本发明专利技术涉及一种甲萘威药物残留快速检测的胶体金试纸条的制备及使用方法。该方法在试纸的背衬上依次粘贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和样品吸收垫。硝酸纤维素膜上面包被有抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG1条作为参照线。该快速检测试纸条特异性强，能够半定量检测，环境温度为4-40℃都可以使用，适合于食品卫生质检部门、海关等蔬菜源食品进行甲萘威残留的快速检测。本发明专利技术具有特异性强、灵敏性高、能够实现半定量检测，且操作简单方便等有益效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及食品中甲萘威药物残留的一种快速胶体金试纸条的制备及使用方法。
技术介绍
甲萘威又名西维因，一种氨基甲酸酯杀虫剂。工业产品为白色固体，纯品熔点142°C，在水中溶解度极小，在多数有机溶剂中溶解度不大，易溶于极性有机溶剂，化学性质稳定，但遇碱易分解。毒性较低，急性毒性LD50值:对大白鼠经口为500?850mg/kg。用于稻、棉、果林茶桑等作物上的螟虫、稻纵卷叶螟、稻苞虫、棉铃虫、红铃虫、斜纹夜蛾、棉卷叶虫、桃小食心虫、苹果刺蛾、茶小绿叶蝉、茶毛虫、桑尺蠖、大豆食心虫等。甲萘威的检测方法有薄层色谱法，气-质联机和高效液相色谱法，由于以上诸分析法样品前处理比较复杂，操作时需专门的技术人员、检测费用昂贵，不利于推广应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，且操作简单方便，对样品经过简单处理即可检测的甲萘威快速试纸半定量检测方法。本专利技术的目的可通过以下技术方案来实现 甲萘威胶体金试纸条检测方法其技术要点是:试纸的背衬上依次贴有样品垫和金标垫和硝酸纤维素膜和吸水吸水纸，金标垫上被标记的物质为第二种属动物蛋白与甲萘威抗原的混合物或第二种属动物蛋白与甲萘威抗体的混合物；硝酸纤维素膜上包被有甲萘威抗体1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参考线或包被有甲萘威抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的工IgGl条作为参考线。在试纸制备时通过调节检测线和参考线包被物的浓度，控制检测时检测线和参考线的显色深浅，并将其显色深浅与标准物质浓度对应起来，达到半定量检测。所述的检测用抗原是指甲萘威与载体物质明胶形成的偶合物，免疫用抗原是指甲萘威与载体物质匙孔血蓝蛋白(KLH)形成的偶合物。所述的载体物质也可以选用其他大分子物质，如:脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋白等，但要求检测用抗原与免疫用抗原的载体无交叉免疫反应。所述的第二种属动物蛋白指非抗体来源属动物的蛋白，例如，抗体为兔源性，则第二种属动物蛋白可以是卵清白蛋白、猪血清白蛋白等鸡、鸭或其他非兔源性动物蛋白。本专利技术所描述的试纸的各部分处理与功能如下: 背衬:为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用； 样品垫制备:将滤纸或玻璃纤维纸浸入pH 7.0- 8.4的PBS中约莫2 min，取出，80°C烘干或其他方式干燥，即作为样品垫，检测时起吸收样品溶液的作用，便于样品溶液向上移动； 金标垫的制备:该部分起固定胶体金标记的抗原或抗体的作用； 制备步骤包括胶体金溶液的制备、胶体金标记甲萘威抗原或甲萘威抗体。(1)胶体金溶液的制备:将氯金酸(HAuC14)用超纯水配制成1%的母液，取1 mL的母液，用超纯水定容至100 mL,配成0.01%的溶液，加热至沸腾，加入1 - 5 mL 1%的朽1檬酸三钠水溶液，继续加热至出现透明的橙红色为止，即为胶体金溶液。(2)胶体金标记甲萘威抗原:将甲萘威抗原和第二种属动物蛋白分别用PBS (0.01mol/L,pH 7.0-7.5)溶解稀释至2-4 mg/mL,每100 mL胶体金溶液加入1-3 mL的2-4 mg/mL的检测用抗原1-1.5 mL 2-4 mg/mL第二种属动物蛋白震荡2 min,用0.2 mol/L的K2C03,调节 pH 至 8.4，震荡 5 min 加入 11% PEG-10000 2 mL，震荡 5 min，6000-13000r/min 离心15 min，除去上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol/L,pH 7.0_7.5)复溶，以 8000-15000 r/min 离心15 min,除去上清，将沉淀用PBS (0.01 mol/L,pH 7.0-7.5)释500-2000倍产物作为金标记甲萘威抗原。(3)胶体金标记甲萘威抗体:将甲萘威单克隆抗体或多克隆抗体和第二种属蛋白分别用PBS (0.01 mol/L,pH 7.0-7.5)溶解稀释至2-4 mg/mL，每100 mL胶体金溶液加入l-3mL 2-4 mg/mL的甲萘威抗体和1-1.5 mL 2-4 mg/mL第二种属动物蛋白，震荡2 min，用0.2 mol/L 的 K2C03，调节 pH 至 8.4，震荡 5 min，加入 11% PEG-10000 2 mL，震荡 5 min,6000-13000r/min 离心 15 min,除去上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol/L, pH 7.0-7.5)复溶，以 8000-15000r/min 离心 15 min,除去上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol/L, pH 7.0-7.5)稀释500-2000倍，产物作为金标甲萘威抗体。(4)金标垫处理:将甲萘威抗原或甲萘威抗体倒入一槽中，将玻璃纤维或滤纸浸入1 min,取出，室温干燥后，即作金标垫。硝酸纤维素膜制备:用0.8%的戊二醛溶液或0.2%的碳二亚胺溶液浸泡硝酸纤维膜或醋酸纤维膜或尼龙膜30 min，取出，37°C烘干，上边包被1条不同浓度的甲萘威抗原线或甲萘威抗体线作为检测线，同时包被1条抗第二种属动物蛋白的工IgG线作为参考线。当胶体金标记部分标记对象为甲萘威检测用抗原和第二种属蛋白时，检测线则包被甲萘威抗体。此即为硝酸纤维素膜，该部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。吸水纸制备:将玻璃纤维纸或滤纸或吸水纸室温干燥后，即作为吸水部分。该部分主要作用在于将移动上来的多余的样品溶液吸收。试纸组装:在背衬上依次粘贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和样品吸收垫，即成甲萘威检测试纸。检测原理:检测原理因胶体金标记的对象不同，而稍有差异。当胶体金标记部分标记对象为甲萘威检测用抗原和第二种属动物蛋白时，如果样品中含有甲萘威，样品当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
甲萘威胶体金试纸条，其特征在于：在试纸的背衬上依次贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，金标垫部分被标记的物质为第二种属动物蛋白和甲萘威抗体的混合物；硝酸纤维素膜部分包被有检测用甲萘威抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参照线。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：洪霞，江振飞，薛永来，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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