赭曲霉毒素A的快速检测方法技术

本发明专利技术涉及一种赭曲霉毒素A的快速检测方法，该方法包括如下步骤：（A）使赭曲霉毒素A核酸适体（Apt）与单链信号探针DNA（ssDNA）杂交，形成杂交链；（B）使该杂交链与待测样品接触，当待测样品中有赭曲霉毒素A存在时，杂交链与赭曲霉毒素A反应释放出单链信号探针ssDNA；（C）利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶选择性地催化双链DNA水解成单核苷酸，而单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；（D）在ssDNA诱导下，铜离子还原生成近红外荧光铜纳米粒子；检测体系荧光强度，从而测定待测样品中的赭曲霉毒素A的含量。该方法具有高灵敏度，操作简单，低成本等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及纳米生物传感以及生物检测领域，具体地说，是提供一种赭曲霉毒素A的快速检测方法及检测试剂盒。
技术介绍
赭曲霉毒素包括7种结构类似的化合物，结构通式：R1=Cl或H；R2=H、CH3或C2H5。其中赭曲霉毒素A(R1=C1，R2=H）毒性最大，在霉变谷物、饲料等最常见。赭曲霉毒素A是曲霉和青霉等真菌产生的，广泛污染小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍类等粮食，也污染花生、蔬菜（豆类）。动物摄入了霉变的饲料后，这种毒素就可能出现在其肉中。人类就会直接或间接地攫入赭曲霉毒素。赭曲霉毒素主要损害肝脏与肾脏，也能引起肠黏膜炎症和坏死，并有致畸作用。因此对赭曲霉毒素A的检测是十分必要的。目前，对赭曲霉毒素A检测方法主要是色谱技术，包括薄层色谱(TLC)，气相色谱(GC)，高效液相色谱(HPLC)，液相色谱-质谱联用(LC-MS)等。近年来，发展了基于核酸适体的真菌毒素新的检测方法。如BiosensorsandBioelectronics57(2014)226-231公开了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种赭曲霉毒素A的快速检测方法，其特征是，该方法包括如下步骤：（A）使赭曲霉毒素A核酸适体（Apt）和可与赭曲霉毒素A核酸适体杂交的单链信号探针DNA（ssDNA）杂交，形成杂交链；（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有赭曲霉毒素A存在时，杂交链选择性地与赭曲霉毒素A反应释放出单链信号探针ssDNA；（C）为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，选择性地将双链DNA水解成单核苷酸，留下单链信号探针ssDNA；（D）利用赭曲霉毒素A核酸适体‑赭曲霉毒素A结合体不能诱导铜离子还原生成近红外荧光的铜纳米粒子，只有单链信号探针ssDNA能够诱导铜离子还原成近红...

【技术特征摘要】
1.一种赭曲霉毒素A的快速检测方法，其特征是，该方法包括如下步骤：
（A）使赭曲霉毒素A核酸适体（Apt）和可与赭曲霉毒素A核酸适体杂交的单链信号探针
DNA（ssDNA）杂交，形成杂交链；
（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有赭曲霉毒素A存在时，杂交链选择性
地与赭曲霉毒素A反应释放出单链信号探针ssDNA；
（C）为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，选择性
地将双链DNA水解成单核苷酸，留下单链信号探针ssDNA；
（D）利用赭曲霉毒素A核酸适体-赭曲霉毒素A结合体不能诱导铜离子还原生成近红外
荧光的铜纳米粒子，只有单链信号探针ssDNA能够诱导铜离子还原成近红外荧光铜纳米粒
子，检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的赭曲霉毒素A的含量。
2.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A的检测方法，其特征是，所述赭曲霉毒素A核酸适
体为5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAC-3’。
3.根据权利要求1或2所述的赭曲霉毒素A的检测方法，其特征是，所述的单链信号探针
ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTCCCATGCTCC-
3’。
4.一种赭曲霉毒素A的快速检测方法，还提供检测赭曲霉毒素A的试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾云龙，刘婷，黄昊文，徐合意，邓克勤，易守军，唐春然，
申请(专利权)人：湖南科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43