一种miRNAs心衰标志物及其应用和心衰初筛检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种miRNAs心衰标志物及其应用和心衰初筛检测试剂盒。所述基于miRNAs心衰标志物的心衰初筛检测试剂盒，其包括miRNAs心衰标志物的特异性引物，所述特异性引物序列如SEQ ID NO：1‑11。本发明专利技术有益效果是：本发明专利技术提供的miRNAs心衰标志物和基于miRNAs心衰标志物的心衰初筛检测试剂盒，通过检测循环血差异表达的miRNAs可将不同病因的心衰与正常对照组区分开。具有快速、敏感和特异等特点，为临床救治和疾病控制提供一种新的检测方法和重要的实验依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种miRNAs心衰标志物及其应用和心衰初筛检测试剂盒。
技术介绍
微小RNA(microRNA或miRNAs)的发现及对基因转录后调控功能的认识为研究表观遗传学与疾病的关系开辟了新的研究领域。它是一类在进化上非常保守的、分子长度约19-25个核苷酸序列的非蛋白编码的基因家族产物。至今，miRBase数据库中已公布来自58个不同物种的总数近9000个成熟miRNAs，其中人类基因组中确认的miRNAs数目已达800多个，这些miRNAs调控着30％的人类基因及信号通路。miRNAs可通过与靶基因mRNA分子3’末端非翻译区域(Untranslated Regions UTR)特异性结合，在转录后水平沉默特定靶基因，抑制其翻译。miRNAs参与生命过程中，包括早期胚胎发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞死亡、脂肪代谢、甚至干细胞分化等一系列重要进程。越来越多的研究证实miRNAs在调控各种疾病的发生、发展及药物治疗方面起到关键的作用。目前研究发现miRNAs参与心脏的病理重构整个过程，它通过调节参与适应性和适应不良性的心室重塑的基因表达而调节心脏重构，进而导致心力衰竭的发生。2008年首次提取并检测出体液中miRNAs，并被后来的研究所证实。近年来科学家们越来越关注循环miRNAs的研究，致力于将其用于临床疾病的无创诊断预警。随着研究的深入，人们发现作为稳定的以血浆为基础的生物标记物对心血管疾病的早期诊断及治疗具有重要的临床意义。循环血miRNAs已作为生物标志物用于诊断心力衰竭和判断预后的研究。一种理想的生物标记物应满足：获得容易如血浆和非创伤性；高度特异性和敏感性；能区分不同的病变；疾病早期出现；对疾病转归变化敏感；在标本内稳定且半衰期较长；能被简单、快速、精确检测且相对廉价等。循环中的miRNAs基本能够满足上述 要求，例如它们在血液中稳定存在；序列高度进化稳定性；表达具有组织或疾病特异性；检测方法高度特异和敏感性。检测循环miRNAs作为生物标志物的方法包括实时定量PCR、miRNAs芯片法和测序法。一般做法是提取待查样本全RNA，用miRNAs芯片或测序法筛查miRNAs，并与对照组(正常)比较，将明显增高或降低超过1.5或2.0倍且统计学有显著性差异的miRNAs作为备选标志物并进行适时定量PCR验证。心力衰竭(HF)是一种复杂的病理生理综合征，是大多数心血管疾病的最终归宿。各种病理信号刺激心脏出现重构、心肌细胞凋亡、能量代谢障碍等，导致心肌收缩力下降、心脏扩大，最终出现HF。近些年，在全球范围内，HF的患病率和死亡率居高不下，患者5年死亡率高达50％，同时伴有生活质量的低下及高达15％的年住院率。对HF发病机制的研究经历了血液动力学紊乱、神经内分泌激活、分子生物学调节等理论，目前更深入到基因水平。在心衰发生发展过程中有几种生物标记物与之相关，其中最为重要的是脑钠肽(natriuretic peptides，BNP)尤其是B-BNP和NT-proBNP，对与心衰具有较高的临床诊断价值，但在某些疾病如肾功能不全、源发性醛固酮增多症以及某些甲状腺疾病是这些标志物也会增高；此外，在不同病因所致的心衰时其增高的反应性和程度不同，因此，其对心衰诊断的特异性和敏感性受到质疑，需要发现一种新的、更可靠的、更特异性的和更灵敏的预测心衰发生发展的生物标志物并应用于临床心衰早期诊断。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种更可靠的、更特异性的和更灵敏的miRNAs心衰标志物和基于miRNAs心衰标志物的心衰初筛检测试剂盒。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：提供一种miRNAs心衰标志物，包括：hsa-miR-210，hsa-miR-2110，hsa-miR-21-3p，hsa-miR-320a，hsa-miR-423-5p，hsa-miR-483-5p，hsa-miR-17-3p，hsa-miR-22-3p，hsa-miR-195-3p，hsa-miR-16-2-3p和hsa-miR-339-5p。本专利技术的另一技术方案为提供一种上述的miRNAs心衰标志物在制备心衰 初筛检测试剂盒中的应用。本专利技术的又一技术方案为提供一种基于miRNAs心衰标志物的心衰初筛检测试剂盒，所述miRNAs的心衰标志物为权利要求1所述的miRNAs心衰标志物，所述心衰初筛检测试剂盒包括逆转录反应体系和PCR反应体系，所述PCR反应体系包括针对权利要求1所述的miRNAs心衰标志物的特异性引物和通用引物，所述特异性引物序列如SEQ ID NO：1-11。本专利技术有益效果是：本专利技术提供的miRNAs心衰标志物和基于miRNAs心衰标志物的心衰初筛检测试剂盒，通过检测循环血差异表达的miRNAs可将不同病因的心衰与正常对照组区分开。具有快速、敏感和特异等特点，为临床救治和疾病控制提供一种新的检测方法和重要的实验依据。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。本专利技术最关键构思：采集静脉血提取血浆并提取全RNA，采用二代测序法建立miRNAs文库和心衰患者循环血miRNAs表达谱；将不同病因心衰循环血miRNAs表达变化与正常对照组比较增高1.5倍以上且统计学有显著性差异(P＜0.05)作为备选心衰诊断标志物；比较不同病因心衰备选诊断标志物并筛选出共同增高的miRNAs制备miRNA芯片(心衰初筛诊断试剂盒)。实施例1一种基于miRNAs心衰标志物的心衰初筛检测试剂盒，所述miRNAs的心衰标志物为：hsa-miR-210，hsa-miR-2110，hsa-miR-21-3p，hsa-miR-320a，hsa-miR-423-5p，hsa-miR-483-5p，hsa-miR-17-3p，hsa-miR-22-3p，hsa-miR-195-3p，hsa-miR-16-2-3p和hsa-miR-339-5p。所述心衰初筛检测试剂盒包括逆转录反应体系和PCR反应体系，所述PCR反应体系包括上述心衰标志物的特异性引物，所述特异性引物序列如SEQ ID NO：1-11。表1hsa-miR-210 agcccctgcccaccgcacactg(SEQ ID NO：1) hsa-miR-2110 ttggggaaacggccgctgagtg(SEQ ID NO：2) hsa-miR-21-3p caacaccagtcgatgggctgt(SEQ ID NO：3) hsa-miR-320a aaaagctgggttgagagggcga(SEQ ID NO：4) hsa-miR-423-5p tgaggggcagagagcgagacttt(SEQ ID NO：5) hsa-miR-483-5p aagacgggaggaaagaagggag(SEQ ID NO：6) hsa-miR-17-3p actgcagtga aggcacttgt ag(SEQ ID NO：7) hsa-miR-22-3p aagctgccag ttgaagaact gt(SEQ ID NO：8) hsa-miR-195-3p tagcag cacagaaata ttggc本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种miRNAs心衰标志物，其特征在于，包括：hsa‑miR‑210，hsa‑miR‑2110，hsa‑miR‑21‑3p，hsa‑miR‑320a，hsa‑miR‑423‑5p，hsa‑miR‑483‑5p，hsa‑miR‑17‑3p，hsa‑miR‑22‑3p，hsa‑miR‑195‑3p，hsa‑miR‑16‑2‑3p和hsa‑miR‑339‑5p。

【技术特征摘要】
1.一种miRNAs心衰标志物，其特征在于，包括：hsa-miR-210，hsa-miR-2110，hsa-miR-21-3p，hsa-miR-320a，hsa-miR-423-5p，hsa-miR-483-5p，hsa-miR-17-3p，hsa-miR-22-3p，hsa-miR-195-3p，hsa-miR-16-2-3p和hsa-miR-339-5p。2.权利要求1所述的mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：季军，王涛，王明帮，何霞，陈小玲，
申请(专利权)人：季军，王涛，
类型：发明
国别省市：广东;44