烟叶中角鲨烯的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种烟叶中角鲨烯的检测方法。针对烟叶样品，本发明专利技术采用三氯甲烷作为提取溶剂，结合采用针对性的索氏提取，保障了较高的提取效率，再经过PSA柱净化处理后进行高效液相色谱法检测。本发明专利技术进一步优化了高效液相色谱检测条件，用于检测烟叶中角鲨烯时，色谱峰分离较好，具有准确、快速、高灵敏、重现性好、回收率高等优点，不仅符合定性要求，而且符合定量要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及烟叶中成分的检测
，更具体地，涉及一种基于高效液相色谱检测烟叶中所含角鲨烯的方法。
技术介绍
角鲨烯最初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学名称为2,6,10,15,19,23--六甲基--2,6,10,14,18,22--二十四碳六烯，属开链三萜类化合物。角鲨烯具有提高人体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体抗氧化性和免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能,是一种无毒性的具有防病治病作用的生物活性物质。最近研究发现角鲨烯对人体还具有解毒作用，可移除组织中的脂溶性毒素。2014年4月，国家烟草专卖局下发“关于”加快卷烟降焦减害技术成果推广应用的通知(国烟办综[2014]218号)，提出要加大卷烟减害技术重大专项研究成果的应用推广力度，要采取针对性技术措施加快卷烟降焦减害步伐。本申请人在烟叶天然抗氧化剂角鲨烯的生态累积与减害的研究工作，发现角鲨烯可以选择性地降低烟气中苯并芘、巴豆醛、NH3等有害成分，降低卷烟危害指数，同时角鲨烯具有清除烟气中的气相和固相自由基功能由于角鲨烯具有独特生理功能，目前开发利用角鲨烯已成为科技界研究的热点。但是，目前国内外还没有可参考的烟叶中角鲨烯定性和定量的检测方法，因此，在烟草行业建立烤烟中角鲨烯定性和定量的检测方法具有前瞻性，也是十分必要的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是填补现有烟叶中角鲨烯的检测技术不足，提供一种烟叶中角鲨烯的检测方法。本专利技术的技术方案通过以下技术方案予以实现：本专利技术以甲醇和乙腈为流动相，采用填有粒径5μm的高效固定相的柱色谱分离技术，优化高效液相色谱检测条件，将经本专利技术方法前处理后的样品注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，检测角鲨烯的吸收值，采用外标法，根据吸收峰面积计算其含量；具体地，提供一种烟叶中角鲨烯的检测方法，包括以下步骤：S1.样品前处理得到样品液，在经过硅胶净化处理后得到样品待测液；S2.配制标准溶液，建立标准曲线；S3.检测：吸取样品待测液注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器检测角鲨烯；S4.采用外标法，根据吸收峰面积计算其含量；其中，步骤S1所述样品前处理包括以下步骤：S11.烟叶切丝，以三氯甲烷作为提取溶剂，经索氏提取得到提取液；S12.将提取液经甲醇：水的体积比为70:30的萃取剂进行萃取，收集萃取液，进行旋转蒸发至近干，再用乙腈溶解，过0.22μm有机系膜，收集滤液得到样品液；S13.将步骤S12所得样品液过小柱净化处理，采用湿法装柱，小柱材料为0.06gPSA(N-丙基乙二胺固相吸附剂)和适量无水硫酸钠；步骤S3所述检测的条件为：Agilent1100高效液相色谱仪HPLC配紫外检测器；色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm；柱温：30℃；流动相类型：甲醇∶乙腈，体积比为75/25；流动相流速：1mL/min；检测波长为：210nm；进样量：10μL。优选地，步骤S2所述配制标准溶液的方法是准确称取0.1g角鲨烯标准品，精确至0.0001g，用乙腈溶解后定容至100mL配制成1000mg/L的角鲨烯标准溶液，充分振荡摇匀。优选地，步骤S2所述角鲨烯标准曲线的建立的方法是：采用系列稀释法，分别配制成浓度为0.002、0.01、0.05、0.2、0.5mg/mL的角鲨烯标准溶液于高效液相色谱进样检测；以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，求出角鲨烯浓度与相应峰面积的线性回归方程。优选地，步骤S11在加入三氯甲烷之前，先对烟丝进行涡旋处理，所述涡旋处理是涡旋1min，静止10min。优选地，所述涡旋处理的条件为2000r/min。优选地，步骤S11所述三氯甲烷的用量按照与烟丝的比例为5.0g烟丝：200mL三氯甲烷确定。优选地，步骤S11所述所述索氏提取的条件为40℃水浴，回流9个小时。优选地，步骤S12所述萃取剂的用量按照其与提取液体积比为1:1确定。优选地，步骤S12所述萃取的次数为3次。本专利技术在净化剂中加入适量的无水硫酸钠可以很好地防止溶液冲洗硅胶，造成凹凸不平。优选地，步骤S13所述无水硫酸钠为0.5g。本专利技术具有以下有益效果：现有研究表明，卷烟燃烧后的烟气中含有近5000种化合物，根据对烟叶的氯仿提取物进行化学分析，测得其中有300多种成分，而角鲨烯的含量很低，要对其进行快速准确的检测，需要建立科学系统的检测方法。本专利技术针对烟叶样品，建立了一种适用于烟叶中角鲨烯检测高效液相色谱法，采用三氯甲烷作为提取溶剂，结合采用索氏提取法，保障了较高的提取效率，在经过PSA柱的净化处理，在所述样品待测液的科学前处理技术条件下，进一步优化了检测条件，针对性解决样品中杂质峰处理问题，有效发挥高效液相色谱法准确、快速、高灵敏的优点，为检测烟叶中角鲨烯提供了一种色谱峰分离较好，准确、快速、高灵敏、重现性好、回收率高的检测方法，不仅符合定性要求，而且符合定量要求。附图说明图1角鲨烯标准曲线图。图2角鲨烯标准样品色谱图。图3用氯仿提取的未添加目标物样品色谱图。图4用氯仿提取的添加目标物样品色谱图。图5角鲨烯(50mg/L)标准溶液色谱图。图6本底样品色谱图。图7本底添加样品色谱图。图8角鲨烯标准溶液(5mg/L)色谱图。图9未经净化剂净化样品的色谱图。图10经PSA净化样品的色谱图。具体实施方式下面结合附图和具体实施例进一步说明本专利技术方法。下述实施例和附图仅用于示例性说明，不能理解为对本专利技术的限制。除非特别说明，下述实施例中使用的试剂原料为常规市购或商业途径获得的试剂原料，除非特别说明，下述实施例中使用的方法和设备为本领域常规使用的方法和设备。为方便说明，本专利技术实施例中使用的仪器和试剂说明如下，但并不因此限定本专利技术。仪器：(1)高效液相色谱仪HPLC(Agilent1100)，配备：脱气泵、四元泵、自动进样器、柱温箱和紫外检测器(美国Agilent公司)(2)摇床振荡器：SHZ-82AB型(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)(3)台秤：T-10000型，d＝0.1g(美国双杰兄弟(集团)有限公司)(4)电子天平：BSA224S型，d＝0.1mg(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)(5)旋转真空蒸发器：RE5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟叶中角鲨烯的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.样品前处理得到样品液，在经过硅胶净化处理后得到样品待测液；S2.配制标准溶液，建立标准曲线；S3.检测：吸取样品待测液注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器检测角鲨烯；S4.采用外标法，根据吸收峰面积计算其含量；其中，步骤S1所述样品前处理包括以下步骤：S11.烟叶切丝，以三氯甲烷作为提取溶剂，经索氏提取得到提取液；S12.将提取液经甲醇：水的体积比为70:30的萃取剂进行萃取，收集萃取液，进行旋转蒸发至近干，再用乙腈溶解，过0.22µm有机系膜，收集滤液得到样品液；S13. 将步骤S12所得样品液过小柱净化处理，采用湿法装柱，小柱材料为0.06gPSA和适量无水硫酸钠；步骤S3所述检测的条件为：Agilent1100高效液相色谱仪HPLC配紫外检测器；色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm；柱温：30℃；流动相类型：甲醇∶乙腈，体积比为75/25；流动相流速：1 mL/min；检测波长为：210 nm；进样量：10 µL。

【技术特征摘要】
1.一种烟叶中角鲨烯的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.样品前处理得到样品液，在经过硅胶净化处理后得到样品待测液；
S2.配制标准溶液，建立标准曲线；
S3.检测：吸取样品待测液注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器检测角鲨烯；
S4.采用外标法，根据吸收峰面积计算其含量；
其中，步骤S1所述样品前处理包括以下步骤：
S11.烟叶切丝，以三氯甲烷作为提取溶剂，经索氏提取得到提取液；
S12.将提取液经甲醇：水的体积比为70:30的萃取剂进行萃取，收集萃取液，进行旋转蒸发至近干，再用乙腈溶解，过0.22μm有机系膜，收集滤液得到样品液；
S13.将步骤S12所得样品液过小柱净化处理，采用湿法装柱，小柱材料为0.06gPSA和适量无水硫酸钠；
步骤S3所述检测的条件为：
Agilent1100高效液相色谱仪HPLC配紫外检测器；
色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm；
柱温：30℃；
流动相类型：甲醇∶乙腈，体积比为75/25；
流动相流速：1mL/min；
检测波长为：210nm；
进样量：10μL。
2.根据权利要求1所述烟叶中角鲨烯的检测方法，其特征在于，步骤S2所述配制标准溶液的方法是准确称取0.1g角鲨烯标准品，精确至0.0001g，用乙腈溶解后定容至100mL配制成1000mg/L的角...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑荣豪，万树青，张功营，陈泽鹏，覃荣，韦建玉，
申请(专利权)人：中国烟草总公司广东省公司，华南农业大学，广西中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广东;44