本发明专利技术属生物检测领域，涉及一种地克珠利胶体金试纸条的制备及使用方法，其特征在于：包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向参考线和检测线，所述检测线包被有地克珠利-牛血清白蛋白偶联物，参考线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗地克珠利单克隆抗体，所述抗地克珠利单克隆抗体由杂交瘤细胞株产生。该试纸条用于检测地克珠利，具有检测快速、操作简单、灵敏度高的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及食品中残留物质的检测方法，特别是一种。
技术介绍
地克珠利地克珠利属三嗪苯乙腈化合物，为新型、高效、低毒抗球虫药，广泛用于鸡球虫病。对球虫主要作用峰期，随球虫的不同种属而异，如对柔嫩艾美耳球虫主要作用点在第2代裂殖体球虫的有性周期。但对巨型、布氏艾美耳球虫裂殖体无效。对巨型艾美耳球虫作用点在球虫的合子阶段；对布氏艾美耳球虫小配子体阶段有高效。地克球利对形成孢子化卵囊也有抑制作用。在食品和饲料中，地克珠利的检测方法有薄层色谱法，气象色谱法，气-质联机和高效液相色谱法，由于以上诸分析法样品前处理比较复杂，操作时需专门的技术人员、检测费用昂贵，不利于推广应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，且操作简单方便，对样品经过简单处理即可检测的地克珠利快速试纸半定量检测方法。本专利技术的目的可通过以下技术方案来实现: 地克珠利胶体金试纸条检测方法其技术要点是:试纸的背衬上依次贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，金标垫上标记的物质为第二种属动物蛋白与地克珠利检测用抗原的混合物或第二种属动物蛋白与地克珠利抗体的混合物；硝酸纤维素膜上包被有地克珠利抗体1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参考线或包被有地克珠利检测用抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的工IgG 1条作为参考线。在试纸制备时通过调节检测线和参考线包被物的浓度，控制检测时检测线和参考线的显色深浅，并将其显色深浅与标准物质浓度对应起来，达到半定量检测。所述的检测用抗原是指地克珠利与载体物质明胶形成的偶合物，免疫用抗原是指地克珠利与载体物质匙孔血蓝蛋白(KLH)形成的偶合物。所述的载体物质也可以选用其他大分子物质，如:脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋白等，但要求检测用抗原与免疫用抗原的载体无交叉免疫反应。所述的第二种属动物蛋白指非抗体来源属动物的蛋白，例如，抗体为兔源性，则第二种属动物蛋白可以是卵清白蛋白、猪血清白蛋白等鸡、鸭或其他非兔源性动物蛋白。本专利技术所描述的试纸的各部分处理与功能如下: 背衬:为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。样品垫制备:将滤纸或玻璃纤维纸浸入pH 7.0- 8.4的PBS中约莫2 min，取出，80°C烘干或其他方式干燥，即作为样品垫，检测时起吸收样品溶液的作用，便于样品溶液向上移动。胶体金标记部分的制备:该部分起固定胶体金标记的抗原或抗体的作用。制备步骤包括胶体金溶液的制备、胶体金标记地克珠利抗原或地克珠利抗体。胶体金标记部分处理。⑴胶体金溶液的制备:将氯金酸(HAuC14)用超纯水配制成1%的母液，取1 mL的母液，用超纯水定容至100 mL,配成0.01%的溶液，加热至沸腾，加入1 - 5 mL 1%的朽1檬酸三钠水溶液，继续加热至出现透明的橙红色为止，即为胶体金溶液。⑵胶体金标记地克珠利抗原:将地克珠利检测用抗原和第二种属动物蛋白分别用PBS (0.01mol/L, pH 7.0_7.5)溶解稀释至2_4 mg/mL，每100 mL胶体金溶液加入1-3mL 2-4 mg/mL的检测用抗原和1-1.5 mL 2-4 mg/mL第二种属动物蛋白震荡2 min,用0.2mol/L 的 K2C03:，调节 pH 至 8.4，震荡 5 min 加入 11% PEG-10000 2 mL，震荡 5 min,8000-15000r/min 离心 15 min，除去上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol/L，pH 7.0_7.5)复溶，以 6000-13000r/min 离心 15 min,除去上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol/L, pH 7.0-7.5)稀释500-2000倍产物作为金标记地克珠利抗原。⑶胶体金标记地克珠利抗体:将地克珠利单克隆抗体或多克隆抗体和第二种属蛋白分别用PBS (0.01 mol/L, pH 7.0-7.5)溶解稀释至2-4 mg/mL，每100 mL胶体金溶液加入1-3 mL 2-4 mg/mL的地克珠利抗体和1-1.5 mL 2-4 mg/mL第二种属动物蛋白，震荡2min，用 0.2 mol/L 的 K2C03，调节 pH 至 8.4，震荡 5 min，加 11% PEG-10000 2 mL，震荡 5min, 8000-15000r/min 离心 15 min,除上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol /L, pH 7.0-7.5)复溶，6000-13000 r/min 离心 15 min，除去上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol/L,pH 7.0_7.5)稀释500-2000倍，产物作为金标地克珠利抗体。⑷金标垫处理:将地克珠利抗原或地克珠利抗体倒入一槽中，将玻璃纤维或滤纸浸入1 min，取出，室温干燥后，即作为金标垫。硝酸纤维素膜分制备:用0.8%的戊二醛溶液或0.2%的碳二亚胺溶液浸泡硝酸纤维膜或醋酸纤维膜或尼龙膜30 min，取出，37°C烘干，上边包被1条不同浓度的地克珠利检测用抗原线或地克珠利抗体线作为检测线，同时包被1条抗第二种属动物蛋白的工IgG线作为参考线。当胶体金标记部分标记对象为地克珠利检测用抗原和第二种属蛋白时，检测线则包被地克珠利抗体。此即为检测反应部分，该部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。吸水纸制备:将玻璃纤维纸或当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
地克珠利胶体金试纸条，其特征在于：在试纸的背衬上依次贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，金标垫上标记的物质为第二种属动物蛋白和地克珠利抗体的混合物；硝酸纤维素膜包被有检测用地克珠利抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参照线。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：洪霞，江振飞，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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