胶囊化处理罗伦隐球酵母在清除棒曲霉素中的应用制造技术

本发明专利技术公开了胶囊化处理罗伦隐球酵母在清除棒曲霉素中的应用，本发明专利技术提供了用罗伦隐球酵母胶粒清除体系中棒曲霉素的方法，包括如下步骤：1)将罗伦隐球酵母或其悬浮液、褐藻酸钠水溶液和CaCl2水溶液混合，得到罗伦隐球酵母胶粒；2)将所述罗伦隐球酵母胶粒与含有棒曲霉素的体系混匀，反应，实现清除所述体系中棒曲霉素。本发明专利技术证明了胶囊化的罗伦隐球酵母可以用来清除体系中的棒曲霉素，且可以回收胶囊化的罗伦隐球酵母，不会影响体系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及胶囊化处理罗伦隐球酵母在清除棒曲霉素中的应用。
技术介绍
棒曲霉素(Patulin)是部分青霉属和曲霉属真菌的次生代谢产物。它对人及动物具有广泛而强烈的毒性作用。急性毒性表现为抽搐、痉挛、皮下组织水肿、肺肠充血、肠炎、无尿直至死亡；慢性毒性可导致胃溃疡，并具有抑制免疫、致畸性以及潜在的致癌性等，还有可能影响男性的生育能力。棒曲霉素能溶于水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿，微溶于乙醚、苯，不溶于石油醚，在酸性条件下化学性质稳定。在具有棒曲霉素产生能力的真菌中，部分真菌是植物致病菌，其中最主要的一种是扩展青霉病菌(Penicilliumexpansum)。这种病原菌是世界范围内引起果实采后腐烂的最重要的病原菌之一，常见的寄主包括苹果、梨、葡萄、樱桃、桃、草莓等等。它在引起果实腐烂的同时，会向果实组织中分泌大量的棒曲霉素。在果汁加工产业中，如果腐烂的果实混入原材料中，那么生产出的果汁就会有不同程度的棒曲霉素残留，给消费者(特别是儿童)的身体健康带来危害。基于棒曲霉素对人体健康的潜在危害，世界上很多国家都对果汁产品中棒曲霉素的最大限量做了规定，EU、USFDA规定果汁产品中棒曲霉素的最大限量为50μg/kg，WHO建议人每天棒曲霉素的摄入量不超过0.4μg/kg体重。由于果汁通常为酸性，而棒曲霉素在酸性条件下性质稳定，因此果汁中一旦污染了棒曲霉素后很难自然分解。目前，主要通过吸附、微波处理等物理手段进行去除，但效果不是十分理想，亟需研发新型的棒曲霉素脱除手段。酵母罗伦隐球酵母广泛分布于植物(例如果实)表面，它作为生防菌对多种果实采后病害表现出较好的防治效果。近年来，人们发现罗伦隐球酵母还具有降解棒曲霉素的能力，然而如何应用它的这种能力是生产上的一个难题。如果直接将酵母加入果汁中，虽然能降解果汁中的毒素，但是混入果汁内的酵母菌不易去除。因此，需要寻找其他的方法来利用罗伦隐球酵母的这种能力。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种用罗伦隐球酵母胶粒清除体系中棒曲霉素的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤：1)将罗伦隐球酵母或其悬浮液、褐藻酸钠水溶液和CaCl2水溶液混合，得到罗伦隐球酵母胶粒；2)将所述罗伦隐球酵母胶粒与含有棒曲霉素的体系混匀，反应，实现清除所述体系中棒曲霉素。上述方法中，所述将罗伦隐球酵母悬浮液、褐藻酸钠水溶液和CaCl2水溶液混合包括如下步骤：将所述罗伦隐球酵母悬浮液与所述褐藻酸钠水溶液混匀，得到混合液；再将所述混合液逐滴加入所述CaCl2水溶液中混匀，静置，得到罗伦隐球酵母胶粒；所述混合液中所述罗伦隐球酵母和所述褐藻酸钠的配比为2.5×108个：1g；所述CaCl2水溶液的质量体积百分比为2％。上述方法中，所述混合液中罗伦隐球酵母的含量为2.5×108个/ml；所述混合液中褐藻酸钠的质量体积百分比为1％。上述方法中，所述褐藻酸钠的粘度为3500cp。上述方法中，所述罗伦隐球酵母悬浮液的悬浮缓冲液为水。上述方法中，所述静置的时间为10min；所述反应的时间为24-72小时。上述方法中，在步骤2)的反应后，还包括如下步骤：回收反应体系中的所述罗伦隐球酵母胶粒。上述方法中，所述含有棒曲霉素的体系为污染棒曲霉素的果汁或含有棒曲霉素的水溶液。本专利技术另一个目的是提供一种制备罗伦隐球酵母胶粒的方法。本专利技术提供的方法，包括上述的方法中的步骤1)。上述的方法制备的罗伦隐球酵母胶粒也是本专利技术保护的范围。上述的方法或上述的罗伦隐球酵母胶粒在清除污染棒曲霉素的果汁中棒曲霉素中的应用也是本专利技术保护的范围。本专利技术的实验证明，本专利技术提供了一种用罗伦隐球酵母胶粒清除体系中棒曲霉素的方法，其清除效果显著高于单独的胶粒和单独的罗伦隐球酵母，且清除后容易回收胶囊化的罗伦隐球酵母，不会影响体系；证明了胶囊化的罗伦隐球酵母可以用来清除体系中的棒曲霉素。这种方法可以用来清除污染棒曲霉素的果汁，且不影响果汁本身的组分。附图说明图1为罗伦隐球酵母清除棒曲霉素的结果图。图2为棒曲霉素含量标准曲线。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的酵母菌株：罗伦隐球酵母Cryptococcuslaurentii(Kuffer.)Skinner。下述实施例中培养基如下：NYDA固体培养基(g/L):牛肉浸膏(BeefExtract)1,葡糖糖(Glucose)10，蛋白胨(Peptone)5，酵母提取物(Yeastextract)7,氯化钠(NaCl)5,琼脂粉(Agar)15。NYDB液体培养基(g/L):牛肉浸膏(BeefExtract)1,葡糖糖(Glucose)10，蛋白胨(Peptone)5，酵母提取物(Yeastextract)7,氯化钠(NaCl)5。蒸馏水定容到1L后，121℃灭菌20min。pH＝4双蒸水：取双蒸水用乙酸调至pH＝4后过滤灭菌；质量体积百分比2％褐藻酸钠水溶液(W/V)：称取2g粘度为3500cp的褐藻酸钠(Sigma公司生产)，加入100ml蒸馏水，121℃灭菌20min；质量体积百分比2％CaCl2水溶液(W/V)：称取2gCaCl2，加入100ml蒸馏水，过滤灭菌；滤膜：又名神奇滤布(Miracloth)，22-25μm孔径，MerckMillipore公司产品。棒曲霉素(Patulin,PAT):取2mg棒曲霉素(青岛生工公司)溶于4mlpH＝4的双蒸水中，配成0.5mg/ml的母液，过滤灭菌后使用。实施例1、胶囊化处理罗伦隐球酵母清除棒曲霉素的方法一、胶囊化处理罗伦隐球酵母1、酵母细胞悬液的制备取-80℃冰箱中冻存的罗伦隐球酵母Cryptococcuslaurentii菌种，在NYDA板上划线，待长出菌落后，挑单菌落到NYDB中，28℃，220rpm/min,培养18h。计数后以细胞终浓度为1×105个/ml转接到40mlNYDB中，28℃，220rpm/min，培养48h，得到酵母细胞悬液；2、胶囊化处理取出20ml酵母细胞悬液，115℃，10min高压灭菌，使细胞完全失活为死细胞悬液，另一半即为活细胞悬液，分别收集这两份的酵母细胞，用无菌水清洗2次后，pH＝4双蒸水调整细胞终浓度为5×108个/ml，得到酵母活细胞悬液和酵母细胞死本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用罗伦隐球酵母胶粒清除体系中棒曲霉素的方法，包括如下步骤：1)将罗伦隐球酵母或其悬浮液、褐藻酸钠水溶液和CaCl2水溶液混合，得到罗伦隐球酵母胶粒；2)将所述罗伦隐球酵母胶粒与含有棒曲霉素的体系混匀，反应，实现清除所述体系中棒曲霉素。

【技术特征摘要】
1.一种用罗伦隐球酵母胶粒清除体系中棒曲霉素的方法，包括如下步骤：
1)将罗伦隐球酵母或其悬浮液、褐藻酸钠水溶液和CaCl2水溶液混合，得到罗伦
隐球酵母胶粒；
2)将所述罗伦隐球酵母胶粒与含有棒曲霉素的体系混匀，反应，实现清除所述体
系中棒曲霉素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述将罗伦隐球酵母悬浮液、褐藻酸钠水溶液和CaCl2水溶液混合包括如下步骤：
将所述罗伦隐球酵母悬浮液与所述褐藻酸钠水溶液混匀，得到混合液；再将所述混合
液逐滴加入所述CaCl2水溶液中混匀，静置，得到罗伦隐球酵母胶粒；
所述混合液中所述罗伦隐球酵母和所述褐藻酸钠的配比为2.5×108个：1g；
所述CaCl2水溶液的质量体积百分比为2％。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：
所述混合液中罗伦隐球酵母的含量为2.5×108个/ml；
所述混合液中褐藻酸钠的质量体积百分比为1％...

【专利技术属性】
技术研发人员：田世平，李博强，秦国政，张占全，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11