本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药香青兰抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和其在乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等恶性肿瘤的预防及治疗上的用途。所述的提取物通过如下方法获得：先用100:0-100:8的石油醚：丙酮混合溶剂洗脱，继用100:10的石油醚：丙酮混合溶剂洗脱，洗脱得到的石油醚-丙酮=100:10混合溶剂洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种维吾尔药香青兰抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法或/和其在肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤的预防及治疗上的用途。技术背景本品为唇形科植物香青兰，学名Dracocephalum moldavica L.，为一年生草本，全草入药。耐干旱，苗期要求土壤湿润，成株较耐早。我国黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、河南、陕西、肃及青海各地都有分布。香青兰经蒸馏得到的精油具有清爽的甜香气，宜调配食用和日用香精。工业上可用于制作香料的原料，可以制成香青兰香烟、茶、保健饮料、糖果和化妆品等。香青兰功效清胃肝热、止血、愈合伤口、燥协日乌素；主治胃肝热、胃出血、食物中毒、赫如虎、巴木病等。现在药理学研究证明香青兰具有抗心肌缺血作用和抗冠心病作用。本专利技术在研究香青兰抗肿瘤活性时意外地发现，香青兰亦具有很好的脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤的预防及治疗作用，可以应用癌症的预防和治疗。但是，对其抗肿瘤的有效成分一直不清楚，本专利技术通过系统地筛选研究，发现了香青兰的活性提取提取物，可以应用于肿瘤的预防和治疗。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种香青兰提取物，该提取物具有抗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤的作用。本专利技术还提供了以香青兰提取物作为活性成分的药物组合物及其制备方法。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药香青兰经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱用石油醚：丙酮混合溶剂＝100:0-0:100梯度洗脱(石油醚：丙酮，洗脱梯度见表1)，各石油醚：丙酮比例混合溶剂洗脱液经浓缩、干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:0-100:8，体积比)洗脱，继用石油醚：丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:10，体积比)洗脱，石油醚：丙酮100:10洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性，而其他比例的洗脱部位，没有抗肿瘤活性。优选地，先
用石油醚：丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:8，体积比)洗脱，继用石油醚：丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:10，体积比)洗脱，石油醚：丙酮100:10洗脱液干燥即得。本专利技术的抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物从未见文献报道，其100:10洗脱液的TLC分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚-乙酸乙酯-丙酮(6:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显色。具体，发现过程如下：1、香青兰经甲醇超声提取物的制备取维吾尔药香青兰20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0238A0.3421g，留样0.0149g，剩余0.3272g。2、石油醚：丙酮混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药香青兰20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0238A0.3421g，留样0.0149g，剩余0.3272g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶0.42g，空白硅胶5g，玻璃柱内径1.6cm，石油醚：丙酮系统梯度洗脱(石油醚：丙酮，体积比，洗脱梯度见表1)，柱体积12.5ml，每个梯度洗脱100ml，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：丙酮梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2、图3，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚-乙酸乙酯-丙酮(6:1:1)，石油醚-乙酸乙酯-丙酮(3:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显色。表13、抗肿瘤活性筛选方法和结果1)实验条件a)细胞株信息大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库。b)药品及试剂样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度(DMSO≤1‰)。RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐(MTT)。c)仪器CO2培养箱(SANYO，日本)垂直层流洁净工作台(上海上净净化设备有限公司)倒置生物显微镜(重庆光电仪器有限公司)低/高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)电子天平(奥豪斯仪器有限公司)酶标仪(伯乐生命医学产品有限公司)立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂)PH计(SARTORIUS，德国)2)实验方法和过程大鼠脑胶质瘤细胞株C6以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各组分以DMSO溶解为100mg/mL储存液，保存于-20℃待用。铺板后12h，观察细胞汇合率约为40％，加药，浓度均为100μg/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组(培养基+细胞；含0.1％DMSO培养基+细胞)，3个空白孔(只有培养基)。加入药物24小时后，加入20μl四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethyl-2thiazolyl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，继续培养4小时。完全弃去上清液，加入100μl DMSO，混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD值。3)实验结果表表2结果发现：本专利技术优选的技术方案为：维吾尔药香青兰经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:8，体积比)洗脱，继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚：丙酮，100:10，体积比)洗脱，石油醚:丙酮＝100:10洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到高活性提取物，即为该抗肿瘤的活性提取物。该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1所示。4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究1)提取溶剂的种类研究分别用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：表3研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。2)提取溶剂的用量研究分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比)有机溶剂提取，并测试提取物对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：表4提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。3)干燥方法的研究分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对C6细胞的抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。表5样品20g真空干燥法冷冻干燥法鼓风干燥法离心干燥法旋蒸干燥法含水量(％)108.89.75.56.5抑制率(％)71.272.360.869.766.2优选地，香青兰抗肿瘤提取物的制备方法为：维吾尔药香青兰经超声提取，提取液浓本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种维吾尔药香青兰提取物，其特征为，维吾尔药香青兰经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0‑100:8的石油醚‑丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比为100:10的石油醚‑丙酮混合溶剂洗脱，用体积比为100:10的石油醚‑丙酮混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该活性提取物。
【技术特征摘要】
1.一种维吾尔药香青兰提取物，其特征为，维吾尔药香青兰经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0-100:8的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比为100:10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，用体积比为100:10的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该活性提取物。2.如权利要求1所述的维吾尔药香青兰提取物，其特征为，提取用溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，优选甲醇或95%乙醇。3.如权利要求1所述的维吾尔药香青兰提取物，其特征为，先用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚：丙酮，100:8，体积比）洗脱，继用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚：丙酮，100:10，体积比）洗脱，用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚：丙酮，100:10，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。4.如权利要求1述维吾尔药香青兰提取物，其特征为，先用体积比100:8石油醚-丙...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，黄健，吴文熙，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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