一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法技术

本发明专利技术公开了一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法，水产加工品样品经甲醇水溶液提取，离心定容，经超高效液相色谱‑质谱法测定检测。通过优化前处理与色谱条件，甜蜜素在0.5‑50ng/mL范围内具有良好的线性关系，相关系数0.996以上，水产加工品样品平均回收率在81％‑109％之间，相对标准偏差在2.2％‑9.7％之间，定量检出限为0.01mg/kg，该方法高效、灵敏、准确，可广泛应用于水产加工品中甜蜜素的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水产品检测
，特别涉及一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法。
技术介绍
甜蜜素又名环己基氨基磺酸钠，易溶于水，是一种的低热量人工合成甜味剂,不具有任何营养价值，但其甜度可达到白糖50～60倍，同时兼备有水果风味，以其低廉的价格和远超白糖的甜度，被广泛应用于糕点、调味品、饮料、蜜饯等。近年来有关部门的市场流通食品监测发现，水产加工品中的甜蜜素经常被检出。同时有研究报道发现，甜蜜素食用过量可能具有致癌性，在体内会代谢为环己胺等，这些物质会对心血管系统和睾丸产生有毒害作用，因此在日本等国家的进出口禁止列表里，已经明确禁止甜蜜素作食品添加剂来使用。我国食品添加剂相关的限量法规GB2760中允许一定范围内的添加使用，故我国常因甜蜜素遭遇技术壁垒，企业损失严重。甜蜜素检测方法有紫外分光光度法、离子色谱法、气相色谱法、液相色谱法等。其中，气相色谱法是目前广泛使用的方法，GB/T5009.97-2003《食品中环已基氨基磺酸钠的测定》其中第一法是气相色谱法，此方法需要进行复杂的衍生化步骤，前处理步骤繁琐，使用大量的正己烷试剂，检测效率较低。同时气相色谱法中的衍生化也存在干扰现象，在分析富含蛋白、醇类的基质时，尤其是富含蛋白质和脂类的水产加工品时，衍生化干扰较为严重，检测结果会出现假阳性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法，不需要衍生，前处理步骤简单方便，大大缩短检测周期，提高了检测效率。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法，包括如下步骤：(1)样品提取：称取2.00g样品，置于25mL离心管中，加入10mL甲醇水溶液，充分混合振荡旋涡1min，放置于60℃水浴15分钟，然后超声10min，离心，倒出上清液，残渣使用10mL甲醇水溶液重复上述操作提取、离心1次，合并上清液，准确定容至25mL，得样品提取液；(2)液相色谱-质谱检测：取样品提取液1mL，经0.22μm的有机滤膜过滤到进样瓶中，进行液相色谱-质谱检测，然后绘制标准工作曲线，外标法定量，根据峰面积对甜蜜素进行定量。作为优选，步骤(1)中所述离心参数为：6000r/min离心5min。作为优选，步骤(1)中甲醇水溶液的体积浓度为50％。作为优选，液相色谱条件为：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱，规格：2.1mm×50mm，粒径1.7μm；流动相：5mmol/L乙酸铵溶液-甲醇溶液；等度洗脱：流速0.3ml/min，柱温40℃，样品室温度4℃，进样量10μL。作为优选，质谱条件：离子源：电喷雾离子源，负离子扫描；检测方式：多重反应监测；毛细管电压：3.5KV；锥孔电压：40V；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：380℃；脱溶剂气流量：600L/hr；锥孔气流：50L/hr；碰撞电压：30v；碰撞气流量：0.22mL/min。本专利技术的有益效果是：甜蜜素在0.5-50ng/mL范围内具有良好的线性关系，相关系数0.996以上，水产加工品样品平均回收率在81％-109％之间，相对标准偏差在2.2％-9.7％之间，定量检出限为0.01mg/kg，该方法高效、灵敏、准确，可广泛应用于水产加工品中甜蜜素的检测。附图说明图1是不同的流动相色谱图对比；注：1为5mM乙酸铵溶液-乙腈流动相，2为5mM乙酸铵溶液-甲醇流动相。图2是3种提取方式的比较。图3是标准溶液色谱图。图4空白样品加标色谱图。具体实施方式下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。本专利技术中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。实施例：一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法，包括如下步骤：(1)样品提取：称取2.00g样品，置于25mL离心管中，加入10mL甲醇水溶液(体积浓度50％)，充分混合振荡旋涡1min，放置于60℃水浴15分钟，然后超声10min，离心，倒出上清液，残渣使用10mL甲醇水溶液重复上述操作提取、离心1次，合并上清液，准确定容至25mL，得样品提取液；(2)液相色谱-质谱检测：取样品提取液1mL，经0.22μm的有机滤膜过滤到进样瓶中，进行液相色谱-质谱检测，然后绘制标准工作曲线，外标法定量，根据峰面积对甜蜜素进行定量。液相色谱条件为：色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱，规格：2.1mm×50mm，粒径1.7μm；流动相：5mmol/L乙酸铵溶液-甲醇溶液(40：60，V/V)；等度洗脱：流速0.3ml/min，柱温40℃，样品室温度4℃，进样量10μL。质谱条件：离子源：电喷雾离子源，负离子扫描；检测方式：多重反应监测；毛细管电压：3.5KV；锥孔电压：40V；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：380℃；脱溶剂气流量：600L/hr；锥孔气流：50L/hr；碰撞电压：30v；碰撞气流量：0.22mL/min。试验部分：1材料与方法1.1仪器与试剂超高效液相-质谱联用仪(美国Waters公司)；高速离心机(德国贝克曼公司)；旋涡振荡器(德国IKA公司)；0.22μm滤膜(上海安谱)；超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。甜蜜素(纯度≥99％，德国DR.Ehrensotorfer)；乙酸铵(纯度99％)；甲醇(色谱纯，德国Merck公司)；娃哈哈超纯水。1.2试验方法1.2.1仪器参数1.2.1.1液相色谱条件色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18柱，规格：2.1mm×50mm，粒径1.7μm；流动相：5mM乙酸铵溶液-甲醇(体积分数)溶液(40：60，V/V)；等度洗脱：流速0.3ml/min，柱温40℃，样品室温度4℃，进样量10μL。1.2.1.2质谱条件参数离子源：电喷雾离子源，负离子扫描(ESI-)；检测方式：多重反应监测(MRM)；毛细管电压：3.5KV；锥孔电压：40V；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：380℃；脱溶剂气流量：600L/hr；锥孔气流：50L/hr；碰撞电压：30v；碰撞气流量：0.22mL/min。1.2.2样品提取称取2.00g样品，置于25mL离心管中，加入10mL甲醇水溶液(体积浓度50％)，充分混合振荡旋涡1min，放置于60℃水浴15分钟，然后超声10min，离心，倒出上清液，残渣使用10mL甲醇水溶液重复上述操作提取、离心1次，合并上清液，准确定容至25mL，得样品提取液。2结果与讨论2.1色谱条件的优化色谱柱采用ACQUITYUPLCBEHC18柱2.1mm×50mm1.7μm，流动相比较了5mM乙酸铵溶液-甲醇组合和5mM乙酸铵溶液-乙腈组合，流速0.3ml/min等度洗脱分析试验，两种不同的流动相色谱图对比见图1，结果显示当流动相洗脱条件为5mM乙酸铵溶液-甲醇时，环己基氨基磺酸钠峰与基质中干扰峰完全分离效果最佳，分离度和响应最好。2.2质谱条件的优化由于甜蜜素是钠盐，所以选用电喷雾电离的负离子扫描模式，5.0mg/L的甜蜜素标准溶液不通过液相色谱柱分离，而直接使用质谱自动注射器直接进样，对质谱参数进行优化，由于甜蜜素结构比较稳定，因此在分析寻找特征离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品提取：称取2.00g样品，置于25mL离心管中，加入10mL甲醇水溶液，充分混合振荡旋涡1min，放置于60℃水浴15分钟，然后超声10min，离心，倒出上清液，残渣使用10mL甲醇水溶液重复上述操作提取、离心1次，合并上清液，准确定容至25mL，得样品提取液；(2)液相色谱‑质谱检测：取样品提取液1mL，经0.22μm的有机滤膜过滤到进样瓶中，进行液相色谱‑质谱检测，然后绘制标准工作曲线，外标法定量，根据峰面积对甜蜜素进行定量。

【技术特征摘要】
1.一种改进的测定水产加工品中甜蜜素的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品提取：称取2.00g样品，置于25mL离心管中，加入10mL甲醇水溶液，充分混合振荡旋涡1min，放置于60℃水浴15分钟，然后超声10min，离心，倒出上清液，残渣使用10mL甲醇水溶液重复上述操作提取、离心1次，合并上清液，准确定容至25mL，得样品提取液；(2)液相色谱-质谱检测：取样品提取液1mL，经0.22μm的有机滤膜过滤到进样瓶中，进行液相色谱-质谱检测，然后绘制标准工作曲线，外标法定量，根据峰面积对甜蜜素进行定量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中所述离心参数为：6000r/min离心5min。3.根据权利要求1或2所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：方益，喻亮，严忠雍，祝银，李子孟，
申请(专利权)人：浙江省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33