一种苦豆子生物总碱的质量控制方法技术

本发明专利技术涉及中药材的质量检测技术领域，具体涉及一种苦豆子生物总碱的质量控制方法，该方法利用一测多评法，以苦豆子生物总碱中的槐定碱作为内参物，计算槐定碱与其他7种具有中药活性的生物碱的相对校正因子，进而测定出苦豆子生物总碱中的其他7种生物碱的含量。与现有技术相比，本发明专利技术的方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价苦豆子总生物碱的质量，可解决因对照品缺乏而无法客观合理地控制中药材及其制剂质量的问题，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药材的质量检测
，具体涉及一种苦豆子生物总碱的质量控制方法。
技术介绍
中药质量控制和评价的难题在于中药多成分的复杂性，由于单一成分或指标评价难以表征中药的质量，而多成分质量控制的方法需要较多的对照品。由于中药化学对照品分离难度大或单体不稳定、难以供应、成本高等因素，使得多成分质量控制的实施存在诸多困难。为此，研究者提出了适应中药特点的多指标质量评价的新模式——一测多评法(quantitative assay of mμlti-components by single marker，QAMS)用以解决中药质量评价过程中所存在的对照品使用较多的问题。QAMS通过借鉴内标法、校正因子法、主成分自身对照法、以及紫外百分吸收系数法等研究方法，依据一定范围(线性范围)内成分的量(如质量、浓度)与检测器响应成正比的原理，即W＝f×A，选用样品中某一典型成分的对照品，借助该成分与供试品中另一成分或其他多成分间的关系，引入相对校正因子(relative correction factor，RCF)的概念(其中，As、Ai分别为内参物、待测物峰面积或峰高，Cs、Ci分别为内参物、待测物的浓度)，对供试品中其他成分进行测定的方法。研究多采用相对保留时间作为评价的指标。苦豆子总生物碱(TASA)是中药苦豆子的主要活性成分，主要包括槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱、苦参碱、莱曼碱、苦豆碱、金花雀碱、氧化槐果碱等。这些生物碱具有广泛的药理作用，如抗炎、抗癌、免疫调节、抗恶质等。现有技术中，苦豆子总生物碱的质量评价主要是以单一的槐定碱作为指标，但是，由于其他活性成分如苦参碱、莱曼碱、氧化槐果碱也具有一定的含量，因此，现有技术以槐定碱的单一成分作为苦豆子总生物碱的评价指标，难以准确地表征苦豆子总生物碱的所有活性成分。目前，国内外尚未有将“一测多评法”应用于苦豆子总生物碱以及建立相关的质量控制方法的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种苦豆子生物总碱的质量控制方法，该方法能够准确地评价苦豆子总生物碱的质量，可解决因对照品缺乏而无法客观合理地控制中药材及其制剂质量的问题。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：提供一种苦豆子生物总碱的质量控制方法，采用一测多评法，以苦豆子生物总碱中的槐定碱作为内参物，检测苦豆子生物总碱中的苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的质量，具体包括以下步骤：(1)对照品溶液的配制：分别精密称定槐定碱、苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱，置于容量瓶内，用KH2PO4溶液溶解并定容，然后过滤，分别获得槐定碱、苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的对照品溶液，备用；(2)供试品溶液的配制：精密称定一定量的苦豆子总生物碱样品，置于容量瓶内，用KH2PO4溶液溶解并定容，然后过滤，获得苦豆子总生物碱的供试品溶液，备用；(3)校正因子RCF的计算：取步骤(1)制备得到的混合对照品溶液，进样2,4,8,12,16,20μl，用高效液相色谱测定色谱图并计算峰面积，选取槐定碱作为内参物，分别计算苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的校正因子RCFkm。(4)样品中活性成分的测定取步骤(2)制备得到的供试品溶液注入高效液相色谱进行测定，获得色谱图，按以下公式分别计算出苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的质量；所述公式为：Wm＝(Wk×Am)/(RCFkm×Ak)，式中Ak为槐定碱内参物的峰面积，Wk为槐定碱内参物的质量；Am为被测组分的峰面积，Wm为被测组的质量，RCFkm为苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的校正因子。。优选的，所述步骤(2)和步骤(4)中，高效液相色谱的测定条件是：以乙腈为流动相A和KH2PO4溶液为流动相B所组成的梯度洗脱液按照下表的洗脱程序进行梯度洗脱：时间/min0256065流动相A/％55125流动相B/％95958895其中，柱温为30℃，流速为1ml/min，进样量为20μl，检测波长为205nm。优选的，所述步骤(1)和步骤(2)中，所述过滤是采用0.2～0.25um的滤膜过滤。优选的，所述过滤是采用0.22um的滤膜过滤。优选的，所述KH2PO4溶液为含有2ml/L三乙胺的浓度为0.05mol/L的KH2PO4溶液，其中三乙胺在流动相B中作为扫尾剂，苦豆子总生物碱属于一种生物总碱，用高效液相色谱仪检测时，峰形会出现拖尾现象，而三乙胺能有效改善拖尾现象，对色谱峰的积分计算更准确。本专利技术以槐定碱为内参物，计算苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱不同进样量下所得的相对校正因子RCF，并在三台不同的色谱仪及三根不同的色谱柱上考察相对校正因子的重现性。以Pearson相关系数评价本专利技术的检测结果是否与外标法所得结果具有相关性。本专利技术的原理如下：本专利技术利用一测多评方法，即通过测定苦豆子总生物碱中的一个成分，实现对其他7个生物碱成分定量的方法。依据一定的线性范围内成分的量(质量或浓度)与检测器响应成正比，即：W＝RCF×A。以苦豆子总生物碱中某一典型组分(如槐定碱)作为内参物，建立该组分与其他组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算其他组分的含量。如苦豆子总生物碱中含有i个组分，则存在：Wi/Ai＝RCFi(i＝1,2,…,k,…,m)式中Ai为组分i的峰面积；Wi为i组分的量。选取其中槐定碱k为内标，建立组分k与其他组分m之间的相对校正因子，有相对校正因子RCFkm＝RCFk/RCFm＝(Wk×Am)/(Wm×Ak)，由此可导出定量计算公式：Wm＝(Wk×Am)/(RCFkm×Ak)，式中Ak为内参物峰面积，Wk为内参物量；Am为组分m的峰面积，Wm为组分m的量，RCFkm为相对校正因子。本专利技术的有益效果是：本专利技术利用一测多评法，以苦豆子生物总碱中的槐定碱作为内参物，计算槐定碱与其他7种具有中药活性的生物碱(金花雀碱、苦豆碱、槐果碱、苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱及莱曼碱)的相对校正因子，进而测定出苦豆子生物总碱中的其他7种生物碱的含量。与现有技术以槐定碱单一成分作为苦豆子总生物碱的评价指标的方法相比，本专利技术的方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价苦豆子总生物碱的质量，可解决因对照品缺乏而无法客观合理地控制中药材及其制剂质量的问题，对控制质量和保证临床疗效具有重要意义；本专利技术的方法具有简便、快捷、易于普及和掌握的优点。附图说明图1是本专利技术的一种苦豆子生物总碱的质量控制方法的空白溶剂(流动相B)的高效液相色谱图。图2是本专利技术的一种苦豆子生物总碱的质量控制方法的对照品溶液的高效液相色谱图。图3是本专利技术的一种苦豆子生物总碱的质量控制方法的供试品溶液的高效液相色谱图。图2和图3中：色谱峰归属：1——金花雀碱；2——苦豆碱；3——槐定碱；4——氧化苦参碱；5——氧化槐果碱；6——苦参碱；7——槐果碱；8——莱曼碱具体实施方式结合以下实施例对本专利技术作进一步说明。本专利技术的一种苦豆子生物总碱的质量控制方法，采用一测多评法，以苦本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苦豆子生物总碱的质量控制方法，其特征在于：采用一测多评法，以苦豆子生物总碱中的槐定碱作为内参物，检测苦豆子生物总碱中的苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的质量，具体包括以下步骤：(1)对照品溶液的配制：分别精密称定槐定碱、苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱，置于容量瓶内，用KH2PO4溶液溶解并定容，然后过滤，分别获得槐定碱、苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的对照品溶液，备用；(2)供试品溶液的配制：精密称定一定量的苦豆子总生物碱样品，置于容量瓶内，用KH2PO4溶液溶解并定容，然后过滤，获得苦豆子总生物碱的供试品溶液，备用；(3)校正因子RCF的计算：取步骤(1)制备得到的混合对照品溶液，进样2,4,8,12,16,20μL，用高效液相色谱测定色谱图并计算峰面积，选取槐定碱作为内参物，分别计算苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的校正因子RCFkm。(4)样品中活性成分的测定取步骤(2)制备得到的供试品溶液注入高效液相色谱进行测定，获得色谱图，按以下公式分别计算出苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的质量；所述公式为：Wm＝(Wk×Am)/(RCFkm×Ak)，式中Ak为槐定碱内参物的峰面积，Wk为槐定碱内参物的质量；Am为被测组分的峰面积，Wm为被测组的质量，RCFkm为苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的校正因子。...

【技术特征摘要】
1.一种苦豆子生物总碱的质量控制方法，其特征在于：采用一测多评法，以苦豆子生物总碱中的槐定碱作为内参物，检测苦豆子生物总碱中的苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的质量，具体包括以下步骤：(1)对照品溶液的配制：分别精密称定槐定碱、苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱，置于容量瓶内，用KH2PO4溶液溶解并定容，然后过滤，分别获得槐定碱、苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的对照品溶液，备用；(2)供试品溶液的配制：精密称定一定量的苦豆子总生物碱样品，置于容量瓶内，用KH2PO4溶液溶解并定容，然后过滤，获得苦豆子总生物碱的供试品溶液，备用；(3)校正因子RCF的计算：取步骤(1)制备得到的混合对照品溶液，进样2,4,8,12,16,20μL，用高效液相色谱测定色谱图并计算峰面积，选取槐定碱作为内参物，分别计算苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱曼碱的校正因子RCFkm。(4)样品中活性成分的测定取步骤(2)制备得到的供试品溶液注入高效液相色谱进行测定，获得色谱图，按以下公式分别计算出苦参碱、金花雀碱、槐果碱、氧化槐果碱、苦豆碱、氧化苦参碱、莱...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋丽军，赵文昌，梁丽萍，陈洪浪，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44