O22.3mg、ZnSO4·7H2O8.6mg、Na2MoO4·5H2O0.25mg、CuSO4·5H2O0.025mg、CoCl2·6H2O0.025mg、FeSO4·7H2O27.8mg和Na2-EDTA·2H2O37.3mg；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS有机添加物：肌醇100mg、烟酸0.5mg、甘氨酸2mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.4mg。采用这样优选方案的MS培养基，能够更加满足胭脂萝卜生长所需要的营养元素要求，能够更加促进愈伤组织的产生，使产生的愈伤组织更容易被诱导产生丛生芽，保证了胭脂萝卜的后续组织培养顺利进行。一种胭脂萝卜组织培养用丛生芽诱导培养基，所述丛生芽诱导培养基为所述MS培养基+2~6mg/L6-BA+0.05~0.2mg/LNAA+0.05~0.2mg/L2,4-D+0.5~3mg/LTDZ+0.05~0.2mg/LKT+20~30g/L蔗糖+6~8g/L琼脂，培养基pH值为5.8~6.2。本专利技术采用上述MS培养基作为基本培养基，并辅以其他细胞分裂素、生长类物质或营养物质的作用，特别是通过6-BA、NAA和TDZ成分含量之间的协同配伍作用，诱导愈伤组织产生丛生芽，诱导时间短，仅2~4周即可从茎尖诱导形成丛生芽，诱导效率高达95%。一种胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法，先将预处理并灭菌后的胭脂萝卜种子接种于无菌苗培养基上诱导培养获得无菌苗，取无菌苗的茎尖接种于上述丛生芽诱导培养基上进行初代培养诱导产生丛生芽，对丛生芽接种于继代增殖培养基上进行继代培养获得增殖苗，将增殖苗壮苗分离成单苗后转接于壮苗培养基上壮苗培养得到健壮苗，将健壮苗转移到生根培养基上培养获得生根幼苗，对生根幼苗进行练苗处理后，将幼苗移栽到土壤中进行繁殖，获得胭脂萝卜；其中，所述无菌苗培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基的组分中均包括上述MS培养基。本专利技术采用丛生芽途径进行胭脂萝卜的组织培养，先以预处理和灭菌后的胭脂萝卜种子作为组织培养的原材料，然后将种子接种于以上述MS培养基为主要组分的无菌苗培养基上，使胭脂萝卜在该培养基上脱分化诱导产生愈伤组织无菌苗，随后将无菌苗的茎尖接种于上述丛生芽诱导培养基上，在丛生芽诱导培养基中生长素和细胞分裂素的协同配伍作用下诱导产生丛生芽，继而将丛生芽接种于继代增殖培养基上继代增殖培养产生大量增殖苗，为了避免多代增殖后苗短小、细弱，生根培养成活率不高的问题，本专利技术选取增殖苗中生长较好的壮苗接种于壮苗培养基上进行壮苗处理，将得到的健壮苗转移到生根培养基上在培养基上诱导生根，扩大根系的吸收面积，增强根系的吸收能力，减少试管苗对异养条件的依赖提高后续移栽成活率，对生根后的苗进行练苗处理，增强试管苗对外界生长环境的适应能力和抵抗能力，而后将练苗后的苗移栽到土壤中进行繁殖，完成对胭脂萝卜的组织培养快速繁殖。本专利技术胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法繁殖系数高，繁殖速度快，能够保证胭脂萝卜的优良性状，变异率低。进一步，所述预处理为将胭脂萝卜种子在20~25℃下浸泡12~24h；所述灭菌为将预处理后的胭脂萝卜种子置于超净工作台上，先用体积浓度为70~75%的乙醇水溶液处理20~30s，然后用无菌水清洗至少2次，再用质量浓度为0.1~2%的升汞溶液灭菌处理10~15min，最后用无菌水洗涤至少4次。本专利技术采用这样的预处理方法，可以使胭脂萝卜种子全部浸透，促进种子发芽整齐，提高种子的发芽率，采用这样的灭菌方法对胭脂萝卜种子进行灭菌处理，避免了种子因染菌而导致的后期无法培养，影响培养效果的问题。作为优化，所述继代增殖培养基为上述MS培养基+2~4mg\本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基，其特征在于，所述MS培养基的溶剂为水，溶质的组分包括MS无机物和MS有机添加物；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS无机物：NH4NO3 1320~1980mg、KNO3 1520~2280mg、CaCl2·2H2O 352~528mg、MgSO4·7H2O 298~442mg、KH2PO4 136~204mg、KI 0.664~0.996mg、H2BO3 4.96 ~6.4mg、MnSO4·4H2O 17.84~26.76mg、ZnSO4·7H2O 6.88 ~10.32mg、Na2MoO4·5H2O0.20~0.30mg、CuSO4·5H2O 0.02 0~0.030mg、CoCl2·6H2O 0.025 ~0.030mg、FeSO4·7H2O 22.24~33.40mg和Na2‑EDTA·2H2O 29.84~44.76mg；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS有机添加物：肌醇80 ~120mg、烟酸0.4 ~0.6mg、甘氨酸1.6~2.4mg、盐酸吡哆醇0.4~0.6mg和盐酸硫胺素0.08~0.12mg。

【技术特征摘要】
1.一种用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基，其特征在于，所述MS培养基的溶剂为水，溶质的组分包括MS无机物和MS有机添加物；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS无机物：NH4NO31320~1980mg、KNO31520~2280mg、CaCl2·2H2O352~528mg、MgSO4·7H2O298~442mg、KH2PO4136~204mg、KI0.664~0.996mg、H2BO34.96~6.4mg、MnSO4·4H2O17.84~26.76mg、ZnSO4·7H2O6.88~10.32mg、Na2MoO4·5H2O0.20~0.30mg、CuSO4·5H2O0.020~0.030mg、CoCl2·6H2O0.025~0.030mg、FeSO4·7H2O22.24~33.40mg和Na2-EDTA·2H2O29.84~44.76mg；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS有机添加物：肌醇80~120mg、烟酸0.4~0.6mg、甘氨酸1.6~2.4mg、盐酸吡哆醇0.4~0.6mg和盐酸硫胺素0.08~0.12mg。2.根据权利要求1所述用于胭脂萝卜组织培养的MS培养基，其特征在于，每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS无机物：NH4NO31650mg、KNO31900mg、CaCl2·2H2O440mg、MgSO4·7H2O370mg、KH2PO4170mg、KI0.83mg、H2BO36.2mg、MnSO4·4H2O22.3mg、ZnSO4·7H2O8.6mg、Na2MoO4·5H2O0.25mg、CuSO4·5H2O0.025mg、CoCl2·6H2O0.025mg、FeSO4·7H2O27.8mg和Na2-EDTA·2H2O37.3mg；每升所述MS培养基中包括如下组分含量的MS有机添加物：肌醇100mg、烟酸0.5mg、甘氨酸2mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.4mg。3.一种胭脂萝卜组织培养用丛生芽诱导培养基，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基为权利要求1或2所述MS培养基+2~6mg/L6-BA+0.05~0.2mg/LNAA+0.05~0.2mg/L2,4-D+0.5~3mg/LTDZ+0.05~0.2mg/LKT+20~30g/L蔗糖+6~8g/L琼脂，培养基pH值为5.8~6.2。4.一种胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，先将预处理并灭菌后的胭脂萝卜种子接种于无菌苗培养基上诱导培养获得无菌苗，取无菌苗的茎尖接种于权利要求3所述丛生芽诱导培养基上进行初代培养诱导产生丛生芽，对丛生芽接种于继代增殖培养基上进行继代培养获得增殖苗，将增殖苗壮苗分离成单苗后转接于壮苗培养基上壮苗培养得到健壮苗，将健壮苗转移到生根培养基上培养获得生根幼苗，对生根幼苗进行练苗处理后，将幼苗移栽到土壤中进行繁殖，获得胭脂萝卜；其中，所述无菌苗培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基的组分中均包括权利要求1或2所述MS培养基。5.根据权利要求4所述胭脂萝卜的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述预处理为将胭脂萝卜种子在20~25℃下浸泡12~24h；所述灭菌为将预处...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈发波，刘毅，杨柳，杨帆，汪继华，陈平，徐利婷，李春柳，
申请(专利权)人：长江师范学院，
类型：发明
国别省市：重庆;50