本发明专利技术公开了一种分离大黄素甲醚和大黄酚的方法，属于化工与制药领域。本发明专利技术将甜菜叶浓缩液与玉米颗粒发酵液混合后，冷冻干燥成粉，加入含大黄素甲醚和大黄酚的虎杖浓缩液中，混合后液氮冷冻，恢复常温，通过过柱，分别收集先后流出的液体，从而得到分离大黄素甲醚和大黄酚的方法。实例证明，本发明专利技术操作简便，在制备的过程中无需消耗大量的有机溶剂，不仅分离量大，成本低，而且产品中无有机溶剂残留，最终使得大黄素甲醚和大黄酚的收率提高至85％以上，纯度得到95％以上，可大规模推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术公开了一种分离大黄素甲醚和大黄酚的方法，属于化工与制药领域。
技术介绍
虎杖为蓼科蓼属植物。虎杖的干燥根茎，性寒、味苦，归肝、肺、胆经，有祛风利湿、祛痰止咳、清热解毒、活血化瘀的功效，中医临床用于治疗湿热黄疸、肺热咳嗽、疮痈肿毒、关节痹痛、经闭经痛、水火烫伤、跌打损伤等症。药理研究表明虎杖具有强心、保肝、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗炎等多种药理作用。化学成分研究表明其主要成分有白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄素甲醚等。其中大黄素甲醚是一种存在于多种中草药当中的有效成分，对人体宫颈癌海拉细胞有较强的抑制作用；大黄酚有腹泻和增加滋补肝肾的功能。
大黄酸和大黄素在医药领域应用广泛，它们具有不同的性质和不同的药理作用，但是，植物体内的大黄素甲醚多与大黄酚共同存在，由于这两个化合物结构相似、极性相近，因而分离工作较为困难。
目前传统用pH梯度萃取法及分步结晶法可将大黄酸、大黄素、芦荟大黄素达到很好的分离；而大黄素甲醚和大黄酚的混和物之间的分离，只能一般只用色谱法才能进行有效分离，但色谱法费时、收率低、成本高且工艺复杂。
另外也有人采用高速逆流色谱法以及大孔树脂分离纯化法，但是大孔树脂分离纯化法虽然工艺成熟，但操作繁琐，高速逆流色谱法中溶剂体系的选择较困难，分离规模难以扩大。此外，两种方法均需要消耗大量的有机溶剂（氯仿、苯）不仅有毒，有机溶剂回收成本高，回收再利用较困难，产品中有机试剂残留严重，而且回收率只有35％左右，纯度为60％左右，回收率和纯度均比较低。
因此，探寻一种高提取、高纯度，且操作简便、无污染的大黄素甲醚和大黄酚分离方法是非常有必要的。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题：针对目前传统方法在分离大黄素甲醚和大黄酚的过程中，大孔树脂分离纯化法虽工艺成熟，但操作繁琐，而高速逆流色谱法溶剂体系选择困难，另外两种方法均使用大量有机溶剂，不仅成本高、产品中有机试剂残留严重，而且回收率以及纯度均较低的现状，提供了一种将甜菜叶浓缩液与玉米颗粒发酵液混合后，冷冻干燥成粉，加入含大黄素甲醚和大黄酚的虎杖浓缩液中，混合后液氮冷冻，恢复常温，通过过柱，分别收集流出的液体，从而得到分离大黄素甲醚和大黄酚的方法。该方法操作简便，在制备的过程中无需消耗大量的有机溶剂，不仅分离量大，成本低，而且产品中无有机溶剂残留，最终使得大黄素甲醚和大黄酚的收率提高至85％以上，纯度得到95％以上，可大规模推广应用。
为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：
（1）称取800～1200g新鲜玉米颗粒，洗净后放入粉碎机中进行粉碎，过120目筛，将过筛后所得的玉米粉末倒入发酵罐中，并向其中加入清水，直至完全浸没玉米粉末为止，随后提升温度至38～55℃，密封发酵10～12天，待发酵结束，将发酵混合物移入离心机中，在1100～1200r/min转速下离心处理15～20min，去渣，留上清液，备用；
（2）称取500～800g新鲜的甜菜叶，经人工挑拣除杂后，放入清水中洗净，随后将洗后的甜菜叶放置阳光下暴晒，直至甜菜叶颜色呈枯黄色时，停止暴晒，置于组织粉碎机中，粉碎成碎块，放入容器中，并向容器中倒入1～1.5L质量浓度为80％乙醇溶液，混合均匀，放置在超声振荡仪中，在超声频率为25～35KHz，超声功率为100～200W下超声振荡反应1～2h，之后过滤去除滤渣，得到滤液，并将得到的滤液放入索式抽提器中，抽提45～55min，收集滤液抽提液，移入蒸馏装置，在60～65℃下加热30～35min，蒸馏去除乙醇，得甜菜叶提取物；
（3）将上述得到的甜菜叶提取物倒入真空冻干机中，并向其中加入上述步骤（1）备用的上清液，混合均匀后，抽真空至5～18kPa，同时启动制冷，在15～25min内将真空冷冻干燥机温度降低至-10～-5℃，保持时间30～35min，随后在1～2h内将混合物提升温度至0～2℃，移入气流粉碎机中，粉碎10～15min，过110～120目筛，得混合物粉末；
（4）称取1000～1200g虎杖药材，粉碎后向其中加入虎杖质量60～80％质量浓度为60％石油醚，混合均匀，放置在摇床上，振荡反应20～30min后，将混合物采用间歇微波提取法进行微波提取，设置微波功率为200～250W，微波提取时间为1～2h，提取次数为1～3次，待微波提取结束，将提取混合物取出，放入离心机中，离心后去渣，留液，并将所得液放入浓缩罐中，减压浓缩至原有体积1/3～1/2时，停止浓缩，得含大黄素甲醚和大黄酚的虎杖浓缩液；
（5）在上述得到的浓缩液中加入上述步骤（3）制得的混合物粉末，充分搅拌均匀，利用液氮对其进行冷冻，冷冻30～40min后，在40～50min内以5～10℃/min的速率提升温度至18～25℃，得混合浓缩液；
（6）将上述得到的混合浓缩液以1～3mL/min的流速通过C8色谱柱，所述的C8色谱柱尺寸规格为200mm×4.2mmI.D.，6μm，柱温为室温，其中流动相为甲基乙基醚，固定相为酚醛树脂颗粒，先收集流出的液体，得到大黄素甲醚，10～15min后再次收集流出的液体，从而得到大黄酚。
本专利技术的原理是：本专利技术通过玉米颗粒发酵液和甜菜叶浓缩液制成混合制成粉末物质后，加入含大黄素甲醚和大黄素的虎杖浓缩液中，使得大黄酚粘性系数变大，流动性差，之后通过C8色谱柱时，大黄素甲醚可以很快地流动下来，而大黄素由于流动缓慢，流下来速度低于大黄素甲醚，分别收集先后流出的液体，从而可以分别得到大黄素甲醚和大黄酚。
本专利技术的应用方法是：将本专利技术得到的大黄素甲醚和大黄酚通过制囊机，分别制成大黄素甲醚胶囊和大黄酚胶囊，其中大黄素甲醚胶囊中含有1～3g大黄素甲醚，大黄酚胶囊中含有2～5g大黄酚，人体宫颈癌患者可在每日早餐后食用1～3粒大黄素甲醚胶囊，肝肾不足者可在每日午餐后食用2～4粒大黄素胶囊，两种胶囊连续服用10～14天，可以使得人体宫颈癌患者癌症复发率降低65％以上，肝肾不足者滋补肝肾，精力充沛，具有极好的治疗效果。
本专利技术的有益效果是：
（1）本专利技术原料天然易得，操作简单易行，在制备的过程中无需消耗大量的有机溶剂，不仅成本低，而且产品中无有机溶剂残留，属于绿色环保工艺；
（2）本专利技术最终使得大黄素甲醚和大黄酚的收率提高至85％以上，纯度得到95％以上，可以大规模应用于化工与制药领域。
具体实施方式
首先称取800～1200g新鲜玉米颗粒，洗净后放入粉碎机中进行粉碎，过120目筛，将过筛后所得的玉米粉末倒入发酵罐中，并向其中加入清水，直至完全浸没玉米粉末为止，随后提升温度至38～55℃，密封发酵10～12天，待发酵结束，将发酵混合物移入离心机中，在1100～1200r/min转速下离心处理15～20min，去渣，留上清液，备用；然后称取500～800g新鲜的甜菜叶，经人工挑拣除杂后，放入清水中洗净，随后将洗后的甜菜叶放置阳光下暴晒，直至甜菜叶颜色呈枯黄色时，停止暴晒，置于组织粉碎机中，粉碎成碎块，放入容器中，并向容器中倒入1～1.5L质量浓度为80％乙醇溶液，混合均匀，放置在超声振荡仪中，在超声频率为25～35KHz，超声功率为100～200W下超声振荡反应1～2h，之后过滤去除本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离大黄素甲醚和大黄酚的方法，其特征在于具体操作步骤为：（1）称取800～1200g新鲜玉米颗粒，洗净后放入粉碎机中进行粉碎，过120目筛，将过筛后所得的玉米粉末倒入发酵罐中，并向其中加入清水，直至完全浸没玉米粉末为止，随后提升温度至38～55℃，密封发酵10～12天，待发酵结束，将发酵混合物移入离心机中，在1100～1200r/min转速下离心处理15～20min，去渣，留上清液，备用；（2）称取500～800g新鲜的甜菜叶，经人工挑拣除杂后，放入清水中洗净，随后将洗后的甜菜叶放置阳光下暴晒，直至甜菜叶颜色呈枯黄色时，停止暴晒，置于组织粉碎机中，粉碎成碎块，放入容器中，并向容器中倒入1～1.5L质量浓度为80％乙醇溶液，混合均匀，放置在超声振荡仪中，在超声频率为25～35KHz，超声功率为100～200W下超声振荡反应1～2h，之后过滤去除滤渣，得到滤液，并将得到的滤液放入索式抽提器中，抽提45～55min，收集滤液抽提液，移入蒸馏装置，在60～65℃下加热30～35min，蒸馏去除乙醇，得甜菜叶提取物；（3）将上述得到的甜菜叶提取物倒入真空冻干机中，并向其中加入上述步骤（1）备用的上清液，混合均匀后，抽真空至5～18kPa，同时启动制冷，在15～25min内将真空冷冻干燥机温度降低至‑10～‑5℃，保持时间30～35min，随后在1～2h内将混合物提升温度至0～2℃，移入气流粉碎机中，粉碎10～15min，过110～120目筛，得混合物粉末；（4）称取1000～1200g虎杖药材，粉碎后向其中加入虎杖质量60～80％质量浓度为60％石油醚，混合均匀，放置在摇床上，振荡反应20～30min后，将混合物采用间歇微波提取法进行微波提取，设置微波功率为200～250W，微波提取时间为1～2h，提取次数为1～3次，待微波提取结束，将提取混合物取出，放入离心机中，离心后去渣，留液，并将所得液放入浓缩罐中，减压浓缩至原有体积1/3～1/2时，停止浓缩，得含大黄素甲醚和大黄酚的虎杖浓缩液；（5）在上述得到的浓缩液中加入上述步骤（3）制得的混合物粉末，充分搅拌均匀，利用液氮对其进行冷冻，冷冻30～40min后，在40～50min内以5～10℃/min的速率提升温度至18～25℃，得混合浓缩液；（6）将上述得到的混合浓缩液以1～3mL/min的流速通过C8色谱柱，所述的C8色谱柱尺寸规格为200mm×4.2mm I.D.，6μm，柱温为室温，其中流动相为甲基乙基醚，固定相为酚醛树脂颗粒，先收集流出的液体，得到大黄素甲醚，10～15min后再次收集流出的液体，从而得到大黄酚。...
【技术特征摘要】
1.一种分离大黄素甲醚和大黄酚的方法，其特征在于具体操作步骤为：
（1）称取800～1200g新鲜玉米颗粒，洗净后放入粉碎机中进行粉碎，过120目筛，将过筛后所得的玉米粉末倒入发酵罐中，并向其中加入清水，直至完全浸没玉米粉末为止，随后提升温度至38～55℃，密封发酵10～12天，待发酵结束，将发酵混合物移入离心机中，在1100～1200r/min转速下离心处理15～20min，去渣，留上清液，备用；
（2）称取500～800g新鲜的甜菜叶，经人工挑拣除杂后，放入清水中洗净，随后将洗后的甜菜叶放置阳光下暴晒，直至甜菜叶颜色呈枯黄色时，停止暴晒，置于组织粉碎机中，粉碎成碎块，放入容器中，并向容器中倒入1～1.5L质量浓度为80％乙醇溶液，混合均匀，放置在超声振荡仪中，在超声频率为25～35KHz，超声功率为100～200W下超声振荡反应1～2h，之后过滤去除滤渣，得到滤液，并将得到的滤液放入索式抽提器中，抽提45～55min，收集滤液抽提液，移入蒸馏装置，在60～65℃下加热30～35min，蒸馏去除乙醇，得甜菜叶提取物；
（3）将上述得到的甜菜叶提取物倒入真空冻干机中，并向其中加入上述步骤（1）备用的上清液，混合均匀后，抽真空至5～18kPa，同时启动制冷，在15～25min内将真空冷冻干燥机温度降低至...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈兴权，张明，
申请(专利权)人：常州市阿曼特化工有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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