本文中记载了一种包括脑效应物实体、衔接物和一个结合血脑屏障受体的单价结合实体的血脑屏障穿梭模块，其中衔接物将效应物实体偶联至结合血脑屏障受体的单价结合实体，其中单价结合实体不包括抗转铁蛋白受体抗体8D3的可变结构域(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:02)或变体抗转铁蛋白受体抗体8D3v(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:03)的可变结构域。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及具有特异性结合血脑屏障受体(BBBR)的一种结合特异性并且就该结合特异性而言是单价的血脑屏障穿梭模块(shuttle module)；还涉及使用此构建体作为血脑屏障穿梭体和用于神经疾病治疗的方法。
技术介绍
神经疾病药物的脑透过，例如，具有低的脑穿透的大生物治疗药或小分子药，受到广泛的不能透过的血脑屏障(BBB)与神经血管单元(NUV)中的其他细胞组分的严格限制。已经测试了克服这种障碍的许多策略，并且其中之一是利用脑毛细血管内皮上表达的内源性受体(血脑屏障受体)介导的转胞吞途径。已经设计了重组蛋白，如单克隆抗体或肽，来对抗这些受体，使得生物治疗剂能够通过受体介导递送至脑。然而，最大化脑吸收、同时最小化脑内皮细胞(BEC)中的错分拣(miss-sorting)以及BEC中某些细胞器(尤其是导致生物治疗剂降解的细胞器)内的累积程度的策略，仍然未得以开发。单克隆抗体和其他生物治疗剂对于治疗中枢神经系统(CNS)中的病状具有巨大的治疗潜能。然而，它们进入脑的途径被BBB阻止。之前的研究已经说明，非常小百分比(大约0.1％)的注射在血流中的IgG能够穿透进入CNS区室中(Felgenhauer，Klin.Wschr.52(1974)1158-1164)。由于抗体在CNS内的低浓度，这当然会限制任何药理作用。因此，需要可以有效地将药物穿梭运送至脑中的神经疾病药物跨BBB递送系统。WO2014/033074报道了血脑屏障穿梭。Boado，R.J.等报道了小鼠8D3抗转铁蛋白抗体及其可变轻链结构域
(VL)变体(L596V和L598I)(Biotechnol.Bioeng.102(2009)1251-1258)。专利技术概述本专利技术的一个方面是包括脑效应物实体、衔接物和一个结合血脑屏障受体的单价结合实体的血脑屏障穿梭模块，其中衔接物将效应物实体与结合血脑屏障受体的单价结合实体偶联，其中单价结合实体不包括抗转铁蛋白受体抗体8D3(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:02)或变体抗转铁蛋白受体抗体8D3v(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:03)的可变结构域。抗转铁蛋白受体抗体8D3具有以下氨基酸序列的重链可变结构域：EVQLVESGGG LVQPGNSLTL SCVASGFTFS NYGMHWIRQA PKKGLEWIAMIYYDSSKMNY ADTVKGRFTI SRDNSKNTLY LEMNSLRSED TAMYYCAVPTSHYVVDVWGQ GVSVTVSS(SEQ ID NO:01).抗转铁蛋白受体抗体8D3具有以下氨基酸序列的轻链可变结构域：DIQMTQSPAS LSASLEEIVT ITCQASQDIG NWLAWYQQKP GKSPQLLIYGATSLADGVPS RFSGSRSGTQ FSLKISRVQV EDIGIYYCLQ AYNTPWTFGGGTKLELK(SEQ ID NO:02).变体抗转铁蛋白受体抗体8D3v具有与抗体8D3相同的重链可变结构域和具有以下氨基酸序列的带L104V和L106I突变的轻链可变结构域：DIQMTQSPAS LSASLEEIVT ITCQASQDIG NWLAWYQQKP GKSPQLLIYGATSLADGVPS RFSGSRSGTQ FSLKISRVQV EDIGIYYCLQ AYNTPWTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:03).在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，结合血脑屏障受体的单价结合实体是多肽。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，结合血脑屏障受体的单价结合实体包括选自血脑屏障受体配体、全长抗体、scFv、Fv、scFab和VHH的分子。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，血脑屏障受体选自转铁蛋白受体、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、低密度脂蛋白受体相关蛋白
8、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和肝素结合表皮生长因子样生长因子。在一个实施方案中，血脑屏障受体是转铁蛋白受体。在一个实施方案中，单价结合实体特异性地结合人转铁蛋白受体和猕猴转铁蛋白受体。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，结合血脑屏障受体的单价结合实体包括一个针对转铁蛋白受体的scFab，更特别地，特异性地结合包括在SEQ ID.NO:04、05或06的氨基酸序列内的转铁蛋白受体中的表位的scFab。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，结合血脑屏障受体的单价结合实体包括一个针对转铁蛋白受体的scFv，更特别地，识别包括在SEQ ID.NO:04、05或06的氨基酸序列内的转铁蛋白受体中的表位的scFv。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，脑效应物实体选自神经疾病药物、神经营养因子、生长因子、酶、细胞毒性剂、针对脑靶标的抗体、针对脑靶标的单克隆抗体、针对脑靶标的肽。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，脑靶标选自β-分泌酶1、Aβ(Abeta)、表皮生长因子、表皮生长因子受体2、tau、磷酸化tau、磷酸化tau(pS422)、载脂蛋白(apolipoprotein)E4、α突触核蛋白(synuclein)、α突触核蛋白的寡聚片段、CD20、亨廷顿蛋白(huntingtin)、朊病毒蛋白(prion protein)、富含亮氨酸重复的激酶2、帕金蛋白(parkin)、早老蛋白2(presenilin 2)、γ分泌酶、死亡受体6、淀粉样蛋白前体蛋白、p75神经营养蛋白(neurotrophin)受体和胱天蛋白酶(caspase)6。在血脑屏障穿梭模块的一个特定实施方案中，脑效应物实体是多肽。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，结合血脑屏障受体的单价结合实体是多肽，并且单价结合实体与脑效应物实体的C-末端直接或通过衔接物缀合。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，脑效应物实体包括针对脑靶标的全长抗体。在一个实施方案中，全长抗体是IgG。在血脑屏障穿梭模块的一个优选实施方案中，血脑屏障穿梭体包括作
为脑效应物实体的全长IgG抗体、衔接物和作为单价结合实体结合血脑屏障受体的一个scFab，其中scFab通过衔接物与IgG抗体的重链之一的Fc区的C-末端缀合。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的第一重链包括第一二聚化模块，且针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的第二重链包括第二二聚化模块，从而允许两条重链的异二聚化。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，根据杵进臼(knobs-into-holes)的策略，针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的第一重链的第一二聚化模块包括杵(knob)，且针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的第二重链的二聚化模块包括臼。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，衔接物是肽衔接物。在一个实施方案中，肽衔接物具有至少25个氨基酸长度的氨基酸序列。在一个实施方案中，肽衔接物具有30至50个氨基酸长度的氨基酸序列。在一个实施方案中，肽衔接物是(G4S)6G2(SEQ ID NO:07)或(G4S)4(SEQ ID NO:08)。以下三个实施方案针对血脑屏障穿梭模块，其中脑效应物实体是多肽，前提条件是，脑效应物实体不是全长抗体，特别不是全长IgG。在血脑屏障穿梭模块的一个实施方案中，结合血脑屏本文档来自技高网...
【技术保护点】
血脑屏障穿梭模块，其包含脑效应物实体、任选的衔接物、和确切地一个结合血脑屏障受体的(单价)结合实体，其中如果存在衔接物，衔接物将效应物实体偶联至结合血脑屏障受体的单价结合实体，其中结合血脑屏障受体的(单价)结合实体不包括抗转铁蛋白受体抗体8D3的可变结构域(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:02)或变体抗转铁蛋白受体抗体8D3v的可变结构域(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:03)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.06 CN PCT/CN2014/0701831.血脑屏障穿梭模块，其包含脑效应物实体、任选的衔接物、和确切地一个结合血脑屏障受体的(单价)结合实体，其中如果存在衔接物，衔接物将效应物实体偶联至结合血脑屏障受体的单价结合实体，其中结合血脑屏障受体的(单价)结合实体不包括抗转铁蛋白受体抗体8D3的可变结构域(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:02)或变体抗转铁蛋白受体抗体8D3v的可变结构域(SEQ ID NO:01和SEQ ID NO:03)。2.根据权利要求1的血脑屏障穿梭模块，其中结合血脑屏障受体的单价结合实体是多肽。3.根据权利要求1至2任一项的血脑屏障穿梭模块，其中结合血脑屏障受体的单价结合实体包括选自血脑屏障受体配体、全长抗体、scFv、Fv、scFab和VHH的分子。4.根据权利要求1至3任一项的血脑屏障穿梭模块，其中血脑屏障受体选自转铁蛋白受体、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、低密度脂蛋白受体相关蛋白8、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和肝素结合表皮生长因子样生长因子。5.根据权利要求1至4任一项的血脑屏障穿梭模块，其中单价结合实体特异性地结合人转铁蛋白受体和猕猴转铁蛋白受体。6.根据权利要求1至5任一项的血脑屏障穿梭模块，其中结合血脑屏障受体的单价结合实体包括一个针对转铁蛋白受体的scFab。7.根据权利要求1至5任一项的血脑屏障穿梭模块，其中结合血脑屏障受体的单价结合实体包括一个针对转铁蛋白受体的scFv。8.根据权利要求1至7任一项的血脑屏障穿梭模块，其中单价结合实体包括(i)(a)包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·鲁格尔，G·蒂芬塔勒，E·默斯纳，J·尼韦纳，A·胡根马特尔，邵翠英，F·罗斯，徐刚，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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