检测人类骨膜蛋白的新型测定制造技术

本披露提供了一种稳健的、灵敏的和特异的测定，用于检测和测量获得自人类患者的样品中的骨膜蛋白水平，这些人类患者患有、或疑似患有IL‑13介导的疾病或障碍。本披露进一步提供了新颖的抗骨膜蛋白单克隆抗体，这些单克隆抗体识别人类骨膜蛋白的至少亚型1、2、3、4、7、和8，并且提供了包括这些抗体中的一种或多种的测定试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2014年2月7日提交的美国临时专利申请号61/936,967的优先权，将该申请的内容通过引用特此结合。对以电子方式提交的序列表的引用将与本申请一起以电子方式提交的处于ASCII文本文件形式的序列表的内容(名称：序列表-文本；大小：73,429字节；以及创建日期：2015年2月2日)通过引用以其全文结合在此。背景白介素(IL)-13是114个氨基酸的细胞因子，具有约12kDa的未修饰的分子量(麦肯齐(McKenzie)，A.N.，等人，免疫学杂志(J Immunol)，1993，150：5436-44；明蒂(Minty)，A.，等人，自然(Nature)，1993，362：248-50)。在过敏性炎症的哮喘和啮齿类动物模型中，已经显示出IL-13水平与疾病严重程度相关(参见，美国专利申请公开号2012-0052060，公开于2012年3月1日，并且将该文件通过引用以其全文结合在此)。支气管哮喘是以呼吸道高反应性、粘液产生过度、纤维化和增加的血清IgE水平为特征的常见的持续性肺部炎性疾病。气道高反应性(AHR)是气道对非特异性刺激(如冷空气)的过度收缩。AHR与粘液产生过多都被认为造成了变异性气道阻塞，该变异性气道阻塞造成哮喘发作(恶化)的呼吸短促特征并且导致与该疾病相关联的死亡率。当前英国胸科协会(BTS)和全球哮喘防治创议(GINA)指南提出一种逐步治疗哮喘的方法(瑟赛尔提(Society)，B.T.，胸(Thorax)，2003.58增刊1：1-94；GINA，全球哮喘管理和预防战略(Global Strategy for Asthma Management and Prevention)，2002，国立卫生研究院(National Institute of Health))。轻度至中度哮喘通常可以通过使用吸入性皮质类固醇，结合以β-激动剂或白三烯抑制剂来控制。然而，由于记录的皮质类固醇的副作用，患者往往不依从治疗方案，这降低了治疗的有效性(米尔格龙(Milgrom)，H.等人，过敏、哮喘和免疫学年鉴(Ann Allergy Asthma Immunol)，2002，88：429-31；菲什(Fish)，L.和C.L.伦格(Lung)，过敏、哮喘和免疫学年鉴，2001，86：24-30；本德(Bender)，B.G.变态反应学与临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol)，2002，109：S554-9)。慢性阻塞性肺病(COPD)包括患有不同程度的慢性支气管炎、小气道疾病以及肺气肿的患者群体，并且特征在于进行性不可逆性肺功能下降，该下降对当前基于哮喘的疗法应答不良。郑(Zheng)等人(临床研究杂志(J Clin Invest)，2000.106：1081-93)已经证实小鼠肺中过量表达IL-13引起肺气肿、升高的粘液产生和炎症，反映人COPD的多个方面。因此，迹象是IL-13在COPD的发病机制中起重要作用，特别是在具有哮喘样特征的患者中。IL-13还可能在炎性肠病的发病机制中起作用，并且与纤维化病症，如特发性肺纤维化(IPF)相关。参见，例如，乔瓦尼(Jovani)，M.，等人，当前药物靶标(Curr Drug Targets)，2013.12：1444-52；和拉菲(Rafii)，R.，等人，胸病杂志(J Thorac Dis.)2013.1：48-73。骨膜蛋白(又称成骨细胞特异因子2)是属于成束蛋白家族的基质细胞蛋白(增冈(Masuoka)，M.，等人，临床研究杂志(J Clin Invest)2012.122：2590-2600)。骨膜蛋白是IL-4或IL-13在肺成纤维细胞中的高度诱导型产物，并且涉及支气管哮喘的纤维化、以及过敏性炎症的其他固化(1d.)。而已知增加的骨膜蛋白水平与某些IL-13介导的疾病或障碍相关，但仍需要特异的且灵敏的测定来确定在疑似或已知患有IL-13-介导的疾病或障碍的患者中的骨膜蛋白水平的变化。概述本披露提供了通过测量受试者或患者中的骨膜蛋白水平来治疗和诊断IL-13-介导的疾病或障碍的方法和组合物。在此提供的方法可以包括使用一种或多种抗骨膜蛋白抗体或其抗原结合片段的免疫测定，其中这些抗体或其片段识别人类骨膜蛋白的亚型1、2、3、和4。在此提供的组合物可以包括识别人类骨膜蛋白的亚型1、2、3、和4的抗体或其片段。在一方面，本披露提供了对患有IL-13介导的疾病或障碍的患者进行治疗的方法，该方法包括如果取自患者的样品中的骨膜蛋白水平高于预定阈值水平，或相对于一种或多种对照样品中的骨膜蛋白水平是提高的，那么向该患者给予IL-13拮抗剂。在某些方面，可以通过具有高骨膜蛋白水平将患者鉴别为治疗的候选者。根据这些方面，患者的骨膜蛋白水平可以在采用一种或多种抗骨膜蛋白抗体或其抗原结合片段的免疫测定中测量，其中抗体或其片段识别人类骨膜蛋白的亚型1、2、3、和4。在某些方面，由例如医疗提供者从患者取得的样品，可以提交至例如临床实验室，该临床实验室进行免疫测定，测量样品中的骨膜蛋白水平。本披露进一步提供了治疗患有或疑似患有IL-13-介导的疾病或障碍的患者的方法，其中该方法包括提交第一样品，例如取自患者的体液或组织，以用于测量样品中的第一骨膜蛋白水平。如上所述，患者的骨膜蛋白水平可以在采用一种或多种抗骨膜蛋白抗体或其抗原结合片段的免疫测定中测量，所述抗体或其抗原结合片段识别人类骨膜蛋白的亚型1、2、3、和4。该方法进一步包括，如果在该第一样品中该患者的骨膜蛋白水平高于预定阈值水平，或相对于一种或多种对照样品中的骨膜蛋白水平是提高的，那么向该患者给予IL-13拮抗剂，该患者例如是鉴定用于IL-13-介导的疾病或障碍的治疗的患者。该方法可以进一步包括提交取自患者的第二样品，用于测量样品中的第二骨膜蛋白水平。如上所述，患者的第二骨膜蛋白水平可以在采用一种或多种抗骨膜蛋白抗体或其抗原结合片段的免疫测定中测量，所述抗体或其抗原结合片段识别人类骨膜蛋白的亚型1、2、3、和4。该方法进一步包括如果第二样品中患者的骨膜蛋白水平高于第一样品中的骨膜蛋白水平，那么增加或维持向患者给予的IL-13拮抗剂的量或频率，或者如果第二样品中患者的骨膜蛋白水平低于第一样品中的骨膜蛋白水平或与其几乎一样，那么维持或减少向患者给予的IL-13拮抗剂的量或频率，该患者是例如鉴定为用于IL-13-介导的疾病或障碍的治疗的患者。在另一方面，本披露提供了对患有IL-13-介导的疾病或障碍的患者进行治疗的方法，其中该方法包括测量第一样品中的骨膜蛋白水平，该第一样品获得自患有IL-13-介导的疾病或障碍的患者。同样，第一样品中患者的骨膜蛋白水平可以在采用一种或多种抗骨膜蛋白抗体或其抗原结合片段的免疫测定中测量，所述抗体或其抗原结合片段识别人类骨膜蛋白的亚型1、2、3、和4。该方法进一步包括确定第一样品中患者的骨膜蛋白水平是否高于预定阈值水平，或相对于一种或多种对照样品中的骨膜蛋白水平是否是提高的，并且如果是这样的话，建议医疗提供者向患者给予IL-13拮抗剂。该方法可以进一步包括测量获得自患者的第二样品中的骨膜蛋白水平，其中同样，第二样品中患者的骨膜蛋白水平可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗体或其抗原结合片段或衍生物，其结合至与以下项所结合表位相同的骨膜蛋白表位：从保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏号PTA‑120210下的杂交瘤产生的单克隆抗体4B4.B11、从保藏在ATCC保藏号PTA‑120211下的杂交瘤产生的单克隆抗体7B5.C4、或从保藏在ATCC保藏号PTA‑120209下的杂交瘤产生的单克隆抗体3C11.G5。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.07 US 61/9369671.一种分离的抗体或其抗原结合片段或衍生物，其结合至与以下项所结合表位相同的骨膜蛋白表位：从保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏号PTA-120210下的杂交瘤产生的单克隆抗体4B4.B11、从保藏在ATCC保藏号PTA-120211下的杂交瘤产生的单克隆抗体7B5.C4、或从保藏在ATCC保藏号PTA-120209下的杂交瘤产生的单克隆抗体3C11.G5。2.一种分离的抗体或其抗原结合片段或衍生物，其竞争性地抑制以下项与骨膜蛋白的结合：从保藏在ATCC保藏号PTA-120210下的杂交瘤产生的单克隆抗体4B4.B11、从保藏在ATCC保藏号PTA-120211下的杂交瘤产生的单克隆抗体7B5.C4、或从保藏在ATCC保藏号PTA-120209下的杂交瘤产生的单克隆抗体3C11.G5。3.如权利要求1或权利要求2所述的分离的抗体或其片段或衍生物，其包括具有三个重链互补决定区(CDR)即VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变结构域(VH)、以及具有三个轻链CDR即VLCDR1、VLCDR2、和VLCDR3的轻链可变结构域(VL)，其中该分离的抗体或其片段的CDR与以下项的CDR是一致的：从保藏在ATCC保藏号PTA-120210下的杂交瘤产生的单克隆抗体4B4.B11、从保藏在ATCC保藏号PTA-120211下的杂交瘤产生的单克隆抗体7B5.C4、或从保藏在ATCC保藏号PTA-120209下的杂交瘤产生的单克隆抗体3C11.G5。4.如权利要求1或权利要求3所述的分离的抗体或其片段或衍生物，其包括与以下项的VH和VL一致的VH和VL：从保藏在ATCC保藏号PTA-120210下的杂交瘤产生的单克隆抗体4B4.B11、从保藏在ATCC保藏号PTA-120211下的杂交瘤产生的单克隆抗体7B5.C4、或从保藏在ATCC保藏号PTA-120209下的杂交瘤产生的单克隆抗体3C11.G5。5.一种选自下组的杂交瘤，该组由以下各项组成：保藏在ATCC保藏号PTA-120210下的杂交瘤、保藏在ATCC保藏号PTA-120211下的杂交瘤、保藏在ATCC保藏号PTA-120209下的杂交瘤、及其组合。6.一种由如权利要求5所述的杂交瘤生产的分离的抗体或其片段或衍生物。7.一种产生抗体的细胞培养物，包括：选自下组的杂交瘤，该组由以下各项组成：保藏在ATCC保藏号PTA-120210下的杂交瘤、保藏在ATCC保藏号PTA-120211下的杂交瘤、保藏在ATCC保藏号PTA-120209下的杂交瘤、及其组...

【专利技术属性】
技术研发人员：P乔扈里，R瓦基，M梁，YW李，K斯特雷歇尔，K拉纳德，E格兰特，L格林利斯，Y姚，M帕克，
申请(专利权)人：免疫医疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US