本发明专利技术属于微生物分子分型领域，尤其涉及一种用于空肠弯曲菌快速分型的引物及方法。本发明专利技术提供的用于空肠弯曲菌快速分型的引物，包括13对空肠弯曲菌引物。本发明专利技术提供的用于空肠弯曲菌快速分型的引物具有更好的分型能力和更高的分辨指数，可以对空肠弯曲菌进行更精确的分型。此外，本发明专利技术提供的用于空肠弯曲菌快速分型的方法具有操作简便快捷、稳定性和可重复性好的优点，可以有效的辅助空肠弯曲菌感染疾病的临床诊断，是一种较为理想的空肠弯曲菌分型方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物分子分型领域，尤其涉及一种用于空肠弯曲菌快速分型的引物及方法。
技术介绍
弯曲菌是一类重要的食源性人兽共患病原菌，可引起人和动物胃肠道感染，早在1980年，世界卫生组织已将弯曲菌肠炎列为最常见的肠道传染病之一，其中空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是弯曲菌感染中最常见的一个种，约占80-90％。近年来，空肠弯曲菌感染率在世界各地普遍呈上升趋势。在欧美发达国家的感染率为50-100/10万，引起的腹泻病例数甚至超过了沙门氏菌和志贺氏菌，居于第一位。此外，空肠弯曲菌还可引发格林巴利综合症(Guillain-Barre symdrome，GBS)、急性神经肌肉瘫痪和反应性关节炎等疾病。其中，GBS是空肠弯曲菌感染后最严重的并发症，可导致呼吸肌麻痹而死亡。空肠弯曲菌广泛分布于自然界及家畜、家禽的肠道内，虽然该菌在食物中不容易生长繁殖，但其感染所需剂量低，大约摄入400-500cfu便可引发肠道感染，这对畜禽食品安全和人类健康造成了严重的威胁。因此，对空肠弯曲菌的检测研究已成为当前研究的热点。中国专利申请201110276557.4公开了一种空肠弯曲杆菌PCR检测试剂盒及其应用，该试剂盒包括一对针对空肠弯曲杆菌马尿酸酶(Hip0)基因的保守区域设计的特异性引物，对空肠弯曲杆菌具有较高的检测灵敏度。中国专利申请201510573715.0公开了一种检测空肠弯曲菌的方法及其单抗，该方法是利用抗空肠弯曲菌的单克隆抗体与空肠弯曲菌特异性结合，从而可以快速检测出空肠弯曲菌。但是，上述方法仅可以检测出空肠弯曲菌，无法对空肠弯曲菌进行进一步的分型，无法满足临床诊断的需求。由于空肠弯曲菌的抗原结构较复杂，其抗原分型尚未完全确定，目前我国已报道的空肠弯曲菌分离菌株共有57个血清型，其中人源菌株常见有10个血清型。随着近年分子生物学 及相关技术的迅猛发展，使基于其基础上的各种空肠弯曲菌基因分型方法不断推陈出新，并因其分辨力、分型率和敏感性高于表型分型方法而越来越受到人们的广泛重视。空肠弯曲菌的基因分型方法主要包括脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis，PFGE)、限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism，RFLP)、随机扩增多态性DNA(Random amplified polymorphic DNA，RAPD)等。PFGE方法分辨力高，重复性好，是目前所有分型方法中的金标准，但耗时长，费用高，且需要特定的仪器设备。RFLP技术可以区分不同的基因型，但该方法分辨力不高，检测周期相对较长。RAPD技术使用一系列具有10个碱基左右的单链随机引物，对全基因组DNA进行PCR扩增，以检测其多态性，该方法具有成本低，速度快、易于操作的优点，但重复性较差，影响因素较多。扩增基因间片断多态性(Amplified intergenic locus polymorphism，AILP)技术作为一种最新的分子分型技术在2005年建立。AILP技术对细菌分型仅需知道该菌种的全基因组或部分基因组序列，粗提DNA即可做为PCR扩增的模板，该技术操作简便，在保证分型结果具有较好的稳定性、可重复性和较高分辨率的同时可以大大节约时间与成本。但是，目前，尚未见有AILP技术应用于空肠弯曲菌基因分型的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于空肠弯曲菌快速分型的引物及方法，以弥补现有空肠弯曲菌分型技术中的不足。本专利技术提供了一种用于空肠弯曲菌快速分型的引物，包括以下13对空肠弯曲菌引物：针对mnmA基因的上游引物CJF1：5’-TTTCTCCGTAGTTGGGTCC-3’(SEQ ID NO.1)和下游引物CJR1：5’-GGTGCTTTGCCTTATCGTG-3’(SEQ ID NO.2)；针对trpC基因的上游引物CJF2：5’-AGGAACAAGCAAAGTAGGTGG-3’(SEQ ID NO.3)和下游引物CJR2： 5’-AGCCATTCTAAGTCCAAAGC-3’(SEQ ID NO.4)；针对rpmH基因的上游引物CJF3：5’-TATCCCAAGATGGTAAAAGCA-3’(SEQ ID NO.5)和下游引物CJR3：5’-CACCCCATTGGATAACAGAG-3’(SEQ ID NO.6)；针对acs基因的上游引物CJF4：5’-TGCTACAGGCACAGGAAAA-3’(SEQ ID NO.7)和下游引物CJR4：5’-AAGCTGAGTCGCATAAGAAAA-3’(SEQ ID NO.8)；针对ansA基因的上游引物CJF5：5’-GGAAACAACCCAGACTACCA-3’(SEQ ID NO.9)和下游引物CJR5：5’-GACTAACCCTACGATGACGAG-3’(SEQ ID NO.10)；针对ppk基因的上游引物CJF6：5’-TGAAGCAAGTATGGAAGGAGT-3’(SEQ ID NO.11)和下游引物CJR6：5’-AGATGAGCGAAGTAGGGTGA-3’(SEQ ID NO.12)；针对metB基因的上游引物CJF7：5’-GCGACATTATCTCCCGAACT-3’(SEQ ID NO.13)和下游引物CJR7：5’-AGGCTTAGGCTTGAACTGC-3’(SEQ ID NO.14)；针对surE基因的上游引物CJF8：5’-CTTGGTGGAGTGGGTGGAA-3’(SEQ ID NO.15)和下游引物CJR8：5’-CAGAAGTGGGAGATAARGTGA-3’(SEQ ID NO.16)；针对rplT基因的上游引物CJF9：5’-GTCATTCAAACTCCCCTCTG-3’(SEQ ID NO.17)和下游引物CJR9：5’-GCTGGAAAACTTGGTCGTG-3’(SEQ ID NO.18)；针对dnaB基因的上游引物CJF10：5’-AGGTGAAGAAATGGAAAGGG-3’(SEQ ID NO.19)和下游引物CJR10：5’-GCCGCTGAAATACATAAAGAA-3’(SEQ ID NO.20)；针对arsR基因的上游引物CJF11：5’-AGGGAACTTGGGCGTATTA-3’(SEQ ID NO.21)和下游引物CJR11：5’-CCATCGTTTGCTTTTGTATTT-3’(SEQ ID NO.22)；针对ksgA基因的上游引物CJF12：5’-AGTGCAGGGGAGATAGTYG-3’(SEQ ID NO.23)和下游引物CJR12：5’-AAGCATCAAAAGCATAAGAGG-3’(SEQ ID NO.24)；针对tonB基因的上游引物CJF13：5’-GCTTGACACTGCTACTTGGAT-3’(SEQ ID NO.25)和下游引物CJR13： 5’-TTCTATGCCTTGATTTTCTGC-3’(SEQ ID NO.26)。进一步地，所述空肠弯曲菌的上游引物与下游引物的浓度比为1∶1。进一步地，所述mnmA靶基因间隔片断的长度为201bp，trpC靶基因间隔片断的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于空肠弯曲菌快速分型的引物，其特征在于，包括以下13对空肠弯曲菌引物：针对mnmA基因的上游引物CJF1：5’‑TTTCTCCGTAGTTGGGTCC‑3’和下游引物CJR1：5’‑GGTGCTTTGCCTTATCGTG‑3’；针对trpC基因的上游引物CJF2：5’‑AGGAACAAGCAAAGTAGGTGG‑3’和下游引物CJR2：5’‑AGCCATTCTAAGTCCAAAGC‑3’；针对rpmH基因的上游引物CJF3：5’‑TATCCCAAGATGGTAAAAGCA‑3’和下游引物CJR3：5’‑CACCCCATTGGATAACAGAG‑3’；针对acs基因的上游引物CJF4：5’‑TGCTACAGGCACAGGAAAA‑3’和下游引物CJR4：5’‑AAGCTGAGTCGCATAAGAAAA‑3’；针对ansA基因的上游引物CJF5：5’‑GGAAACAACCCAGACTACCA‑3’和下游引物CJR5：5’‑GACTAACCCTACGATGACGAG‑3’；针对ppk基因的上游引物CJF6：5’‑TGAAGCAAGTATGGAAGGAGT‑3’和下游引物CJR6：5’‑AGATGAGCGAAGTAGGGTGA‑3’；针对metB基因的上游引物CJF7：5’‑GCGACATTATCTCCCGAACT‑3’和下游引物CJR7：5’‑AGGCTTAGGCTTGAACTGC‑3’；针对surE基因的上游引物CJF8：5’‑CTTGGTGGAGTGGGTGGAA‑3’和下游引物CJR8：5’‑CAGAAGTGGGAGATAARGTGA‑3’；针对rplT基因的上游引物CJF9：5’‑GTCATTCAAACTCCCCTCTG‑3’和下游引物CJR9：5’‑GCTGGAAAACTTGGTCGTG‑3’；针对dnaB基因的上游引物CJF10：5’‑AGGTGAAGAAATGGAAAGGG‑3’和下游引物CJR10：5’‑GCCGCTGAAATACATAAAGAA‑3’；针对arsR基因的上游引物CJF11：5’‑AGGGAACTTGGGCGTATTA‑3’和下游引物CJR11：5’‑CCATCGTTTGCTTTTGTATTT‑3’；针对ksgA基因的上游引物CJF12：5’‑AGTGCAGGGGAGATAGTYG‑3’和下游引物CJR12：5’‑AAGCATCAAAAGCATAAGAGG‑3’；针对tonB基因的上游引物CJF13：5’‑GCTTGACACTGCTACTTGGAT‑3’和下游引物CJR13：5’‑TTCTATGCCTTGATTTTCTGC‑3’。...
【技术特征摘要】
1.一种用于空肠弯曲菌快速分型的引物，其特征在于，包括以下13对空肠弯曲菌引物：针对mnmA基因的上游引物CJF1：5’-TTTCTCCGTAGTTGGGTCC-3’和下游引物CJR1：5’-GGTGCTTTGCCTTATCGTG-3’；针对trpC基因的上游引物CJF2：5’-AGGAACAAGCAAAGTAGGTGG-3’和下游引物CJR2：5’-AGCCATTCTAAGTCCAAAGC-3’；针对rpmH基因的上游引物CJF3：5’-TATCCCAAGATGGTAAAAGCA-3’和下游引物CJR3：5’-CACCCCATTGGATAACAGAG-3’；针对acs基因的上游引物CJF4：5’-TGCTACAGGCACAGGAAAA-3’和下游引物CJR4：5’-AAGCTGAGTCGCATAAGAAAA-3’；针对ansA基因的上游引物CJF5：5’-GGAAACAACCCAGACTACCA-3’和下游引物CJR5：5’-GACTAACCCTACGATGACGAG-3’；针对ppk基因的上游引物CJF6：5’-TGAAGCAAGTATGGAAGGAGT-3’和下游引物CJR6：5’-AGATGAGCGAAGTAGGGTGA-3’；针对metB基因的上游引物CJF7：5’-GCGACATTATCTCCCGAACT-3’和下游引物CJR7：5’-AGGCTTAGGCTTGAACTGC-3’；针对surE基因的上游引物CJF8：5’-CTTGGTGGAGTGGGTGGAA-3’和下游引物CJR8：5’-CAGAAGTGGGAGATAARGTGA-3’；针对rplT基因的上游引物CJF9：5’-GTCATTCAAACTCCCCTCTG-3’和下游引物CJR9：5’-GCTGGAAAACTTGGTCGTG-3’；针对dnaB基因的上游引物CJF10：5’-AGGTGAAGAAATGGAAAGGG-3’和下游引物CJR10：5’-GCCGCTGAAATACATAAAGAA-3’；针对arsR基因的上游引物CJF11：5’-AGGGAACTTGGGCGTATTA-3’和下游引物CJR11：5’-CCATCGTTTGCTTTTGTATTT-3’；...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕水莲，罗永文，
申请(专利权)人：广东药学院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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