一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法技术

本发明专利技术一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法，包括以下步骤：(1)磷脂酶印迹激活：(2)印迹磷脂酶固定化：加入硅藻土，充分震荡混匀、静置，完成固定化吸附；(3)冻干：(4)洗涤(5)脱溶：将洗涤好的酶粉进行真空干燥，除去残留的有机溶剂，得成品酶粉。本发明专利技术具有工艺简单，激活效果明显，生产成本低，能够提高酶催化活力及底物特异性，在油脂精炼应用中降低精炼油磷脂含量，提高成品油产率，具有很高的经济价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化工催化剂活化领域，特别涉及一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法。
技术介绍
磷脂酶(Phospholipase,EC3.1.1.4；EC3.1.1.3；EC3.1.4.4；EC3.1.1.5)是一大类具有重要价值的水解酶，具有催化磷脂类化合物的合成、水解、转酯、酯交换等多种反应的能力，是化工生产，医药合成及食品加工中最重要的酶之一。常见磷脂酶主要包括磷脂酶A1，磷脂酶A2，磷脂酶C，磷脂酶D等几类。例如磷脂酶A1和磷脂酶A2，能在油水界面上催化磷脂及甘油三酯α位和β位的酯水解、醇解、酯合成、酯交换等反应，在食品、化工，特别是油脂精炼等多个领域被广泛应用。磷脂酶C催化甘油与磷酸基团之间磷酸酯键等合成与断裂，主要用于油脂精炼行业。磷脂酶D催化磷脂中磷酸基团与碱基之间等水解、合成、转酯等，在医药化工行业中具有重要地位。对绝大部分常规酶来说，催化反应是在水溶液环境中进行的，有机溶剂能明显降低酶的催化能力，甚至使酶失活，但不少具有重要价值的产品的合成和...

【技术保护点】
一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)磷脂酶印迹激活：将磷脂酶溶解于含印迹因子的缓冲液中进行激活，印迹因子为磷脂或其衍生物；(2)印迹磷脂酶固定化：加入硅藻土，充分震荡混匀、静置，完成固定化吸附；(3)冻干：将完成固定化及抗冻保护的印迹磷脂酶进行预冻，再进行真空冷冻干燥呈粉末，即为固定化印迹磷脂酶粉；(4)洗涤：固定化印迹磷脂酶粉中加入洗涤液，充分涡旋振荡分散，静置后滤去溶剂，重复洗涤，洗去印迹因子；(5)脱溶：将洗涤好的酶粉进行真空干燥，除去残留的有机溶剂，得成品酶粉。

【技术特征摘要】
1.一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法，其特征在于，包括以
下步骤：
(1)磷脂酶印迹激活：将磷脂酶溶解于含印迹因子的缓冲液中进行激活，
印迹因子为磷脂或其衍生物；
(2)印迹磷脂酶固定化：加入硅藻土，充分震荡混匀、静置，完成固定化
吸附；
(3)冻干：将完成固定化及抗冻保护的印迹磷脂酶进行预冻，再进行真空
冷冻干燥呈粉末，即为固定化印迹磷脂酶粉；
(4)洗涤：固定化印迹磷脂酶粉中加入洗涤液，充分涡旋振荡分散，静置
后滤去溶剂，重复洗涤，洗去印迹因子；
(5)脱溶：将洗涤好的酶粉进行真空干燥，除去残留的有机溶剂，得成品
酶粉。
2.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法，
其特征在于，步骤(1)中缓冲液浓度为10～500mMol/L，激活条件为4～40℃、
2～30min。
3.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法，
其特征在于，步骤(1)中所述的印迹因子与缓冲液的体积比为1:10～250。
4.根据权利要求1所述的一种用于非水相环境催化的磷酯酶印迹激活方法，
其特征在于，步骤(1)中所述的缓冲液为柠檬酸或磷酸或Tris-HCl；所述磷脂
酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D中的一种；所述磷脂或其衍
生物为磷脂酸、磷脂钙盐、磷脂镁盐的一种。
5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑之明，李哲敏，王鹏，刘会，赵根海，王丽，王晗，孙小雯，吴荷芳，尉鸿飞，孙孝娟，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：安徽;34