本发明专利技术公开了一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141及其应用，属于肿瘤生物治疗领域。本发明专利技术公开了一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。MiR-141具有在ER阳性乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中低表达、在ER阳性乳腺癌他莫昔芬敏感细胞中高表达的特性，是一种新的乳腺癌他莫昔芬耐药标志物。因此，本发明专利技术为设计抗乳腺癌他莫昔芬耐药药物提供了新的靶点，并以此为依据，用以设计和开发直接针对乳腺癌他莫昔芬耐药的新药。本发明专利技术公开的MiR-141具有促进乳腺癌细胞耐药的生物学功能及作用机制，为有效逆转乳腺癌他莫昔芬耐药及提高乳腺癌的临床化疗效果提供有效途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤生物治疗领域，涉及一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子 MiR-141及其应用。
技术介绍
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其高发病率严重威胁着女性的身体健康。 目前，以他莫昔芬为基础的内分泌疗法对雌性激素受体(ER)阳性乳腺癌患者的疗效具有重 要意义。 他莫昔芬是目前ER阳性乳腺癌治疗的临床一线用药，该药为雌二醇竞争性拮抗 剂，通过与雌二醇竞争性结合雌激素受体，减弱雌激素受体介导的肿瘤增殖转移相关的信 号转导，从而达到治疗肿瘤的作用。但在肯定治疗效果的同时，不得不承认肿瘤细胞产生耐 药现象是ER阳性乳腺癌转移和复发的重要原因，他莫昔芬出现的耐药现象是限制其临床疗 效的主要原因。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141及其 应用。 本专利技术是通过以下技术方案来实现： 本专利技术公开了一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141，MiR-141的核 苷酸序列如SEQ.ID.N0.1所示。 本专利技术还公开了上述的microRNA分子MiR-141作为乳腺癌他莫昔芬耐药标志物的 应用。 所述的microRNA分子MiR-141在雌性激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中低 表达。 所述的microRNA分子MiR-141在雌性激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬敏感细胞中高 表达。本专利技术还公开了上述的microRNA分子MiR-141在制备针对乳腺癌他莫昔芬耐药的 药物中的应用。 本专利技术还公开了上述的microRNA分子MiR-141作为设计抗乳腺癌他莫昔芬耐药的 药物靶点的应用。 与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术公开了一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子，为MiR-141，其核苷酸 序列如SEQ.ID.N0.1所示。MiR-141具有在ER阳性乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中低表达、在ER 阳性乳腺癌他莫昔芬敏感细胞中高表达的特性，是一种新的乳腺癌他莫昔芬耐药标志物。 因此，本专利技术为设计抗乳腺癌他莫昔芬耐药药物提供了新的靶点，并以此为依据，用以设计 和开发直接针对乳腺癌他莫昔芬耐药的新药。本专利技术公开的MiR-141具有促进乳腺癌细胞 耐药的生物学功能及作用机制，为有效逆转乳腺癌他莫昔芬耐药及提高乳腺癌的临床化疗 效果提供有效途径。【附图说明】 图1为构建MCF-7他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7/TR)，通过细胞增殖-毒性实验检测 MCF-7/TR对他莫昔芬的耐药能力。 图2为Real-time PCR检测MCF-7/TR及MCF-7亲本细胞中MiR-141的表达水平。 图3为细胞增殖-毒性实验检测转染MiR-141后构建的MCF-7/TR细胞对他莫昔芬的 耐药能力。 图4为细胞增殖-毒性实验检测转染MiR-141antagomiR后乳腺癌MCF-7亲本细胞对 他莫昔芬的耐药能力。【具体实施方式】 下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而 不是限定。 他莫昔芬在乳腺癌的治疗过程中发挥着重要作用，但出现的耐药现象是限制其临 床疗效的主要原因。明确新的microRNA在乳腺癌细胞他莫昔芬耐药中的生物学功能和机制 为有效提尚乳腺癌的临床疗效提供新的生物革E标选择。 本专利技术公开了一种肿瘤耐药microRNA分子，为MiR-141，其核苷酸序列为 UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG 〇 本专利技术还公开了 MiR-141作为设计抗乳腺癌他莫昔芬耐药药物靶点的用途，以及 MiR-141在乳腺癌他莫昔芬耐药性的临床诊断中的应用，以及根据这一靶点设计出的药物。 1、构建MCF-7他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7/TR)采用高浓度短时间他莫昔芬冲击法诱导MCF-7/TR耐药细胞株。取对数生长期的 MCF-7细胞约ΠΓ7个，接种于直径为10cm的培养皿中，待细胞生长稳定后加入终浓度为10μ mol/L的他莫昔芬，2~3天换液1次，每次换液后加入等浓度的他莫昔芬。经过2月的培养后， 通过有限稀释法获得单克隆的乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐药细胞，并在7d无药物干预下扩增 细胞。为了维持MCF-7/TR耐药细胞株的耐药性，细胞长期在终浓度为2ymol/L的他莫昔芬的 培养液中培养。 2、检测MCF-7亲本细胞及MCF-7/TR细胞中miR-141的表达量 1)引物设计 hsa_miR_141_Primer Forward Primer(20yM)： TAACACTGTCTGGTAAAGATGG 〇 2)细胞总RNA提取 A.整个RNA提取过程需要带口罩和手套，并且在冰上操作，防止RNA降解。 B.将细胞用预冷的ros洗涤两次，每组样品加入lmL提前预冷的Trizol，用加样枪 反复吹打。 C.在冰上放置5min，保证细胞充分的裂解。 D.将上步处理的样品转入DEPC水处理过的1.5mL EP管中，加入200yL氯仿，上下颠 倒充分混勾摇勾，静置5min使其分层。4°C12000rpm离心15min，离心后吸取约500yL上层液 体至新的1.5mL DEPC水处理过的EP管中。 E.加入与D步等体积的异丙醇，上下颠倒充分混匀。 F.室温静置lOmin后，4°C12000rpm离心15min，弃上清。加入lmL乙醇，可见有白色 沉淀析出。将洗涤后的乙醇洗干净，后倒置在滤纸上，静止一段时间，用20yL DEPC水溶解。 G.定量提取的RNA:取2yL RNA溶解于98yL TE buffer中，用紫外分光光度计测定 其A260和A280值，分析RNA的纯度。 3)细胞总mRNA反转录 取提取好的5yg总RNA，用TaKaRa公司的PrimeScript RT逆转录试剂盒进行反转录 实验，反应体系如表1所示： 表1 反应条件为：37°C，15min; 85°C，当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR‑141，其特征在于，MiR‑141的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张健，张媛，李梦阳，陈苏宁，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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