一种同时检测红葡萄酒中4‑乙基苯酚与4‑乙基愈创木酚含量的方法技术

本发明专利技术属于食品检测领域，涉及一种红葡萄酒中4‑乙基苯酚(4‑EP)与4‑乙基愈创木酚(4‑EG)含量的同时测定方法，特别是涉及一种通过顶空固相微萃取‑气相色谱‑质谱联用进行检测的方法。本发明专利技术的目的是填补目前红葡萄酒中4‑EP和4‑EG相关检测方法领域的不足，通过摸索最佳顶空固相微萃取条件和最佳气相色谱‑质谱分离条件而提供一种红葡萄酒中4‑EP和4‑EG含量的同时测定方法。所述方法主要步骤包括：内标物的制备、顶空固相微萃取、标准曲线的测定、气相色谱‑质谱检测。根据得到的标准曲线计算样品中4‑EP和4‑EG的含量。经验证，本方法快速、准确、方便，精密度和回收率均较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品检测与食品质量控制领域，具体涉及一种红葡萄酒中4-乙基苯酚与4-乙基愈创木酚含量的测定方法，特别是涉及一种通过顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术进行检测的方法。
技术介绍
葡萄酒的气味是葡萄酒质量与品质的一项重要指标，良好的气味会增加葡萄酒的复杂性和协调性，并提高消费者购买率。相反，不良的气味则会造成葡萄酒的缺陷。葡萄酒的气味是由很多物质构成的。其中，挥发性酚类是很重要的一类，尤其是4-乙基苯酚(4-ethylphenol,4-EP)、4-乙基愈创木酚(4-ethylguaiacol,4-EG)。4-EP通常被描述为“草棚味”、“马厩味”，4-EG则被描述为烟熏味、丁香味。低浓度时，4-EP和4-EG可以增加葡萄酒气味的复杂性；高浓度时，因其嗅觉阈值较低(4-EP:430μg/L、4-EG:33μg/L)，容易造成红葡萄酒的感观缺陷。通常，它们在酒中的浓度从几十微克每升到几百微克每升不等。当达到数毫克每升时，4-EP会带来一种强烈的“马厩”味。即使是在较低的浓度下(600-700μg/L)，4-EP也会改变酒的香气。虽然其气味可能只有轻微地令人不愉快，但它仍然会掩盖掉果香和酒香，使酒失去它们本身的个性。研究表明，这类挥发性酚类物质给葡萄酒带来的香气上的缺陷是普遍存在的。因此，建立一种准确、快速检测红葡萄酒中4-EP、4-EG的方法，了解目前红葡萄酒中4-EP、4-EG的含量情况是十分必要的。这将为进一步研究其产生机理、控制其对红葡萄酒感官品质的影响提供技术支持。近年来，随着现代分析技术的发展，一些精密的分析手段被应用于葡萄酒风味物质的分离和鉴定，如气相色谱、气相色谱/质谱联用系统等。但使用这些分析系统之前，都必须将香气物质较为完全地从葡萄酒中抽提出来，以获得理想的分析结果。因此选择适当的萃取方法是十分必要的。目前葡萄酒香气的萃取方法有溶剂萃取法、固相萃取法(SPE)、吹扫捕集法(P&T)、顶空固相微萃取法(HS-SPME)、固态搅拌棒吸附萃取法(SBSE)等。尤其是SPE技术，近年来被广泛运用于葡萄酒香气成分的研究。但该方法的难点是众多操作参数的选择和定量结果的重复性，因而，需要研究建立相应的方法后才可用作日常质量控制分析。国外的研究中，对于4-EP、4-EG的萃取技术主要有液-液萃取、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、顶空固相微萃取(HS-SPME)、多重顶空固相微萃取。其中多重顶空固相微萃取是对顶空固相微萃取技术的改进，可连续分离样品中的挥发性酚类物质，同时能避免可能出现的基体效应。对于4-EP、4-EG的定量分析检测技术主要有GC-FID或GC-MS。也有文献报道用HPLC-FID定量分析合适的挥发性酚类样本以及用HPLC-电化学阵列检测器定量分析。而在中国，相关报道很少。目前，优质国产葡萄酒已经开始逐渐走出国门，出口到世界各地，而葡萄酒中4-EP、4-EG的检测手段的不足，使得我国葡萄酒在出口上很容易遭遇其他国家的贸易壁垒。总而言之，我国在葡萄酒中4-EP、4-EG的检测与其他国家相比有较大的差距。这对于我国葡萄酒产业的进一步发展，是一个很大的隐患。因此建立一种快速、准确、方便、实用的检测方法，有利于监控葡萄酒生产过程中4-EP、4-EG的含量控制，进而保障葡萄酒的质量，以及消费者食品安全与我国葡萄酒产业的健康发展。目前尚无针对红葡萄酒中4-EP和4-EG检测的相关专利。
技术实现思路
本专利技术的目的是填补红葡萄酒中4-EP和4-EG相关检测方法领域的不足，通过摸索最佳顶空固相微萃取条件和最佳气相色谱-质谱分离条件而提供一种红葡萄酒中4-EP和4-EG含量的测定方法，从而克服上述不足。针对上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种同时检测红葡萄酒中4-乙基苯酚与4-乙基愈创木酚含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：a.内标物的制备：精确称取1mg纯度为色谱纯的对-甲酚标准品，用纯度为色谱纯的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存，作为内标物使用；b.顶空固相微萃取：在装有磁力搅拌器的15mL顶空瓶中加入待测红葡萄酒样品10mL，加入步骤a中制备的内标物100μL和NaCl；将顶空瓶置于磁力加热搅拌装置上，在50℃预先加热平衡10min，调整磁力搅拌转速为850rpm，插入萃取头；c.标准曲线的测定：分别精确称取纯度为色谱纯的4-EP标准品1mg和纯度为色谱纯的4-EG标准品1mg，用纯度为色谱纯的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存；用纯度为色谱纯的乙醇稀释，分别配制50μg/L、100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L和3000μg/L的4-EP标准品溶液；5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L的4-EG标准品溶液；在装有磁力搅拌器的15mL顶空瓶中分别加入上述标准品溶液10mL，加入步骤a中制备的内标物100μL和NaCl；将顶空瓶置于磁力加热搅拌装置上，在50℃预先加热平衡10min，调整磁力搅拌转速为850rpm，插入萃取头；d.气相色谱-质谱检测：将上述步骤b、c的萃取手柄分别插入气相色谱仪的进样口进样，解析5min，得到待测红葡萄酒样品溶液中4-EP、4-EG和内标物的峰面积，以及4-EP标准品、4-EG标准品和内标物的峰面积；e.标准曲线的计算：以标准品峰面积与内标物峰面积之比为响应值A，即响应值A＝标准品峰面积/内标物峰面积；根据响应值与标准品溶液浓度之间存在的线性关系，制成标准曲线；f.待测红葡萄酒样品中4-EP、4-EG浓度的计算：以待测红葡萄酒样品中4-EP、4-EG的峰面积分别与内标物的峰面积之比为响应值B4-EP、B4-EG，即B4-EP＝待测红葡萄酒样品中4-EP峰面积/内标物峰面积，B4-EG＝待测红葡萄酒样品中4-EG峰面积/内标物峰面积；根据步骤e中得到的标准曲线计算待测红葡萄酒样品中4-EP、4-EG浓度；其中，所述步骤d中，1)气相色谱检测条件：气相色谱进样方式为SPME无分流进样；气相色谱升温程序为初始温度50℃保持3分钟，之后以10℃/min升至150℃，再以5℃/min升至180℃，再以10℃/min升至210℃，保持16min；2)质谱条件：质谱仪电离源为EI电离源，电子能量为70eV，扫描范围(m/z)：50～500AMU，离子源温度250℃。所述的同时检测红葡萄酒中4-乙基苯酚与4-乙基愈创木酚含量的方法步骤b和步骤c中，NaCl的添加量为2.5g。所述的同时检测红葡萄酒中4-乙基苯酚与4-乙基愈创木酚含量的方法步骤b和步骤c中，萃取头为美国Supelco公司的50/30μmDVB/CAR/PDMS萃取头。所述的同时检测红葡萄酒中4-乙基苯酚与4-乙基愈创木酚含量的方法步骤b和步骤c中，顶空固相微萃取的温度为55℃，萃取时间为45min。所述的同时检测红葡萄酒中4-乙基苯酚与4-乙基愈创木酚含量的方法步骤d中，检测仪器为美国安捷伦公司GC6890/MS5973型气相色谱/质谱联用仪；气相色谱检测条件还包括：1)色谱柱为美国安捷伦本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测红葡萄酒中4‑乙基苯酚与4‑乙基愈创木酚含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：a.内标物的制备：精确称取1mg纯度为色谱纯的对‑甲酚标准品，用纯度为色谱纯的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，‑20℃冰箱保存，作为内标物使用；b.顶空固相微萃取：在装有磁力搅拌器的15mL顶空瓶中加入待测红葡萄酒样品10mL，加入步骤a中制备的内标物100μL和NaCl；将顶空瓶置于磁力加热搅拌装置上，在50℃预先加热平衡10min，调整磁力搅拌转速为850rpm，插入萃取头；c.标准曲线的测定：分别精确称取纯度为色谱纯的4‑EP标准品1mg和纯度为色谱纯的4‑EG标准品1mg，用纯度为色谱纯的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，‑20℃冰箱保存；用纯度为色谱纯的乙醇稀释，分别配制50μg/L、100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L和3000μg/L的4‑EP标准品溶液；5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L的4‑EG标准品溶液；在装有磁力搅拌器的15mL顶空瓶中分别加入上述标准品溶液10mL，加入步骤a中制备的内标物100μL和NaCl；将顶空瓶置于磁力加热搅拌装置上，在50℃预先加热平衡10min，调整磁力搅拌转速为850rpm，插入萃取头；d.气相色谱‑质谱检测：将上述步骤b、c的萃取手柄分别插入气相色谱仪的进样口进样，解析5min，得到待测红葡萄酒样品溶液中4‑EP、4‑EG和内标物的峰面积，以及4‑EP标准品、4‑EG标准品和内标物的峰面积；e.标准曲线的计算：以标准品峰面积与内标物峰面积之比为响应值A，即响应值A＝标准品峰面积/内标物峰面积；根据响应值与标准品溶液浓度之间存在的线性关系，制成标准曲线；f.待测红葡萄酒样品中4‑EP、4‑EG浓度的计算：以待测红葡萄酒样品中4‑EP、4‑EG的峰面积分别与内标物的峰面积之比为响应值B4‑EP、B4‑EG，即B4‑EP＝待测红葡萄酒样品中4‑EP峰面积/内标物峰面积，B4‑EG＝待测红葡萄酒样品中4‑EG峰面积/内标物峰面积；根据步骤e中得到的标准曲线计算待测红葡萄酒样品中4‑EP、4‑EG浓度；其中，所述步骤d中，1)气相色谱检测条件：气相色谱进样方式为SPME无分流进样；气相色谱升温程序为初始温度50℃保持3分钟，之后以10℃/min升至150℃，再以5℃/min升至180℃，再以10℃/min升至210℃，保持16min；2)质谱条件：质谱仪电离源为EI电离源，电子能量为70eV，扫描范围(m/z)：50～500AMU，离子源温度250℃。...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测红葡萄酒中4-乙基苯酚与4-乙基愈创木酚含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：a.内标物的制备：精确称取1mg纯度为色谱纯的对-甲酚标准品，用纯度为色谱纯的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存，作为内标物使用；b.顶空固相微萃取：在装有磁力搅拌器的15mL顶空瓶中加入待测红葡萄酒样品10mL，加入步骤a中制备的内标物100μL和NaCl；将顶空瓶置于磁力加热搅拌装置上，在50℃预先加热平衡10min，调整磁力搅拌转速为850rpm，插入萃取头；c.标准曲线的测定：分别精确称取纯度为色谱纯的4-EP标准品1mg和纯度为色谱纯的4-EG标准品1mg，用纯度为色谱纯的乙醇定容在1mL棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存；用纯度为色谱纯的乙醇稀释，分别配制50μg/L、100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L和3000μg/L的4-EP标准品溶液；5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L和1000μg/L的4-EG标准品溶液；在装有磁力搅拌器的15mL顶空瓶中分别加入上述标准品溶液10mL，加入步骤a中制备的内标物100μL和NaCl；将顶空瓶置于磁力加热搅拌装置上，在50℃预先加热平衡10min，调整磁力搅拌转速为850rpm，插入萃取头；d.气相色谱-质谱检测：将上述步骤b、c的萃取手柄分别插入气相色谱仪的进样口进样，解析5min，得到待测红葡萄酒样品溶液中4-EP、4-EG和内标物的峰面积，以及4-EP标准品、4-EG标准品和内标物的峰面积；e.标准曲线的计算：以标准品峰面积与内标物峰面积之比为响应值A，即响应值A＝标准品峰面积/内标物峰面积；根据响应值与标准品溶液浓度之间存在的线性关系，制成标准曲线；f.待测红葡萄酒样品中4-EP、4-EG浓度的计算：以待测红葡萄酒样品中4-EP、4-EG的峰面积分别与内标物的峰面积之比为响应值B4...

【专利技术属性】
技术研发人员：战吉宬，孙翔宇，罗煊，游义琳，黄卫东，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11