瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开了瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途。该制备方法包括下述步骤：(1)将瓜蒌皮注射液浓缩物与硅胶混合拌样，然后进行硅胶正相柱层析，先用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(3～4)作为洗脱剂进行洗脱，然后用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(1～1.5)作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到层析物；(2)将步骤(1)得到的层析物与甲醇混合，室温搅拌，降温至0～4℃，过滤，所得滤饼与水混匀后过滤，所得固体即为香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷。本发明专利技术的制备方法得到的化合物含量稳定均一，可以作为瓜蒌皮注射液质量控制的一个指标。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物领域，具体涉及瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途。
技术介绍
瓜蒌(拉丁学名：TrichosantheskirilowiiMaxim.)的根(中药名天花粉)、果肉(中药名栝楼实)、果皮(中药名栝楼皮)、种子(中药名栝楼仁)都是有名的中药。其中瓜蒌皮被做成注射液(瓜蒌皮注射液，上海上药第一生化药业有限公司)，凭其优良的品质和疗效，在国内被广泛用于心绞痛，冠心病等。作为一种常见中药，瓜蒌皮化学成分非常复杂，其真正有效成分至今没有明确，现有文献公开了一些瓜蒌皮化学成分，如：《瓜蒌果皮化学成分》(山东中医药大学博士学位论文，李爱峰，2011)对瓜蒌皮化学成分进行了详尽的综述和分析，在做水溶性化学成分分离时，其选用826型树脂分离得到极性相对较小的化合物；李爱峰等人的专利：一种从瓜蒌皮中分离纯化4种核苷类化学成分的方法(CN103304613A)、一种从瓜蒌皮中分离纯化5种嘌呤及嘧啶碱基的方法(CN103304490A)、一种从瓜蒌皮中分离纯化3种黄酮苷的方法(CN103304611A)等通过反相制备液相色谱，也对瓜蒌皮化学成分进行了研究。然而，上述文献所用方法与瓜蒌皮注射液工业化制备工艺相去甚远，因而上述文献方法分离得到的化合物不能反映瓜蒌皮注射液的真实化学成分；另外，上述文献在反相柱层析前没有进行有效除糖和除色素操作，而瓜蒌中含有丰富的糖类和色素，会对色谱柱造成不可逆损坏，因此，该类方法不适用于工业化生产，且重复性差。作为一种中药注射液，也有许多文献对瓜蒌皮注射液化学成分进行过报道，瓜蒌皮注射液及其制备方法(专利CN1460493A)对瓜蒌皮注射液的生产工艺进行了描述：1、水提，2、75％乙醇沉淀，3、阳离子树脂分离，收集目标段馏分，进行浓缩即得瓜蒌皮注射液原液，明确说明了所得原液中主要成分为氨基酸。瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相指纹图谱测试方法(专利CN101059482A)对瓜蒌皮注射液的指纹图谱进行了公开和说明，作者用柱前衍生法对瓜蒌皮注射液中的主要氨基酸进行了控制。现有文献对瓜蒌皮注射液的化学成分研究还局限在氨基酸类成分。瓜蒌皮注射液应用越来越广泛，对其化学成分的分离和鉴定具有十分重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途。本专利技术的方法可以从瓜蒌皮中同时制备腺苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芦丁，并且提供了以腺苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芦丁为对照品控制瓜蒌皮注射液质量的方法。本专利技术的方法简单易行，重复性好，环保安全。本专利技术利用正相柱层析法对瓜蒌皮注射液中氨基酸进行分离时，意外发现水不溶性沉淀。对该沉淀重结晶，并进行结构鉴定，确定为香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷。本专利技术对柱层析方法优化，并进行进一步反相色谱柱分离，最终又得到化合物腺苷和芦丁。由于本发明进行反相层析前已用正相柱除去色素和糖类，故本专利技术可大量制备腺苷和芦丁，为后续的质量控制提供充足的原料。本专利技术是通过以下技术方案实现上述目的的：本专利技术提供瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法，其包括下述步骤：(1)将瓜蒌皮注射液浓缩物与硅胶混合拌样，然后进行硅胶正相柱层析，先用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(3～4)作为洗脱剂进行洗脱，然后用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(1～1.5)作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到层析物；(2)将步骤(1)得到的层析物与甲醇混合，室温搅拌，降温至0～4℃，过滤，所得滤饼与水混匀后过滤，所得固体即为香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷。其中，所述的瓜蒌皮注射液浓缩物是指将瓜蒌皮注射液减压浓缩至无液滴滴下得到的物质。其中，所述的瓜蒌皮注射液可为本领域常规的瓜蒌皮注射液，较佳地通过下述步骤制得：将瓜蒌皮与水混合后，常压下回流提取3～4次，合并提取液；减压浓缩，加入质量百分比浓度为90％～95％的乙醇，加至乙醇质量百分比为70％～75％，静置，过滤，得上清液；上清液上阳离子交换树脂柱，用水洗涤，然后用氨水作为洗脱剂进行洗脱，将洗脱液用酸调节pH至3.5～4，冷藏过夜，过滤即得瓜蒌皮注射液。其中，所述的减压浓缩较佳地为减压浓缩至瓜蒌皮的原料重量的0.75～2倍。其中，所述的阳离子交换树脂柱中的阳离子交换树脂较佳地为购自于上海树脂厂的732型强酸性阳离子交换树脂。其中，所述的水较佳地为去离子水。其中，所述的氨水的浓度较佳地为1～2mol/L。其中，所述的冷藏的温度较佳地为0～3℃。其中，步骤(1)中，瓜蒌皮注射液浓缩物与硅胶混合拌样中，所述的瓜蒌皮注射液浓缩物与所述的硅胶的质量比较佳地为1：(1～2)。其中，步骤(1)中，硅胶正相柱层析中，所述的硅胶的用量为较佳地瓜蒌皮注射液浓缩物质量的5～20倍。其中，步骤(1)中，所述的用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(3～4)作为洗脱剂进行洗脱较佳地为洗脱3～5个柱体积。步骤(1)中，所述的硅胶的目数较佳地为100～200目。步骤(1)的柱层析不仅能将目标化合物进行富集，还能将吸附性较大的色素和糖类化合物保留在硅胶柱上，以免损坏后面操作中的反相色谱柱。步骤(2)中，所述的层析物与甲醇的质量比较佳地为1：(100～150)。步骤(2)中，所述的甲醇较佳地为无水甲醇。步骤(2)中，所述的水较佳地为50～80℃的热水。本专利技术还提供了香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷作为对照品在检测药品中香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷含量的应用。其中，所述的药品较佳地为瓜蒌皮注射液。其中，所述的应用较佳地包括下述步骤：将瓜蒌皮注射液和香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液分别进行高效液相色谱检测，根据香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品色谱图的保留时间确定瓜蒌皮注射液中相关物质的峰，并根据峰面积计算瓜蒌皮注射液中香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量。其中，所述的香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液较佳地为香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷与水、乙醇混合形成浓度为0.3mg/mL的溶液，水与乙醇的体积比为1：1。其中，所述的瓜蒌皮注射液即为前述制备方法制得的瓜蒌皮注射液。其中，所述的高效液相色谱的条件优选如下：色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱，进样量为20μL，洗脱条件如下：时间(min)A水(％)B乙腈(％)流速(mL/min)检测波长090101254nm59010本文档来自技高网...

【技术保护点】
瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法，其包括下述步骤：(1)将瓜蒌皮注射液浓缩物与硅胶混合拌样，然后进行硅胶正相柱层析，先用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(3～4)作为洗脱剂进行洗脱，然后用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(1～1.5)作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到层析物；(2)将步骤(1)得到的层析物与甲醇混合，室温搅拌，降温至0～4℃，过滤，所得滤饼与水混匀后过滤，所得固体即为香叶木素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷。

【技术特征摘要】
1.瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法，其包括下述步骤：
(1)将瓜蒌皮注射液浓缩物与硅胶混合拌样，然后进行硅胶正相柱层析，先用体积比为
甲醇：二氯甲烷＝1:(3～4)作为洗脱剂进行洗脱，然后用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(1～
1.5)作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到层析物；
(2)将步骤(1)得到的层析物与甲醇混合，室温搅拌，降温至0～4℃，过滤，所得滤饼与
水混匀后过滤，所得固体即为香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的瓜蒌皮注射液通过下述步骤制
得：将瓜蒌皮与水混合后，常压下回流提取3～4次，合并提取液；减压浓缩，加入质量百分比
浓度为90％～95％的乙醇，加至乙醇质量百分比为70％～75％，静置，过滤，得上清液；上清
液上阳离子交换树脂柱，用水洗涤，然后用氨水作为洗脱剂进行洗脱，将洗脱液用酸调节pH
至3.5～4，冷藏过夜，过滤即得瓜蒌皮注射液。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的减压浓缩为减压浓缩至瓜蒌皮的
原料重量的0.75～2倍；
和/或，所述的阳离子交换树脂柱中的阳离子交换树脂为购自于上海树脂厂的732型强
酸性阳离子交换树脂；
和/或，所述的水为去离子水；
和/或，所述的氨水的浓度为1～2mol/L；
和/或，所述的冷藏的温度为0～3℃。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，瓜蒌皮注射液浓缩物与硅胶
混合拌样中，所述的瓜蒌皮注射液浓缩物与所述的硅胶的质量比为1：(1～2)。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，硅胶正相柱层析中，所述的
硅胶的用量为瓜蒌皮注射液浓缩物质量的5～20倍；
和/或，步骤(1)中，所述的用体积比为甲醇：二...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁永雷，贾存宇，黄臻辉，
申请(专利权)人：上海上药第一生化药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31