一种抗QKI-5单克隆抗体及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗QKI-5的单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC C2014228的杂交瘤细胞分泌。所述单克隆抗体特异性高，仅仅识别QKI-5，对QKI的另外两种异构体QKI-6和QKI-7完全不识别，效价高，方便实验，且易于分离纯化。所述单克隆抗体的成功构建为把QKI-5开发成为监测肿瘤发生发展重要诊断方式提供了极具意义的工具，也给科研人员在实验过程中排除非特异性识别干扰提供了便利的手段。

【技术实现步骤摘要】
一种抗QKI-5单克隆抗体及其制备与应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种抗QKI-5单克隆抗体及其制备与应用。
技术介绍
单克隆抗体(MonoclonalAntibody，McAb)即单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体。抗体主要由机体的B淋巴细胞合成，每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆。如果选出一个合成一种抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞所合成的抗体即为单克隆抗体。单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，并且来源容易。单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具，其在基因和蛋白质的结构和功能研究方面有着不可或缺的作用，成为解决生物学和医学等许多重大问题的重要手段，在人类和动物的免疫学诊断方面至今仍有着无可替代的重要作用。单克隆抗体技术的基本原理为：小鼠受到外界抗原刺激后可诱导免疫反应，产生相应的抗体，这一职能是由B淋巴细胞来承担。肿瘤细胞在体外培养条件下可以无限传代，是永久细胞。把小鼠的骨髓瘤细胞与经过免疫的小鼠脾细胞在聚乙二醇等介导下发生融合，融合后的杂交瘤细胞具有两种细胞的特性，一方面可以分泌特异性的抗体，一方面也具备了肿瘤细胞无限增殖的能力、可在体外培养条件下或移植到体内无限增殖，从而分泌大量单克隆抗体。免疫方法和筛选抗原是决定能否获得高亲和力、能识别天然抗原表位的单抗的重要因素。QKI蛋白是一种重要的RNA结合蛋白，对胚胎和出生后的个体发育至关重要。QKI蛋白有三种异构体，根据其mRNA的3’非翻译区(3’-UTR)的长度分别命名为QKI-5，QKI-6和QKI-7。这三种蛋白在细胞内的定位各不相同，其中QKI-5主要定位于细胞核内，QKI-6在细胞核和细胞质均有分布，而QKI-7则主要定位于细胞质。此外，这三种异构体的表达还具有组织、细胞的特异性。神经细胞中主要含有QKI-6和QKI-7，而表皮细胞中则主要是QKI-5。这三种异构体调控基因表达的分子机制并不相同。已有的报道发现癌组织中QKI的表达量往往低于癌旁组织，并且癌细胞往往是表皮细胞转化而来，故通过检测细胞、组织中的QKI-5的含量来预测、诊断癌症的发生发展，为癌症的早期诊断提供新的依据，并提供可能的治疗方案。另外，最新的研究结果显示，肺癌组织主要表达QKI-5，在肺癌早期病人中，QKI低表达的病例生存率显著降低，提示了QKI-5可以作为一个重要的预后标记物。因此，运用新的技术手段研究QKI-5在肿瘤诊疗方面的作用，具有深厚的潜力和深远的影响。但是，由于QKI的三种异构体在N端保守，仅仅是C端十几个氨基酸有所不同，目前常见的商业化QKI抗体很难特异性地识别其中一种异构体，而往往是对三种异构体均有反应。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种仅仅特异性识别QKI-5的单克隆抗体及其制备与应用，所述抗体特异性高，仅仅识别QKI-5，对另外两种异构体QKI-6和QKI-7完全不识别，效价高，方便实验，且易于分离纯化。所述单克隆抗体的成功构建为把QKI-5开发成为监测肿瘤发生发展重要诊断方式提供了极具意义的工具，也给科研人员在实验过程中排除非特异性识别干扰提供了便利的手段。本专利技术的第一方面提供了一种抗QKI-5的单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCCC2014228的杂交瘤细胞分泌。本专利技术的单克隆抗体具有较高的灵敏度和特异性，可识别QKI-5，对另外两种异构体QKI-6和QKI-7完全不识别，能够用于免疫印迹、免疫沉淀、免疫细胞化学、免疫荧光、免疫组织化学等免疫学检测，可应用于临床组织样本中QKI-5表达水平的检测。本专利技术的第二方面还提供分泌抗QKI-5的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其保藏号为CCTCCC2014228，被保藏于中国典型培养物保藏中心。本专利技术的杂交瘤细胞系具有较强的分泌本专利技术所述单克隆抗体的能力，能够稳定、大量分泌本专利技术的单克隆抗体。从杂交瘤细胞收集本专利技术的单克隆抗体时，可以从杂交瘤细胞体外培养上清液中获取抗体或者将杂交瘤细胞注入适宜的哺乳动物并从动物腹水中获取抗体。前一种方法适于获得高纯度的抗体，后一种方法适于大量获取抗体。通过上述方法获得的抗体，可以用常规方法纯化，例如盐析、凝胶过滤、亲和色谱层析等方法。本领域普通技术人员已知，可以直接采用QKI-5蛋白作为抗原，获得本专利技术的单克隆抗体。也可以将本专利技术QKI-5蛋白与已知标签形成重组蛋白作为抗原，获得对QKI-5有反应性，对标签没有反应性的本专利技术的单克隆抗体。因此，本专利技术第三方面还提供前述单克隆抗体的制备方法，该方法包括：所述方法包括：培养保藏号为CCTCCC2014228的杂交瘤细胞，从所述杂交瘤细胞上清液中或从注射所述杂交瘤细胞后的动物腹水中获取单克隆抗体。该方法仅是示例性的，例如可以用同样的方法免疫其它哺乳动物，大鼠、兔子、豚鼠或仓鼠等。本专利技术第四方面提供一种检测QKI-5的试剂盒，其含有本专利技术前述的的单克隆抗体。优选的，所述试剂盒还含有第二抗体、显示系统、或可被检测的荧光和/或放射标记，以及适宜的缓冲液。优选的，所述第二抗体为本专利技术所述的单克隆抗体或抗本专利技术所述单克隆抗体的抗体(例如本领域常用的羊抗鼠IgG)或按本领域已知技术制备的抗QKI的多抗。作为检测信号的荧光和/或放射标记可以是放射性同位素、荧光化合物、生物素和酶等。所述酶包括，但不限于，辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，优选辣根过氧化酶和/或碱性磷酸酶。本领域技术人员已知，针对不同的酶，可使用不同的底物。辣根过氧化酶作用的底物包括，但不限于，邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB)、二氨基联苯胺(DAB)等。碱性磷酸酶的底物一般采用对硝基苯磷酸酯(p-NPP)、碱性磷酸酶红(AP-Red)、碱性磷酸酶也有发荧光底物(磷酸4-甲基伞酮)。优选的，所述第二抗体上标记有生物素，并进一步含有结合辣根过氧化酶和/或碱性磷酸酶的链霉亲和素，显示底物为邻苯二胺和/或碱性磷酸酶红；或第二抗体上直接标有辣根过氧化物酶和/或碱性磷酸酶，显示底物为邻苯二胺和/或碱性磷酸酶红。本专利技术第五方面提供本专利技术的单克隆抗体在制备体外检测样品中QKI-5的试剂或试剂盒中的应用。所述检测方法包括可以使用本专利技术抗体的所有免疫方法，例如免疫印迹、免疫沉淀、免疫组化、免疫荧光等。所述检测为非疾病诊断目的的检测。本专利技术第六方面还提供一种QKI-5检测或诊断试剂，该检测或诊断试剂含有本专利技术前述的单克隆抗体。所述检测试剂的制备方法可以是本领域技术人员熟知的任何方法，例如将本专利技术的单克隆抗体与适当的载体混合，如水、盐水、缓冲剂等。本专利技术的检测试剂可应用于临床组织样本中QKI-5蛋白的检测。所述检测或诊断为非疾病诊断目的的检测或诊断。本专利技术的有益效果为：本专利技术的抗QKI-5的单克隆抗体特异性高，仅仅识别QKI-5，对另外两种异构体QKI-6和QKI-7完全不识别，效价高，方便实验，且易于分离纯化。所述单克隆抗体的成功构建为把QKI-5开发成为监测肿瘤发生发展重要诊断方式提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗QKI‑5单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC C2014228的杂交瘤细胞分泌。

【技术特征摘要】
1.一种抗QKI-5单克隆抗体在制备体外检测样品中QKI-5的试剂或试剂盒中的应用，所述单克隆抗体由保藏号为CCTCCC2014228的杂交瘤细胞分泌，所述QKI-5单克隆抗体仅仅识别QKI-5、且对另外两种异构体QKI-6和QKI-7完全不识别。2.分泌如权利要求1中所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其保藏号为CCTCCC2014228。3.根据权利要求1中所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：培养保藏号为CCTCCC2014228的杂交瘤细胞，从所述杂交瘤细胞上清液中或从注射所述杂交瘤细胞后的动物腹水中获取单克隆抗体。4.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：惠静毅，宗峰阳，李钠，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31