一种调味品中色素的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种调味品中色素的检测方法，所述方法为：(1)将样品进行前处理，得到上样液；(2)用UPLC‑MS/MS方法对上样液进行测定，并和标准溶液的测定结果进行比对分析。本发明专利技术所述检测方法，通过正负离子切换的方式进行定性定量分析，可同时对色素的阴、阳离子进行检测，解决了现在违禁色素检测模式单一、检测种类有限的技术难题；加上QuEChERS净化方法去除样品中的油脂，有效地改善了色素检测中复杂的前处理过程，简便快速，与以往多个方法的检测方法相比，分析时间短，灵敏度高，检测效率得到了根本性的提升，大大缩短了检测周期。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种色素的检测方法，尤其涉及一种调味品中色素的检测方法。
技术介绍
色素可以分为天然色素和合成色素。天然色素着色力和耐光性较差，因此合成色素更受人们的青睐。根据《食品添加剂使用标准(GB2760-2014)》，我国仅允许使用柠檬黄、胭脂红等11种合成色素。然而合成色素种类繁多，一些不法商家为了增强着色效果，在调味品中添加我国明令禁止使用的色素，如苏丹红、罗丹明B、碱性橙等，这些违禁色素经人体代谢后可生成萘胺等致癌性物质，长期摄入会对人体造成损害。违禁色素的检测方法主要包括高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法。对于复杂基质样品，高效液相色谱法容易受到天然色素的干扰；而高效液相色谱串联质谱法特异性强，灵敏度高，受到的干扰较少。在高效液相色谱串联质谱法检测违禁色素方面，目前检测模式较为单一，通常只能采用正离子模式或者负离子模式进行检测，而且样品前处理过程复杂，需要耗费大量的时间。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种前处理简单、能同时检测调味品中多达49种违禁色素、且检测准确度高的方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种调味品中色素的检测方法，所述方法包括如下步骤：(1)将样品进行前处理，得到上样液；(2)采用UPLC-MS/MS方法对步骤(1)得到的上样液进行测定，并和标准溶液的测定结果进行比对分析；其中，高效液相色谱条件为：a)色谱柱：C18柱，100mm×3.0mm，粒径2.6μm；b)流动相A为乙腈；流动相B为5～15mmol/L乙酸铵溶液；流速为0.3～0.7mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；质谱检测条件为：采用电喷雾离子源，正、负离子切换模式，电喷雾离子源温度为400～550℃；多反应监测模式；CAD碰撞气；气帘气压力为15～25psi；雾化气压力为50～60psi；辅助加热气压力为50～60psi。优选地，所述高效液相色谱条件为：a)色谱柱：菲罗门KinetexC18柱，100mm×3.0mm，粒径2.6μm；b)流动相A为乙腈；流动相B为10mmol/L乙酸铵溶液；流速为0.5mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；c)柱温：40℃；d)进样量：10μL；所述质谱检测条件为：采用电喷雾离子源，正、负离子切换模式，电喷雾离子源温度为500℃；多反应监测模式；气帘气压力：20psi；雾化气压力：55psi；辅助加热气压力：55psi；CAD碰撞气：高强度。本专利技术所述UPLC-MS/MS方法高效液相色谱串联质谱法，具有高灵敏度和高选择性的优势，可以同时检测调味品中多种违禁色素。优选地，所述前处理包括如下步骤：(1)色素提取按照每克调味品加入2.5mL提取剂的比例，将提取剂加至调味品中，混合均匀，离心，回收上清液；重复提取一次，合并提取液；(2)QuEChERS方法净化提取液向步骤(1)得到的提取液中加入C18吸附剂，再进行离心，取上清液用水稀释后过0.22μm有机滤膜，得到上样液。更优选地，所述前处理包括如下步骤：(1)色素提取称取2g样品到50mL离心管中，加入5mL提取剂，漩涡混合均匀；将离心管以4500r/min的转速离心5min，回收上清液；重复提取一次，合并提取液；(2)QuEChERS方法净化提取液取1mL步骤(1)得到的提取液于2mL离心管中，加入吸附剂，涡旋1min，以8000r/min的转速离心2min，取0.2～0.4mL上清液，用水稀释至1mL，过0.22μm有机滤膜后，得到上样液。本专利技术所述QuEChERS(Quick,Easy,Cheap,Effective,RuggedandSafe)方法快速、简便、成本低廉、易于操作。本专利技术方法采用改进的QuEChERS方法处理样品，使调味品中的49种违禁色素同时提取、净化，同时简化了样品处理步骤，具有高效、快速、成本低、操作简便等优势，净化效果好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。优选地，所述步骤(1)中的提取剂为乙腈和甲醇的混合物，所述提取剂中乙腈的体积百分比为20％～80％。更优选地，所述提取剂中乙腈的体积百分比为50％。本专利技术所述提取剂，能同时兼顾极性和非极性色素，很好的对色素进行分离提取，提取率高，有利于提高检测的准确性。优选地，所述步骤(2)中提取液用水稀释时，提取液和水的体积比为1:2.5～1:5。本专利技术按照所述比例对样品提取液进行稀释，可有效改善目标色素峰型，减少溶剂效应，有利于提高检测的准确性。优选地，所述步骤(2)中的有机滤膜为聚四氟乙烯滤膜。聚四氟乙烯滤膜具有极强的化学兼容性，几乎能胜任所有的有机溶剂和强腐蚀化学品的过滤，并且不会对色素产生吸附。在本专利技术中，将提取液通过聚四氟乙烯滤膜进行过滤，能对提取液起到很好的净化效果。优选地，所述调味品中的色素包括酸性蓝1、酸性橙II、碱性嫩黄O、碱性绿1、罗丹明B、结晶紫、苏丹橙G、苏丹黄、苏丹红7B、对位红、溶剂黄13、苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV、二乙基黄、酸性红1、酸性红73、专利蓝V、橙黄IV、碱性橙21、硫黄素T、苏丹红G、分散橙37、分散橙1、分散红1、分散橙3、分散橙11、碱性红14、碱性蓝1、碱性紫2、碱性紫7、碱性橙22、酸性红52、酸性橙20、藏花橙G、酸性蓝3、酸性绿16、酸性绿A、溶剂黄1、溶剂黄3、溶剂橙2、甲基橙、萘基红、4-羟基偶氮苯、4-羟基-4-二甲氨基偶氮苯、罗丹明6G、分散黄3、柑橘红2。优选地，以体积百分比计，所述梯度洗脱条件为：0～2.5min，10％～40％A；2.5～4.7min，40.0％A；4.7～7.0min，40％～90％A；7.0～12.0min，90％A；12.0～12.1min，10％A；12.1～17.0min，10％A；各洗脱时间段中均以流动相B补足余下的体积百分比。本专利技术技术方案中流动相A为乙腈，流动相B为10mmol/L乙酸铵溶液，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.5mL/min；初始流动相比例为10:90(A:B体积比)，到2.5min时流动相比例变为40:60，到7min时流动相比例变为90:10，12.1min时流动相比例又变为10:90，这个比例一直维持到17min，因此，本专利技术色谱柱和流动相的选择对调味品中违禁色素达到了优异的分离效果，进一步保证了本专利技术检测方法的准确性。优选地，所述电喷雾离子源在0～4.1min为负离子模式，喷雾电压为-4500V；在4.1～16.0min为正离子模式，喷雾电压为5500V。本专利技术采用正负离子两种不同的模式进行切换检测方法，同时对色素的阴、阳离子进行检测，解决了现在违禁色素检测模式单一、检测种类有限的技术难题，通用性强、检测对象覆盖范围宽，降低了漏检风险，缩短了检测周期。相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：本专利技术采用液相色谱结合质谱法对调味品中多达49种违禁色素进行检测，采用正负离子切换模式，同时对色素的阴、阳离子进行检测，解决了现在违禁色素检测模式单一、检测种类有限的技术难题，通用性强、检测对象覆盖范围宽，具有高速、高效、高分辨、微量检测及分析自动化的性能和技术优势，降低了漏检风险；加上QuEChERS净化方法去除样品中的油脂，有效地改善了色素检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种调味品中色素的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将样品进行前处理，得到上样液；(2)用UPLC‑MS/MS方法对步骤(1)得到的上样液进行测定，并和标准溶液的测定结果进行比对分析；其中，高效液相色谱条件为：a)色谱柱：C18柱，100mm×3.0mm，粒径2.6μm；b)流动相A为乙腈；流动相B为5～15mmol/L乙酸铵溶液；流速为0.3～0.7mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；质谱检测条件为：采用电喷雾离子源，正、负离子切换模式，电喷雾离子源温度为400～550℃；多反应监测模式；CAD碰撞气；气帘气压力为15～25psi；雾化气压力为50～60psi；辅助加热气压力为50～60psi。

【技术特征摘要】
1.一种调味品中色素的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将样品进行前处理，得到上样液；(2)用UPLC-MS/MS方法对步骤(1)得到的上样液进行测定，并和标准溶液的测定结果进行比对分析；其中，高效液相色谱条件为：a)色谱柱：C18柱，100mm×3.0mm，粒径2.6μm；b)流动相A为乙腈；流动相B为5～15mmol/L乙酸铵溶液；流速为0.3～0.7mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；质谱检测条件为：采用电喷雾离子源，正、负离子切换模式，电喷雾离子源温度为400～550℃；多反应监测模式；CAD碰撞气；气帘气压力为15～25psi；雾化气压力为50～60psi；辅助加热气压力为50～60psi。2.如权利要求1所述调味品中色素的检测方法，其特征在于，所述前处理包括如下步骤：(1)色素提取按照每克调味品加入2.5mL提取剂的比例，将提取剂加至调味品中，混合均匀，离心，回收上清液；重复提取一次，合并提取液；(2)QuEChERS方法净化提取液向步骤(1)得到的提取液中加入C18吸附剂，再进行离心，取上清液用水稀释后过0.22μm有机滤膜，得到上样液。3.如权利要求2所述调味品中色素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中的提取剂为乙腈和甲醇的混合物，所述提取剂中乙腈的体积百分比为20％～80％。4.如权利要求3所述调味品中色素的检测方法，其特征在于，所述提取剂中乙腈的体积百分比为50％。5.如权利要求2所述调味品中色素的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中提取液用水...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宇，戚平，林子豪，孙远明，徐振林，梁智安，王成龙，周庆琼，
申请(专利权)人：广州市食品检验所，华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44