本发明专利技术公开了一种化合物2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氢-1H-咪唑在制备抗神经退化性疾病药物中的应用。实验证实：所述化合物在增强细胞自噬方面具有明显作用，并确定2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氢-1H-咪唑能有效诱导引发细胞自噬的浓度为5μM。预示该化合物有望成为选择性诱导细胞自噬以及有效治疗阿尔兹海默病的有潜力药物，具有广阔的科研和临床开发前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种西苯挫嘟化合物在制药中的应用，尤其设及一种2-(2，2-二苯基 环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫在制备抗神经退化性疾病药物中的应用。属于生物医学领域。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)，又称老年性痴呆,是一种中枢神经退 化性疾病。患有阿尔茨海默病的病人表现出渐进性记忆、认知功能下降，并伴有行为上W及 精神上的症状;其人格的改变W及语言障碍等神经精神症状会严重影响社交、职业与生活 功能。 自隧是一种特定的广泛存在于从果蛹、酵母到高等脊椎动物的真核细胞中的生命 现象，是长命蛋白和胞质细胞器降解的主要细胞代谢通路，W细胞质、液泡在溶酶体的退化 过程为主要特征。自隧作用主要包括了S种类型：微自隧（microautophagy)、巨自隧 (macroautophagy)和分子伴侣介导的自隧（chaperone-mediated autophagy)。其中，巨自 隧在神经退行性疾病病变中的作用尤为受到关注。 阿尔茨海默病中重要的神经病理学标志是淀粉样蛋白斑，神经纤维缠结W及神经 元的缺失。现阶段普遍认为，大脑中的定粉样蛋白（AP)的积聚导致了神经退行性病变，并最 终出现了慢性痴呆症状。 近年来，自隧越来越多的被关联到临床疾病中，尤其是干扰性疾病、癌症、神经退 化疾病和自我免疫类疾病。神经病理学证据显示，自隧途径与阿尔茨海默病是相禪连的。在 神经细胞内，通过化U蛋白过度憐酸化聚合形成了神经纤维缠结(NFTs),而细胞外，神经斑 主要由AP的聚集组成。运些都是阿尔茨海默病的主要神经病理学标记。另有证据显示，在可 W发射信号的核内体中包含神经生长因子(NGF)，在显微状态下可W看到巧光标记的LC3能 够逆向运输NGF，由此可知神经生长因子可能源于或与自隧体相关。在阿尔茨海默病中，细 胞自隧受到损伤，自隧体得W积累，核内质溶酶体途径出现异常。而自隧的药理学活化作用 可W促进AP的清除，进而减轻AD症状。所W自隧被认为是阿尔茨海默病的一种潜在的治疗 方法。 西苯挫嘟化合物是一类重要的咪挫类化合物，既可抑制化+通道，减少化+内流，亦 可抑制Ca 2+通道，减少Ca2+内流，减弱屯、肌收缩力。W往人们对它的研究主要集中抗屯、律失 常作用等多种生物效应。而其在影响细胞自隧和神经疾病方面的研究和应用，经权威机构 (Web of knowledge、Elsevier ScienceDirect等）检索查新，目前国内外未见报道。鉴于 此，研究和开发西苯挫嘟化合物的新用途特别是在制备抗神经退化性疾病药物中的应用具 有重要的意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足和目前临床对神经性变性病的治疗需求，本专利技术要解决的问 题是提供一种2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫在制备抗神经退化性疾病药物中 的应用。[000引本专利技术所述2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫在制备抗神经退化性疾病 药物中的应用。其中：2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫的化学结构如通式（I)所示，所 述神经退化性疾病优选是阿尔兹海默病。 本专利技术运用野生型神经胶质细胞U87MG细胞及LC3被绿色巧光蛋白（GFP)转染的神 经胶质细胞U87MG细胞(简称LC3-GFP-U87细胞），对咪挫类衍生物进行了在影响细胞自隧和 神经疾病方面的研究，证实:所述化合物2-( 2，2-二苯基环丙基)-4，5-二氨-IH-咪挫在增强 细胞自隧方面具有明显作用，并确定2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫能有效诱 导引发细胞自隧的浓度为如M。 为了更好的理解本专利技术的实质及本专利技术所述化合物的作用，下面结合2-(2,2-二 苯基环丙基)-4，5-二氨-IH-咪挫的药理实验及结果，来进一步阐述其在增强细胞自隧中的 作用。 神经胶质瘤细胞的制备：W常规方法培养野生型神经胶质细胞U87MG细胞及LC3被 绿色巧光蛋白（GFP)转染的神经胶质细胞U87MG细胞(简称LC3-GFP-U87细胞），收集生长状 态良好的且处于对数期的细胞，备用。 采用细胞生物学和分子生物学方法进行如下实验，W观察2-(2,2-二苯基环丙 基)-4,5-二氨-IH-咪挫对LC3-GFP-U87细胞和野生型神经胶质细胞U87MG自隧的影响。[001引1).绿色巧光蛋白-自隧过程特征蛋白GFP-LC3方法检测细胞内自隧小体情况，W 判断化合物对细胞自隧的影响 将处于对数生长期的LC3-GFP-U87细胞接种于96孔板中，经扣M的2-(2，2-二苯基 环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫作用2地后，用巧光倒置显微镜观察LC3蛋白的变化，结果发现 实验组较对照组出现大量巧光斑点，说明细胞产生自隧小体，LC3聚集在自隧小体内，形成 巧光斑点，证明了自隧的发生(见图1)。 2).蛋白质印迹法(Western Blot)分析浓度分别为化M，5iiM和IOiiM的2-(2,2-二苯 基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫作用于U87MG细胞24小时(雷帕霉素作为阳性对照）后的蛋白 表达量根据蛋白水平的表达量变化，发现化合物浓度为扣M和IOiiM时，皆显著上调了LC3 n的表达量，证实了自隧的发生，并确定2-(2，2-二苯基环丙基)-4，5-二氨-IH-咪挫能有效 诱导引发细胞自隧的浓度为如M(见图2)。 上述实验数据W平均值±标准误差表示，经t检验，P<0.05，表示有明显性差异。 通过上述经统计学处理的实验数据及其结果，可W得到W下结论： 本专利技术所述的化合物2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫能显著引起细胞 自隧，实验结果证实2-( 2，2-二苯基环丙基)-4，5-二氨-IH-咪挫有望在制备抗神经退化性 疾病药物中具有应用。预示2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫有望成为选择性诱 导细胞自隧W及有效治疗阿尔兹海默病的有潜力药物，具有广阔的科研和临床开发前景。【附图说明】 图1:LC3-GFP-U87细胞经扣M的2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫化合物 处理2地，显示LC3-GFP-U87细胞发生显著自隧的照片。 其中：A图为溶剂处理的对照组，B图为化M的2-(2,2-二苯基环丙基）-4,5-二氨-IH-咪挫化合物溶液处理的实验组。 图2: U87MG细胞经IiiM，5測和IOiiM的2-( 2，2-二苯基环丙基）-4，5-二氨-IH-咪挫化 合物分别处理2地，检测显示化合物浓度为扣M和IOiiM时，U87MG细胞中LC3 n的表达上调，细 胞发生自隧。（蛋白质印迹法）。【具体实施方式】 本专利技术所述的2-(2,2-二苯基环丙基)-4,5-二氨-IH-咪挫购于Sigma Al化ich。所 述U87MG细胞和LC3-GFP-U87细胞当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
2‑(2,2‑二苯基环丙基)‑4,5‑二氢‑1H‑咪唑在制备抗神经退化性疾病药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：闫兵，王一琳，穆岩，张秋，江翠娟，翟淑梅，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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