一种诱导外源基因在革兰氏阴性菌中表达的系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种诱导外源基因在革兰氏阴性菌中表达的系统及其应用。本发明专利技术提供了一种在革兰氏阴性菌中表达外源基因的方法，为为用含有阻遏蛋白表达盒和RNA聚合酶表达盒的调控元件调控外源基因表达盒在革兰氏阴性菌中表达；本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术提供革兰氏阴性菌中高效诱导表达系统由特定聚合酶和其对应的启动子两部分构成，在革兰氏阴性菌中诱导表达聚合酶、启动子和驱动的外源基因，可实现外源基因的高效大量表达，实现工业生产中具备简化提取步骤、提高蛋白表达量、降低生产成本的重要意义，具有广泛的应用前景，具有广阔的商业利用价值。

【技术实现步骤摘要】
201610171174

【技术保护点】
一种在革兰氏阴性菌中表达外源基因的方法，为用含有阻遏蛋白表达盒和RNA聚合酶表达盒的调控元件调控外源基因表达盒在革兰氏阴性菌中表达；所述RNA聚合酶表达盒中的RNA聚合酶与所述外源基因表达盒中的驱动外源基因表达的启动子相匹配；所述RNA聚合酶为K1F、VP4或MmP1；所述K1F相匹配的驱动外源基因表达的启动子为K1F‑P；所述VP4相匹配的驱动外源基因表达的启动子为VP4‑P；所述MmP1相匹配的驱动外源基因表达的启动子为MmP1‑P；所述K1F为如下a或b：a)序列表中序列8所示的蛋白质；b)将序列表中序列8所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列8衍生的蛋白质；所述VP4为如下c或d：c)序列表中序列9所示的蛋白质；d)将序列表中序列9所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列9衍生的蛋白质；所述MmP1为如下e或f：e)序列表中序列10所示的蛋白质；f)将序列表中序列10所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列10衍生的蛋白质；所述启动子K1F‑P为如下1)或2)：1)编码区为序列表中序列4所示的DNA分子；2)将序列4经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列4衍生的DNA分子；所述启动子VP4‑P为如下3)或4)：3)编码区为序列表中序列5所示的DNA分子；4)将序列5经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列5衍生的DNA分子；所述启动子MmP1‑P为如下5)或6)：5)编码区为序列表中序列6所示的DNA分子；6)将序列6经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列6衍生的DNA分子。...

【技术特征摘要】
1.一种在革兰氏阴性菌中表达外源基因的方法，为用含有阻遏蛋白表达盒和RNA聚合
酶表达盒的调控元件调控外源基因表达盒在革兰氏阴性菌中表达；
所述RNA聚合酶表达盒中的RNA聚合酶与所述外源基因表达盒中的驱动外源基因表达的
启动子相匹配；
所述RNA聚合酶为K1F、VP4或MmP1；
所述K1F相匹配的驱动外源基因表达的启动子为K1F-P；
所述VP4相匹配的驱动外源基因表达的启动子为VP4-P；
所述MmP1相匹配的驱动外源基因表达的启动子为MmP1-P；
所述K1F为如下a或b：
a)序列表中序列8所示的蛋白质；
b)将序列表中序列8所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和
/或添加且具有相同功能由序列8衍生的蛋白质；
所述VP4为如下c或d：
c)序列表中序列9所示的蛋白质；
d)将序列表中序列9所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和
/或添加且具有相同功能由序列9衍生的蛋白质；
所述MmP1为如下e或f：
e)序列表中序列10所示的蛋白质；
f)将序列表中序列10所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失
和/或添加且具有相同功能由序列10衍生的蛋白质；
所述启动子K1F-P为如下1)或2)：
1)编码区为序列表中序列4所示的DNA分子；
2)将序列4经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由
序列4衍生的DNA分子；
所述启动子VP4-P为如下3)或4)：
3)编码区为序列表中序列5所示的DNA分子；
4)将序列5经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由
序列5衍生的DNA分子；
所述启动子MmP1-P为如下5)或6)：
5)编码区为序列表中序列6所示的DNA分子；
6)将序列6经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由
序列6衍生的DNA分子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述革兰氏阴性菌为非大肠杆菌；所述

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国强，赵晗，张浩千，兰陆红，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11