一种α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法技术

一种α‑鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，涉及分离材料领域看，包括以下步骤：S1将模板分子与功能单体、交联剂、溶剂混匀；S2将载体表面进行巯基化处理；S3将S2处理得到的载体加入S1制得的混合溶液中，与功能单体交联聚合；S4将模板分子从聚合后的载体表面洗脱；S5将S4处理得到分子印迹材料真空干燥。本发明专利技术实验操作简便，无须通氮、除氧，且用三乙胺调节反应体系pH值即可引发反应，反应条件温和，时间短，此方法较传统制备分子印迹方法表现出极大的优越性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分离材料，尤其涉及一种α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法。
技术介绍
鹅膏毒肽又名鹅膏毒素，英文名为amanitin，是从剧毒磨菇中分离出来的一种多肽物质，也是一类重要生化试剂，鹅膏毒素在分子生物学、发育生物学、遗传学、生物化学、医学、生物防治等领域具有广泛的应用价值。鹅膏毒肽是一类双环八肽，已分离纯化的天然鹅膏毒肽毒素有9种，它们是α-amanitin，β-amanitin，γ-amanitin，ε-amanitin，amanin，amaninamide，amanullin，amanullinic acid，和proamanullin。其中α-amanitin的结构式如下：分子印迹是集分析化学、高分子材料及仿生生物工程等多学科发展起来的新型“人工受体”合成技术。目前分子印迹技术最成功的应用是识别有机小分子，用于识别多肽及蛋白质的成功实例非常有限，其原因是生物大分子结构复杂及热力学因素等，另一主要原因是多肽和蛋白质价格昂贵，通常难以获得足够量用于制备分子印迹聚合物。MIP分子印迹材料，相对于NIP分子印迹材料，有更高的吸附容量和更好的选择性，但传统的聚合方式实验操作复杂，条件苛刻，需无氧环境，并且后续处理过程相对冗长、费时费力、颗粒均一性较差、原料利用率较低。因此，寻求一种简单高效制备α-鹅膏毒肽分子印迹材料(α-amanitin-MIP)的制备方法至关重要。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供一种α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，包括以下步骤：S1：将模板分子与功能单体、交联剂、溶剂混匀；S2：将载体表面进行巯基化处理；S3：将S2处理得到的载体加入S1制得的混合溶液中，通过功能单体与模板分子交联聚合；S4：用洗脱液将模板分子从聚合后的载体表面洗脱，得到分子印迹材料；S5：将S4处理得到分子印迹材料真空干燥；其中，S3步骤中的聚合条件为：用碱将聚合反应液pH调至7～9，40℃～50℃下反应6～12h；所述模板分子为N-乙酰色氨酸丙酰胺。以α-鹅膏毒肽分子的一个作用位点，设计合成了α-鹅膏毒肽的特异性识别决定区作为模板，利用表面印迹法，在二氧化硅载体上修饰制备了专一性吸附鹅膏毒肽的印迹材料。具体地，所述S1中功能单体为3-巯基丙酸；所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；所述溶剂为二甲基亚砜。具体地，所述S1中模板分子与功能单体的摩尔比例为0.15:1～0.25:1，所述功能单体与交联剂的摩尔比例为1:2。具体地，所述S1中模板分子、功能单体、交联剂的摩尔比例为0.2:1:2。具体地，所述S1中还包括辅助交联剂，所述辅助交联剂为季戊四醇四-3-巯基丙酸酯，，所述辅助交联剂与交联剂的摩尔比例为9:4。具体地，所述S2中的巯基化处理方法包括如下步骤：S2a：取载体，溶于水中，加甲醇超声使其分散；S2b：向S2a得到的反应液中加入甘油，再超声，超声后通入氮气；S2c：取(3-巯丙基)-三乙氧基硅烷与甲醇混合均匀，加入S2b得到的反应液中，搅拌使其混合均匀；S2d：向S2c得到的反应液中加入氨水，85℃氮气保护下反应1h后，停止氮气，再反应5h；S2e：反应结束后离心收集载体，用无水乙醇和去离子水分别洗涤，40℃下真空干燥即得。具体地，所述S3中的碱为三乙胺。具体地，步骤S4中所述洗脱液分为第一洗脱液和第二洗脱液，第一洗脱液为甲醇与乙酸的体积比为9:1的混合溶液，第二洗脱液为甲醇。具体地，所述S5中的真空干燥温度为40～50℃。本专利技术采用藉配体识别决定区印迹策略，利用抗原决定基(短肽片段)印迹，制备识别多肽和蛋白质的MIPs。利用硫醇-烯点击反应制备分子印迹聚合物，实验操作简便，无须通氮、除氧，且用三乙胺调节反应体系pH值即可引发反应，反应条件温和，时间短，此方法较传统制备分子印迹方法表现出极大的优越性。本专利技术解决MIPs识别生物大分子过程中的传质速率慢和吸附容量较低等问题，拟采用硅小球表面印迹法和沉淀聚合印迹法等，研制具有纳米结构的表面印迹微球和MIPs纳米粒子，制备性能优异的新型分离材料。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术旨在选择鹅膏毒肽的一个识别位点，设计合成鹅膏毒肽的特异性识别决定区作为模板，采用巯基化二氧化硅微球，并利用表面印迹的方法，通过巯基与双键之间的点击反应在二氧化硅表面合成了α-鹅膏毒肽-MIP分子印迹材料。为了更好地理解和实施，下面详细说明本专利技术。具体实施方式实施例1：模板分子的制备本专利技术的模板分子为N-乙酰色氨酸丙酰胺，其制备方法包括以下步骤：a、称取4.0g的N-乙酰色氨酸，量取100ml甲醇加入250ml的三颈烧瓶中在超声环境下溶解充分；b、在上述步骤的混合溶液中加入5.0ml的浓硫酸作为催化剂，于60℃的水浴环境下回流3个小时，使N-乙酰色氨酸和甲醇酯化充分；c、待装置完全冷却至室温后，利用1.0mol/L的K2CO3溶液调节混合液的pH为7，然后加入饱和NaCl溶液使之静置分层；d、30min后，用120ml的二氯甲烷分三次萃取该混合液；e、再把得到的二氯甲烷有机层分别用50ml 1.0mol/L K2CO3溶液和60ml的去离子水各洗一次；f、最后把分液后得到的有机溶液里的二氯甲烷在30℃旋转蒸干，得到白色固体；g、接着，再把所得的白色固体溶于50ml的丙胺和50ml的甲醇组成的混合液中，常温搅拌48h；h、然后在55℃下把未反应的丙胺旋转蒸干，得到橙黄色粗品；i、最后用三氯甲烷重结晶三次后，在40℃的烘箱中烘干，得到白色固体产物。实施例2：表面巯基化的二氧化硅的制备本专利技术的载体为表面巯基化的二氧化硅，其制备方法包括以下步骤：a、取4.0g二氧化硅微球，超声分散于5ml的去离子水中，加入120ml甲醇，超声分散30min；b、向本实施例步骤a处理得到反应液中加入120ml的甘油，再超声10min，将混合液转入500ml的三口烧瓶中，通20min氮气，得到混合溶液一；c、取4ml的(3-巯丙基)-三乙氧基硅烷与40ml甲醇混合均匀，并倒入混合溶液一中，开始搅拌反应，得到混合溶液二；d、在混合溶液二中加入10ml的氨水，于85℃、氮气保护下反应1h后，停止氮气保护后再反应5h；e、待反应完毕，离心收集巯基功能化的二氧化硅微球后，用无水乙醇和去离子水分别洗涤3次；将清洗后的二氧化硅微球置于40℃、真空环境下进行干燥；即完成二氧化硅微球表面巯基化。实施例3：α-鹅膏毒肽表面分子印迹材料(α-amanitin-MIP)的制备本专利技术的α-鹅膏毒肽表面分子印迹材料的制备方法如下：S1：将实施例1制得的模板分子与3-巯基丙酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、季戊四醇四-3-巯基丙酸酯加入到二甲基亚砜的溶液中搅拌均匀；模板分子、3-巯基丙酸与乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩尔比为0.2:1:2；所述辅助交联剂季戊四醇四-3-巯基丙酸酯与交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩尔比为9:4；S2：将实施例2处理得到的巯基化二氧化硅微球加入本实施例S1步骤制得的混合溶液中，用三乙胺调节反应液pH约为8，在40℃下聚合反应6小时；S3：将S2处理得到的二氧化硅微球从混合溶液中取出，依次用甲醇-乙酸(9:1，v/v)混合溶液和甲醇作洗脱剂进行冲洗；S4：将冲洗后的二氧化硅微球置于40℃的真空本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种α‑鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1：将模板分子与功能单体、交联剂、溶剂混匀；S2：将载体表面进行巯基化处理；S3：将S2处理得到的载体加入S1制得的混合溶液中，通过功能单体与模板分子交联聚合；S4：用洗脱液将模板分子从聚合后的载体表面洗脱，得到分子印迹材料；S5：将S4处理得到分子印迹材料真空干燥；其中，S3步骤中的聚合条件为：用碱将聚合反应液pH调至7～9，40℃～50℃下反应6～12h；所述模板分子为N‑乙酰色氨酸丙酰胺。

【技术特征摘要】
1.一种α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1：将模板分子与功能单体、交联剂、溶剂混匀；S2：将载体表面进行巯基化处理；S3：将S2处理得到的载体加入S1制得的混合溶液中，通过功能单体与模板分子交联聚合；S4：用洗脱液将模板分子从聚合后的载体表面洗脱，得到分子印迹材料；S5：将S4处理得到分子印迹材料真空干燥；其中，S3步骤中的聚合条件为：用碱将聚合反应液pH调至7～9，40℃～50℃下反应6～12h；所述模板分子为N-乙酰色氨酸丙酰胺。2.根据权利要求1所述的α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，其特征在于：所述S1中功能单体为3-巯基丙酸；所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；所述溶剂为二甲基亚砜。3.根据权利要求1所述的α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，其特征在于：所述S1中模板分子与功能单体的摩尔比例为0.15:1～0.25:1，所述功能单体与交联剂的摩尔比例为1:2。4.根据权利要求3所述的α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，其特征在于：所述S1中模板分子、功能单体、交联剂的摩尔比例为0.2:1:2。5.根据权利要求1所述的α-鹅膏毒肽分子印迹材料制备方法，其特征在于：所述S1中还包括辅助交联剂，所述辅助交联...

【专利技术属性】
技术研发人员：滕伟迪，梁勇，汤又文，袁嫣昊，谭杰安，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东;44