本发明专利技术提供了一种以葛根素为对照，定性和定量检测葛根、葛根提取物以及含葛根制剂中3’-羟基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6种成分含量的UPLC方法，包括制备对照品和供试品溶液，以0.1％醋酸为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为250nm；色谱柱为SB-C18，RRHD,1.8um，2.1*100mm；柱温为31℃；流速为0.4mL/min；进样量为1uL；将所得色谱图与葛根药材指纹图谱比较，主峰即为葛根素，其余成分一一对应，可对药材进行鉴别。同时结合相对校正因子(3’-羟基葛根素为1.253、葛根素为1.000、葛根素-6”-O-木糖苷为1.422、3’-甲氧基葛根素为1.297、芹糖基葛根素苷为1.332和大豆苷为1.030)和对照溶液中葛根素的峰面积即可计算葛根中6种成分的含量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药领域，涉及中药材提取物及提取技术，以及制剂的UPLC快速分析方法。
技术介绍
葛根是豆科植物野葛的干燥根，在全国多数省份都有分布，湖北是一个重要产区。将葛根深加工成提取物，可以产生较好的社会效应和经济效益。同时，葛根提取物中的主要成分是异黄酮类，药理作用比较广泛，对心脑血管疾病方面的作用比较突出，国内国外市场前景广阔。多种中成药处方中都将葛根作为主药，而且选择其中的葛根素作为质量控制指标。中药成分复杂，在治疗疾病的过程中这些成分多数时候产生协同作用。因此，决定中药材及其相应产品质量的应该是其中各种成分的一个组合。但是，过去由于条件的限制，控制中药材的质量往往选取其中一种易于检测的成分(指标性成分)，这样就会导致一些问题，一方面，药材的作用不一定由这一种成分产生，因此不能充分地反映药材的质量；另一方面，不法生产者为了牟取暴利，采用伪品或劣品中添加检验标准需要检测的成分，因此，选择药材材中的多种成分(指标性成分或活性成分)来建立相应的质量控制标准，这样就可以很好的预防人为的掺杂和掺假，也能指导工业生产，保证产品的质量。UPLC具有灵敏度高，分离效能高和速度快，溶剂消耗少的优势，可以在较短时间内同时完成分析，不仅能用于单一药材中多种成分的测定，还可以实现复方中多种组分的测定。
技术实现思路
本专利技术的任务是提供一种检测葛根或葛根提取物或含葛根制剂成分的UPLC方法。本专利技术提供检测葛根或葛根提取物或含葛根制剂中成分的UPLC方法是：以葛根素为对照，定性和定量检测葛根、葛根提取物以及含葛根制剂中3’-羟基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6种成分含量的UPLC方法，包括制备对照品和供试品溶液，以0.1％醋酸为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为250nm；色谱柱为SB-C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱温为31oC；流速为0.4mL/min；进样量为1uL；将所得色谱图与葛根药材指纹图谱比较，主峰即为葛根素，其余成分一一对应，可对药材进行鉴别，同时结合相对校正因子(3’-羟基葛根素为1.253、葛根素为1.000、葛根素-6”-O-木糖苷为1.422、3’-甲氧基葛根素为1.297、芹糖基葛根素苷为1.332和大豆苷为1.030)和对照溶液中葛根素的峰面积即可计算葛根中6种成分的含量。本专利技术提供的检测葛根或葛根提取物或含葛根制剂成分的UPLC方法，包括以下步骤：步骤一、制备对照品溶液：称取葛根素对照品适量于容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至约125ug/mL；步骤二、制备供试品溶液：称取葛根粉末(过三号筛)0.15g，加入40％乙醇50ml，称重，超声提取30min，放冷至室温，用40％乙醇补足至原重，摇匀，0.22um滤膜过滤即得；步骤三、按以下方法进样检测：色谱仪：UPLC(Agilent1290，DAD检测器)；色谱条件：梯度洗脱，流动相A：0.1％醋酸流动相B：乙腈时间(min)流动相A(％)流动相B(％)09280.588.511.53.588.511.577723105050121090141090检测波长：250nm；色谱柱：SB-C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱温：31℃；流速：0.4mL/min；进样量：1uL；步骤四、将所得色谱图与葛根药材指纹图谱比较，主峰即为葛根素，其余成分一一对应，可对药材进行鉴别。在上述步骤四所述的将所得色谱图与葛根药材指纹图谱比较中，结合相对校正因子和对照溶液中葛根素的峰面积即可计算葛根中6种成分的含量；葛根中6种成分的相对校正因子为：3’-羟基葛根素为1.253；葛根素为1.000；葛根素-6”-O-木糖苷为1.422；3’-甲氧基葛根素为1.297；芹糖基葛根素苷为1.332；大豆苷为1.030。本专利技术提供的方法可以准确快速的对葛根药材、提取物以及含有葛根的中成药制剂中的葛根来源成分进行质量控制，所需时间较短，14min以内即可完成分析。方法的灵敏度较高，具有较高的实际应用价值。实验资料1.分析方法的建立色谱仪：UPLC(Agilent1290，DAD检测器)色谱条件：梯度洗脱，流动相A：0.1％醋酸流动相B：乙腈时间(min)流动相A(％)流动相B(％)09280.588.511.53.588.511.577723105050121090141090检测波长：250nm；色谱柱：SB-C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱温：31oC；流速：0.4mL/min；进样量：1uL选取3’-羟基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷等几种葛根中所含有的异黄酮作为标准品。各成分紫外吸收图谱(DAD扫描)见图1，混合对照品和样品图谱见图2，2.分析方法验证2.1样品的前处理2.1.1提取溶剂的选择：精密称取0.15g葛根药材粉末(过三号筛)，分别加入不同浓度乙醇溶液(30％，40％，50％，60％和70％)50ml，称重，超声提取30min，取出放冷至室温，用对应浓度乙醇溶液补足至原重，摇匀，0.22um滤膜过滤，取1ul进样，以峰面积/称样量进行比较。表1溶剂浓度的选择其中40％乙醇提取的比值均较大，故选择40％乙醇作为提取溶剂。2.1.2超声时间的确定：精密称取0.15g葛根药材粉末(过三号筛)，分别加入40％乙醇50ml，称重，考察超声不同时间(20min，30min，40min和50min)对提取的影响。见表2。表2超声时间的确定超声30min时，比值最大，确定超声时间为30min。2.2溶液的制备：供试品溶液制备：称取葛根粉末0.15g，加入40％乙醇50ml，称重，超声提取30min，放冷至室温，用40％乙醇补足至原重，摇匀，0.22um滤膜过滤即得。(葛根提取物和中成药制剂的制备过程见后续实例)。对照品储备溶液制备：分别称取3′-羟基葛根素4.13mg，葛根素6.54mg，葛根素-6”-O-木糖苷4.78mg，3′-甲氧基葛根素4.34mg，芹糖基葛根素苷4.79mg，大豆苷6.10mg于25ml容量瓶中，用甲醇超声溶解并稀释至刻度，即得对照品储备溶液(各对照品含量分别为3′-羟基葛根素98.5％，葛根素95.5％，葛根素-6”-O-木糖苷98.0％，3′-甲氧基葛根素98.5％，芹糖基葛根素苷98.5％，大豆苷91.3％)。2.3溶液稳定性：取葛根粉末(批号：A40805)0.15g，加40％乙醇50ml，称重，超声提取30min，放冷至室温，用40％乙醇补足至原重，摇匀，0.22um滤膜过滤即得。取1ul进样，即得0h峰面积，室温放置，在2h，4h，8h，12h和24h分别取1uL进样，结果见表3，分别比较了各时间点各成分相对于0h的变化率。表3溶液室温稳定性考察有上表可知：3′-羟基葛根素不稳定，室温(25oC)放置容易降解，应在12h内进样，如需长时间保存，应保存在冰箱中(实验证实，样品保存于冰箱稳定性良好)。2.4专属性试验：取空白溶剂(40％乙醇溶液)，对照溶液和供试品溶液各1uL分别进样，按前述分析方法进样，记录色谱图。结果表明，样品溶剂对测定成分未造成干本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以葛根素为对照检测葛根、葛根提取物或含葛根制剂中3’‑羟基葛根素、葛根素、葛根素‑6”‑O‑木糖苷、3’‑甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6种成分的UPLC方法，包括以下步骤：步骤一、对照品溶液制备：称取葛根素对照品适量于容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至约125ug/mL；步骤二、供试品溶液制备：称取葛根粉末(过三号筛)0.15g，加入40％乙醇50ml，称重，超声提取30min，放冷至室温，用40％乙醇补足至原重，摇匀，0.22um滤膜过滤即得；步骤三、按以下方法进样检测：色谱仪：UPLC(Agilent 1290，DAD检测器)；色谱条件：梯度洗脱，流动相A：0.1％醋酸 流动相B：乙腈时间(min)流动相A(％)流动相B(％)09280.588.511.53.588.511.577723105050121090141090检测波长：250nm；色谱柱：SB‑C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱温：31℃；流速：0.4mL/min；进样量：1uL；步骤四、将所得色谱图与葛根药材指纹图谱比较，主峰即为葛根素，其余成分一一对应，可对药材进行鉴别。
【技术特征摘要】
1.一种以葛根素为对照检测葛根、葛根提取物或含葛根制剂中3’-羟基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6种成分的UPLC方法，包括以下步骤：步骤一、对照品溶液制备：称取葛根素对照品适量于容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至约125ug/mL；步骤二、供试品溶液制备：称取葛根粉末(过三号筛)0.15g，加入40％乙醇50ml，称重，超声提取30min，放冷至室温，用40％乙醇补足至原重，摇匀，0.22um滤膜过滤即得；步骤三、按以下方法进样检测：色谱仪：UPLC(Agilent1290，DAD检测器)；色谱条件：梯度洗脱，流动相A：0.1％醋酸流动相B：乙腈时间(min)流动相A(％)流动相B(％)09280.588.511.53....
【专利技术属性】
技术研发人员：尹春萍，马元春，严书超，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。