一种蝉花孢梗束液体培养基制造技术

本发明专利技术提供一种用于人工培养蝉花孢梗束的液体培养基，该培养基的原料主要包括：酵母浸出粉0.2～3％，大豆水解蛋白0.1～2％，余量补水至100％；本发明专利技术培养基还可加入蔗糖1～8％、氯化钙0.005～0.1％和磷酸二氢钾0.01～0.5％。本发明专利技术培养基培养的蝉花孢梗束产量及其有效成分含量显著提高，产品质量稳定，适用于大规模工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蝉花人工培养孢梗束中液体培养基，具体的说，涉及蝉花人工培养的新工艺。
技术介绍
蝉花(Isaria cicadae Miquel)属于真菌界(FUNGI)的子囊菌门(Ascomycota)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草科(Cordycipitaceae)、棒束孢属(Isaria)。蝉花(Isaria cicadae Miquel)是广布种，其菌种可以自已采集分离也可以购买。蝉花在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区有广泛分布。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的6-8月，按照一般中药材的采集方法都可采到。蝉花是我国名贵的中药材，是寄生在蝉(俗称“知了”)上的一种虫草菌。其药用已有1000多年历史，是我国传统的名贵药材之一，具有多方面的药用价值。主要成分有：腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。蝉花具有调节人体免疫的功能，提高食欲，促进睡眠，增强自身抗病的能力。在这些成分当中，虫草多糖具有独特的生物活性，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗辐射、抗衰老等功效，免疫调节作用成为研究开发的热点。腺苷能抑制中枢神经元的兴奋性，可以扩张冠状及周围血管、增加冠状动脉血流量、降低血压、减慢心率等作用。腺苷还具有抗血小板聚集、抗辐射和抗肿瘤等作用。不仅如此，蝉花中的活性成分ISP-1具有双向免疫调节活性，可以大大的提高器官移植手术的成功率，对患者的康复也有着明显的积极效果。自1993年陈祝安先生研究了蝉花的人工培养开始，蝉花人工培养孢梗束的
种子液和发酵液一直采用20％土豆煮汁，3％白砂糖，余量补水至100％。现有技术尚无使用相同的培养基配方用于蝉花人工培养孢梗束的相关报道和应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于人工培养蝉花孢梗束的液体培养基。本专利技术进一步提供一种用于人工培养蝉花孢梗束的方法。一种用于人工培养蝉花孢梗束的液体培养基，该培养基的原料主要包括：酵母浸出粉，大豆水解蛋白，水。进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.2～3％，大豆水解蛋白0.1～2％，余量补水至100％。更进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.3～1％，大豆水解蛋白0.2～1％，余量补水至100％。更进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.4～0.8％，大豆水解蛋白0.3～0.8％，余量补水至100％。更进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.4％，大豆水解蛋白0.3％，余量补水至100％。进一步，所述培养基的原料组成中还可以加入蔗糖1～8％；更进一步，蔗糖加入量为2～5％；更进一步，蔗糖加入量为3～4％；更进一步，蔗糖加入量为3.5％；更进一步，所述蔗糖为白砂糖。进一步，所述培养基的原料组成中还可以加入氯化钙0.005～0.1％，磷酸二氢钾0.01～0.5％；更进一步，氯化钙和磷酸二氢钾的加入量为氯化钙0.008～0.05％，磷酸二氢钾0.02～0.2％；更进一步，氯化钙和磷酸二氢钾的加入量为氯化钙0.01～0.02％，磷酸二氢钾0.05～0.1％；更进一步，氯化钙和磷酸二氢钾的加入量为氯化钙0.01％，磷酸二氢钾0.05％。本专利技术所述的培养基用于蝉花菌种经斜面菌种培养、液体摇瓶培养、种子罐液体培养、发酵罐液体发酵培养及固体出草培养，通过上述培养步骤得到孢梗束、孢子粉和菌质；其中斜面菌种培养、液体摇瓶培养、种子罐液体培养、发酵罐液体发酵培养及固体出草培养均可采用常规方法。本专利技术进一步提供一种人工培养蝉花孢梗束的方法，该方法包括斜面菌种培养、液体摇瓶培养、种子罐液体培养、发酵罐液体发酵培养及固体出草培养步骤，其中所述液体摇瓶培养、种子罐液体培养、发酵罐液体发酵培养及固体出草培养步骤中液体培养基原料主要包括：酵母浸出粉，大豆水解蛋白，水。所述培养方法步骤还包括种子罐扩大培养。进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.2～3％，大豆水解蛋白0.1～2％，余量补水至100％。更进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.3～1％，大豆水解蛋白0.2～1％，余量补水至100％。更进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.4～0.8％，大豆水解蛋白0.3～0.8％，余量补水至100％。更进一步，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.4％，大豆水解蛋白0.3％，余量补水至100％。进一步，所述培养基的原料组成中还可以加入蔗糖1～8％；更进一步，蔗糖加入量为2～5％；更进一步，蔗糖加入量为3～4％；更进一步，蔗糖加入量为3.5％；更进一步，所述蔗糖为白砂糖。进一步，所述培养基的原料组成中还可以加入氯化钙0.005～0.1％，磷酸二氢钾0.01～0.5％；更进一步，氯化钙和磷酸二氢钾的加入量为氯化钙0.008～0.05％，磷酸二氢钾0.02～0.2％；更进一步，氯化钙和磷酸二氢钾的加入量为氯化钙0.01～0.02％，磷酸二氢钾0.05～0.1％；更进一步，氯化钙和磷酸二氢钾的加入量为氯化钙0.01％，磷酸二氢钾0.05％。本专利技术中所用蝉花(Isaria cicadae Miquel)是广布种，可以自制也可以购买。蝉花在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区有广泛分布。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的6-8月，按照一般中药材的采集方法都可采到。采到的蝉花可以依下法分离到蝉花菌种，具体步骤如下：菌株的分离方法是：在超镜工作台上，在无菌条件下，将采来的新鲜虫草
用无菌水冲洗干净，置于已灭菌的直径为15cm的培养皿中，虫草的内菌核部分(虫体)用打湿的脱脂棉包裹，以保湿。虫草的子实体下方放置一灭菌的载玻片，虫草菌核部分用小玻片垫起，以使可孕部分不要直接接触载玻片，其距离约0.5cm左右。然后将培养皿放置于20℃±0.5℃的光照培养箱培养，待蝉花孢子弹射于载玻片上时，在孢子周围滴加刚溶化的PDA培养基少许，移出玻片，置于另一灭菌的培养皿中保湿培养，待长出菌丝后用接种针挑取少量菌丝转另一平皿(SDAY培养基)培养(同上)，直至长出单一的纯化的菌落为止。并经形态学或分子生物学方法验证，该菌株为蝉花虫草(Isaria cicadae Miquel)无性型。本专利技术优选CN102851353A公开的蝉拟青霉菌株[Paecilomyces cicadae (Miq.)Samson]已于2009年11月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为CGMCC No.3453。本专利技术与原有培养基技术相比具如下优点：去掉了原使用土豆煮汁的繁琐工艺，节约了劳动力，提高了劳动生产率；解决了土豆不同品种和不同季节的质量不一问题；本专利技术首次提供了大豆水解蛋白与酵母浸出粉配比用于人工蝉花孢梗束液体培养中，蝉花孢梗束产量及其有效成分含量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于人工培养蝉花孢梗束的液体培养基，其特征在于，所述培养基的原料主要包括：酵母浸出粉，大豆水解蛋白，水。

【技术特征摘要】
1.一种用于人工培养蝉花孢梗束的液体培养基，其特征在于，所述培养基的原料主要包括：酵母浸出粉，大豆水解蛋白，水。2.如权利要求1所述的液体培养基，其特征在于，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.2～3％，大豆水解蛋白0.1～2％，余量补水至100％。3.如权利要求2所述的液体培养基，其特征在于，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.3～1％，大豆水解蛋白0.2～1％，余量补水至100％。4.如权利要求3所述的液体培养基，其特征在于，所述培养基的原料配比为(重量百分比)：酵母浸出粉0.4～0.8％，大豆水解蛋白0.3～0.8％，余量补水至100％。5.如权利要求1-4任一项所述的液体培养基，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：董建飞，唐瑶，纪伟，胡建峰，陈昳丽，陈奇超，吴迪芬，高敏逸，徐煜，孙长胜，
申请(专利权)人：浙江泛亚生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33