本发明专利技术公开了一种改良的Celsior供心保存液、制备方法及应用，所述器官保存液的组分为氯化钾；氯化镁；氯化钙；甘露醇；组氨酸；还原型谷胱甘肽；谷氨酸钠；乳糖酸钠；利拉利汀；余量双蒸水。制备方法为将双蒸水加入容器中，再依次加入氯化钾、氯化镁、氯化钙，搅拌至颜色变清晰；再加入甘露醇、组氨酸、还原型谷胱甘肽、谷氨酸钠，搅拌至颜色变清晰；然后加入乳糖酸钠，搅拌至颜色变清晰；调节溶液的PH值和渗透压值，双蒸水定容，放置4℃低温保存。本发明专利技术的优点：具有良好较长时间器官保存效果；促进供心复灌后心功能的恢复。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及器官保存液领域，具体的说，是一种改良的Celsior供心保存液及其制备方法。
技术介绍
心脏移植作为终末期心脏疾病的有效治疗方法已被广泛接受。目前，低温保存是临床运输供心过程中最主要的措施，但有效保存时间较少超过6小时，这为远程供心获取造成了困难，且供心在低温保存后再灌注时心功能的恢复也效率低下。故探索有效的保存液，以延长单纯低温保存时限、减轻供心再灌注损伤、促进长时间缺血后供心心功能的恢复是心脏移植成功的关键。Celsior液是一种高钠、低钾、低粘滞度的细胞外液型保存液，易于均匀扩散至组织间隙，提高灌注效果，利于短时间内使供心降温。组分中的甘露醇和乳糖酸盐是大分子物质，作为防渗透剂，阻止细胞水肿和间质水肿，平衡细胞内外和血管内外的水。还原型谷胱甘肽、组氨酸及甘露醇，可清除羟自由基，防止氧自由基介导的内皮细胞损伤。组氨酸/乳糖酸缓冲系统，可预防细胞内中毒并促进能量再生。钠和镁离子可限制钙内流，阻止心肌细胞内“钙超载”。钙超载可激活膜磷脂酶A2，引起细胞受损。但微量的钙离子也可避免“钙反常”现象。所谓的“钙反常”是指无钙灌注液停跳心脏后，再灌注后反而出现细胞内钙积聚，过多的钙使心肌处于强直收缩状态的现象。低钾即可使供心快速停搏，又可限制电压依赖依赖性钙通道的开放，减轻缺血导致的内皮和细胞损伤。但单纯Celsior液未能使供心保存超过6小时。利拉利汀（linagliptin）是一种二肽基肽酶Ⅳ（ipeptidyl-peptidase 4 inhibitor，DPP-4）抑制剂，因能通过抑制DPP-4对体内肠促胰岛素胰高血糖素样肽（glucagon-likepeptide-1，GLP-1）和糖依赖性胰岛素释放肽（gastric inhibitory polypeptide，GIP）等多种激素的降解，促进胰岛素分泌降低血糖，在临床上主要用于治疗2型糖尿病。近期研究发现，它还能发挥除降糖作用之外的心血管保护作用。利拉利汀可通过激活蛋白激酶A等途径来激活心脏保护性激酶，从而减小心肌梗死面积；通过诱导心肌梗死后心脏保护基因及相关蛋白表达增加、稳定心脏缺血时的电生理状态、减弱缺血时心律失常的易感性、改善缺血再灌注时心肌细胞线粒体障碍来介导心肌保护作用。同时可增加GLP-1水平，GLP-1与其受体结合激活细胞存活信号通路，改善心肌梗死后的左室重构。心肌梗死后重组人基质细胞衍生因子-1α（CXCL12/SDF-1a）水平表达升高，它是吸引干细胞至心脏损伤处的重要趋化因子，通过与CXCR4结合介导一系列心肌再生及修复过程。利拉利汀可通过抑制DPP-4，增加对SDF-1a的降解，促进心肌再生；也可直接作用于心脏活性肽，通过非GLP-1依赖途径调节脑钠肽、神经肽Y、SDF-1a的活性。各种研究提示，利拉利汀可通过GLP-1或非GLP-1途径发挥对心脏的保护作用。但现有技术中，利拉利汀仅能作为临床医疗用途，其在脱离人体的研究或实验中的保护作用及机制尚不明确。
技术实现思路
本专利技术首先要解决的技术问题是提供一种改良的Celsior供心保存液，以期获得延长供心保存时间、促进供心复灌后心功能的恢复的效果。本专利技术解决上述技术问题是通过以下技术方案实现的：一种改良的Celsior供心保存液，其特征在于，在1000ml保存液中，组分分别为：氯化钾1.12g；氯化镁2.64g；氯化钙0.01g；甘露醇10.93g；组氨酸4.66g；谷氨酸钠3.74g；乳糖酸钠6.90ml；还原型谷胱甘肽0.92g；利拉利汀1.18×10-7 ~3.54×10-7g；余量为双蒸水。本专利技术还提供一种上述改良的Celsior供心保存液的制备方法，包含具体步骤如下：按照1000ml配置量的具体步骤为，（1）将800ml双蒸水加入大于1000ml容器中，再依次加入氯化钾1.12g、氯化镁2.64g、氯化钙0.01g，搅拌至颜色变清晰；再加入甘露醇10.93g、组氨酸4.66g、谷氨酸钠3.74g、乳糖酸钠6.90ml，搅拌至颜色变清晰；然后加入还原型谷胱甘肽0.92g、利拉利汀1.18×10-7 ~3.54×10-7g，搅拌至颜色变清晰；（2）将溶液的PH调至7.30，渗透压调至320 mOsm/L，双蒸水定容至1000ml，放置4℃低温保存。本专利技术还提供利拉利汀在制备上述的一种改良的Celsior供心保存液的应用。利拉利汀在所述改良的Celsior供心保存液中用于预防供心缺血复灌损伤。利拉利汀在所述改良的Celsior供心保存液中通过激活PI3K/Akt通路达到预防供心缺血复灌损伤的目的。本专利技术的有益效果是：①高钠（100mmol / L）和低钾（15mmol / L）可提高灌注效果，缩短供心降温时间。②低钾（15mmol / L）即可使供心快速停搏，又可减轻缺血导致的内皮和细胞损伤。③高钠（100mmol / L）和高镁（13mmol / L）可限制钙内流，阻止心肌细胞内“钙超载”。④微量钙（0.25mmol / L）可避免“钙反常”现象。⑤甘露醇和乳糖酸盐可阻止细胞水肿和间质水肿。⑥组氨酸/乳糖酸缓冲系统，可预防细胞内中毒并促进能量再生。⑦谷氨酸可促进心肌细胞在缺血再灌注期间的能量的合成。⑧添加的利拉利汀作为DPP-4抑制剂，研究发现其可通过激活PI3K/Akt通路而延长供心低温保存时间、促进供心复灌后心功能的恢复。具体实施方式实施例1，改良Celsior供心保存液的配方（以1000ml为例）。原材料的准备：氯化钾1.12g；氯化镁2.64g；氯化钙0.01g；甘露醇10.93g；组氨酸4.66g；谷氨酸钠3.74g；乳糖酸钠6.90ml；还原型谷胱甘肽0.92g；利拉利汀1.18×10-7 ~3.54×10-7g；足量双蒸水。实施例2，改良Celsior供心保存液的制备方法（以配置1000ml为例）。将800ml双蒸水加入大于1000ml容器中，再依次加入氯化钾1.12g、氯化镁2.64g、氯化钙0.01g，搅拌至颜色变清晰；再加入甘露醇10.93g、组氨酸4.66g、谷氨酸钠3.74g、乳糖酸钠6.90ml，搅拌至颜色变清晰；然后加入还原型谷胱甘肽0.92g、利拉利汀1.18×10-7 ~3.54×10-7g，搅拌至颜色变清晰；将溶液的PH调至7.30，渗透压调至320 mOsm/L，双蒸水定容至1000ml，放置4℃低温保存。实施例3，改良Celsior供心保存液效果的实验。采用离体鼠心非循环式Langendorff灌流功能测试模型，通过与单纯Celsior供心保存液相比较，研究自行设计的一种改良Celsior供心保存液较长时间（9小时）4℃低温保存离体鼠心的保存效果。受试对象：雄性SD大鼠，体重250~300g。根据保存液成分不同分组为：组1：单纯Celsior液停搏并保存9小时组（Celsior）；组2：DPP-4抑制剂低浓度（Celsior液中含有0.25nmol/L的利拉利汀）并保存9小时组（0.25nM）；组3：DPP-4抑制剂中浓度（Celsior液中含有0.5nmol/L的利拉利汀）并保存9小时组（0.5nM）；组4：DPP-4抑制剂高浓度（Celsior液中含有0.75nmol/L的利拉本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种改良的Celsior供心保存液，其特征在于，在1000ml保存液中，组分分别为：氯化钾1.12g；氯化镁2.64g；氯化钙0.01g；甘露醇10.93g；组氨酸4.66g；谷氨酸钠3.74g；乳糖酸钠6.90ml；还原型谷胱甘肽0.92g；利拉利汀1.18×10‑7 ~3.54×10‑7g余量为双蒸水。
【技术特征摘要】
1.一种改良的Celsior供心保存液，其特征在于，在1000ml保存液中，组分分别为：氯化钾1.12g；氯化镁2.64g；氯化钙0.01g；甘露醇10.93g；组氨酸4.66g；谷氨酸钠3.74g；乳糖酸钠6.90ml；还原型谷胱甘肽0.92g；利拉利汀1.18×10-7 ~3.54×10-7g余量为双蒸水。2.根据权利要求1所述的一种改良的Celsior供心保存液的制备方法，其特征在于，按照1000ml配置量的具体步骤为，（1）将800ml双蒸水加入大于1000ml容器中，再依次加入氯化钾1.12g、氯化镁2.64g、氯化钙0.01g，搅拌至颜色变清晰；再加入甘...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈莹莹，郑鸣之，何卉蕙，沈晨露，章逸洲，沈岳良，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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