本发明专利技术公开了一种苄氧羰基‑L‑丙氨酸的高效液相色谱检测方法，其色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液与乙腈体积比为35:65‑75；其中，0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液pH值为4.0；流动相流速：0.7‑1ml/min；检测波长：215nm；色谱柱柱温：30℃；进行高效液相色谱分析，测定苄氧羰基‑L‑丙氨酸的含量。本发明专利技术方法可快速，准确测定出苄氧羰基‑L‑丙氨酸的含量，确保其质量可控，减小误差，节约成本，操作简单，检测时间短，提高了生产效率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及柱色谱法测定化合物含量
技术介绍
丙谷二肽（丙氨酰谷氨酰胺）是肠外营养，可经由肠外营养输液补充谷氨酰胺，分解释放出的氨基酸作为营养物质各自储存在身体的相应部位并随机体的需要进行代谢。适用于需要补充谷氨酰胺患者的肠外营养，包括处于分解代谢和高代谢状况的患者。苄氧羰基-L-丙氨酸（CBZ-L-丙氨酸）是制备丙氨酰谷氨酰胺的起始原料，由于生产前需对原料药进行质量检测。现有技术中公开了采用C18色谱柱，0.01%磷酸：乙腈的流动相，但该方法检测时间长，一个样品需65min，且需梯度洗脱，对高效液相色谱仪、配制流动相的试剂要求较高。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种苄氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色谱检测方法，本方法可快速，准确测定出苄氧羰基-L-丙氨酸的含量，确保其质量可控，减小误差，节约成本，操作简单，检测时间短，提高了生产效率。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案是：一种苄氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色谱检测方法，其色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液与乙腈体积比为35:65-75；其中，0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液pH值为4.0；流动相流速：0.7-1ml/min；检测波长：215nm；色谱柱柱温：30℃；进行高效液相色谱分析，测定苄氧羰基-L-丙氨酸的含量。优选的，苄氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：（1）配制流动相，调节pH值，过滤、脱气；（2）调节高效液相色谱仪条件，开机平衡色谱柱；（3）对照品溶液和待测样品溶液的配制：精密称取苄氧羰基-L-丙氨酸对照品及待测样品，分别用流动相溶解定容，即得；（4）将对照品溶液、待测样品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法计算待测样品中苄氧羰基-L-丙氨酸的含量。优选的，流动相为：0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液与乙腈体积比为35:75。优选的，流动相流速为：0.7ml/min。优选的，色谱柱长度为250mm，内径为4.6mm，其填料粒径为5μm。优选的，步骤（3）中，对照品溶液和待测样品溶液的浓度为0.20-0.21mg/ml。进一步优选的，步骤（4）中，对照品溶液和待测样品溶液的进样体积为20μl。采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本专利技术采用氨基键合硅胶柱，进行高效液相色谱分析，可以通过该方法准确测定出苄氧羰基-L-丙氨酸的含量，为制备丙氨酸谷氨酰胺提供原始数据，确保其质量可控，减小误差，节约成本，操作简单，且其出峰时间4-8min，检测时间短，提高了工作效率。既适用于规模化生产中苄氧羰基-L-丙氨酸含量的检测，也适用于实验室的检测分析。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明；图1是本专利技术实施例1中对照品溶液的高效液相色谱图；图2是本专利技术实施例1中待测样品溶液的高效液相色谱图。具体实施方式本专利技术的实施例仅用来说明实现本专利技术的技术方案，这些实施方式并不对本专利技术构成进一步限定，以下实施例中，采用高效液相色谱仪为日本岛津LC-15C，SPD-15C，色谱柱为氨基键合硅胶柱，GRACE，250mm*4.6mm，5μm，进样体积为20μl（定量环），也可采用其他厂家和型号的高效液相色谱仪，氨基键合硅胶柱以及其他进样体积，都能达到本专利技术的目的。实施例1-3色谱条件：色谱柱：氨基键合硅胶柱，GRACE，250mm*4.6mm，5μm；流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾水溶液（磷酸调pH至4.0）与乙腈体积比为35:75；流动相流速：0.7ml/min；检测波长：215nm；色谱柱温：30℃；实验步骤：（1）配制流动相，调节pH值，过滤、脱气；（2）调节高效液相色谱仪条件，开机平衡色谱柱；（3）对照品溶液和待测样品溶液的配制：对照品溶液：称取苄氧羰基-L-丙氨酸对照品10.0mg于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；待测样品溶液：称取苄氧羰基-L-丙氨酸待测样品10.0mg于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；（4）将对照品溶液、待测样品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法计算待测样品中苄氧羰基-L-丙氨酸的含量；外标法计算待测样品中苄氧羰基-L-丙氨酸的含量公式为：X（%）=C对×A样/A对/C样*100C对为对照品溶液中苄氧羰基-L-丙氨酸的浓度，单位为mg/ml；A对为对照品溶液色谱图的峰面积或峰高；A样为待测样品溶液色谱图的峰面积或峰高；C样为待测样品溶液中待测溶液的浓度，单位为mg/ml；（5）实施例1待测样品溶液色谱图，见图2所示，5.218min为苄氧羰基-L-丙氨酸的峰，其余为杂峰，主峰出峰时间适宜，理论塔板数大于5000且与杂质峰分离度良好。实施例4与实施例1的区别在于，色谱条件：流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾水溶液（磷酸调pH至4.0）与乙腈体积比为35:65；流动相流速：1ml/min。实施例5与实施例1的区别在于，色谱条件：流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾水溶液（磷酸调pH至4.0）与乙腈体积比为35:70；流动相流速：0.8ml/min。具体数值见下表所示：本专利技术采用氨基键合硅胶柱，进行高效液相色谱分析，可以通过该方法准确测定出苄氧羰基-L-丙氨酸的含量，为制备丙氨酸谷氨酰胺提供原始数据，确保其质量可控，减小误差，节约成本，操作简单，且其出峰时间4-8min，检测时间短，提高了工作效率。既适用于规模化生产中苄氧羰基-L-丙氨酸含量的检测，也适用于实验室的检测分析。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种苄氧羰基‑L‑丙氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于，其色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液与乙腈体积比为35:65‑75；其中，0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液pH值为4.0；流动相流速：0.7‑1ml/min；检测波长：215nm；色谱柱柱温：30℃；进行高效液相色谱分析，测定苄氧羰基‑L‑丙氨酸的含量。
【技术特征摘要】
1.一种苄氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于，其色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液与乙腈体积比为35:65-75；其中，0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液pH值为4.0；流动相流速：0.7-1ml/min；检测波长：215nm；色谱柱柱温：30℃；进行高效液相色谱分析，测定苄氧羰基-L-丙氨酸的含量。2.根据权利要求１所述的苄氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制流动相，调节pH值，过滤、脱气；（2）调节高效液相色谱仪条件，开机平衡色谱柱；（3）对照品溶液和待测样品溶液的配制：精密称取苄氧羰基-L-丙氨酸对照品及待测样品，分别用流动相溶解定容，即得；（4）将对照品溶液、待测样品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法...
【专利技术属性】
技术研发人员：李斌水，米造吉，刘利聪，张思雨，何连顺，
申请(专利权)人：精晶药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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