河蚌三倍体纯系高效育成方法技术

本发明专利技术公开了一种河蚌三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：他莫昔芬喂养料的配备、对母蚌进行投喂他莫昔芬喂养料、热休克处理、雌激素抑制剂溶液配制、雌激素抑制剂溶液泡浴、获得河蚌的雄性四倍体纯系、采用回交的方式，获得三倍体。通过此方法，可获得100%的河蚌三倍体纯系，提高了三倍体的育成率与出苗率，减少了育种与选种的麻烦，更主要是对自然水产品种种质和生态环境无污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及河蚌的多倍体繁育方法，具体涉及河蚌的三倍体纯系高效育成方法。
技术介绍
河蚌，又名河歪、河蛤蜊、鸟贝、西施舌等，属于软体动物门瓣鳃纲蚌科，是一种以滤食藻类为生的贝壳类水生动物。常见的有角背无齿蚌、褶纹冠蚌、三角帆蚌、丽蚌等数十种，我国大部分地区的河湖水泊中有出产。河蚌肉质特别脆嫩可口，是筵席之佳肴，更是人工育珠的好材料。河蚌的繁殖，雌蚌成熟的卵经生殖孔排至身体外套腔中；雄蚌成熟的精子由输精管经生殖孔排至鳃上腔，再经出水管排到体外水体中。精子随水进入雌蚌外套腔中与待孕的卵结合，完成受精，受精卵就在母蚌的左右两侧外鳃瓣上进行胚胎发育，以下称为“怀卵”母蚌。三倍体河蚌的不育特征，使其在生长速度、抗逆性、抗病性以及肉质等方面表现出更为显著的优势。现有技术中，到目前为止，还未见用此中方法生产三倍体河蚌的方法，更未见用全雄四倍体与二倍体母本回交的先例。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种方法稳定、种群纯度高达100%的河蚌三倍体纯系高效育成方法。为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：河蚌三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到河蚌人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10～20g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母蚌产卵前5～10天，按常规饲料投喂方法对母蚌进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母蚌投喂5～10g，下午6：00每100g母蚌投喂8～10g；至其卵发育成熟，然后，取公蚌在吊养在一起，使其自然产卵受精，得受精“怀卵”母蚌；（3）热休克处理：观察“怀卵”母蚌受精卵的发育情况，在受精卵第一次卵裂前2～3min，把上述“怀卵”母蚌放入溶氧达5～8mg/l（通过人工充氧）、温度为39～42℃恒温水中，热休克3～5min，待用；（4）雌激素抑制剂溶液配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为120～240mg/l，睾酮的浓度为10～50mg/l；（5）取步骤（3）处理后的“怀卵”母蚌，放入用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温泡浴90～150S，“怀卵”母蚌与溶液重量比为1：2，通过充氧，使溶液中的氧气含量达5～10mg/l；（6）取步骤（5）处理后的“怀卵”母蚌，放入育苗池中进行常规培育；直至产出钩介幼虫，寄生到鱼体，再脱落，形成仔蚌，从而获得河蚌的雄性四倍体纯系；（7）三倍体河蚌的获得：取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。本专利技术的优点：1、本专利技术中在母本中注射他莫昔芬，起到抑制DNA复制和促雄性的双重作用的同时，推延了受精卵第一次卵裂的时间（3-5min）和提高了同步程度（高达99%），为操作下一步提供时间保障和奠定染色体加倍的基础；2、采用热休克短时间处理受精卵，有效降低对长时间热休克对受精卵的破坏作用，提高受精卵的成活率；3、雌激素抑制剂溶液浸泡，再一次强化与保证雄性转化率；4、用纯系的雄性四倍体与原有的雌性二倍体回交，有效保证了三倍体的纯度。因而通过此方法，可获得100%的河蚌三倍体纯系，提高了三倍体的育成率与出苗率，减少了育种与选种的麻烦，更主要是对自然水产品种种质和生态环境无污染。具体实施方式现结合具体实施例，对本专利技术作进一步描述。实施例一河蚌三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到河蚌人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10g/500g饲料，待用；（2）投喂：在母蚌产卵前5天，按常规饲料投喂方法对母蚌进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母蚌投喂10g，下午6：00每100g母蚌投喂10g；至其卵发育成熟，然后，取公蚌在吊养在一起，使其自然产卵受精，得受精“怀卵”母蚌；（3）热休克处理：观察“怀卵”母蚌受精卵的发育情况，在受精卵第一次卵裂前3min，把步骤（2）中的“怀卵”母蚌放入溶氧达8mg/l（通过人工充氧）、温度为42℃恒温水中，热休克3min，待用；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为200mg/l，睾酮的浓度为40mg/l；（5）取步骤（3）处理后的“怀卵”母蚌，放入用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温泡浴120S，“怀卵”母蚌与溶液比为1：2，通过充氧，使溶液中的氧气含量达10mg/l；（6）取步骤（5）处理后的“怀卵”母蚌，放入育苗池中进行常规培育，直至产出钩介幼虫，寄生到鱼体，再脱落，形成仔蚌，从而获得河蚌的雄性四倍体纯系；（7）三倍体河蚌的获得：取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。实施例二河蚌三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到河蚌人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为20g/500g饲料，待用；（2）投喂：在母蚌产卵前10天，按常规饲料投喂方法对母蚌进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母蚌投喂5g，下午6：00每100g母蚌投喂8g；至其卵发育成熟，然后，取公蚌在吊养在一起，使其自然产卵受精，得受精“怀卵”母蚌；（3）热休克处理：观察“怀卵”母蚌受精卵的发育情况，在受精卵第一次卵裂前2min，把步骤（2）中的“怀卵”母蚌放入溶氧达5mg/l（通过人工充氧）、温度为39℃恒温水中，热休克3min，待用；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为240mg/l，睾酮的浓度为50mg/l；（5）取步骤（3）处理后的“怀卵”母蚌，放入用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温泡浴90S，“怀卵”母蚌与溶液比为1：2，通过充氧，使溶液中的氧气含量达10mg/l；（6）取步骤（5）处理后的“怀卵”母蚌，放入育苗池中进行常规培育，直至产出钩介幼虫，寄生到鱼体，再脱落，形成仔蚌，从而获得河蚌的雄性四倍体纯系；（7）三倍体河蚌的获得：取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。上述两个实施例仅为本专利技术的优选方案之二，并不能限制本专利技术的保护范围，任意与本专利技术等同或相似的技术手段视为本专利技术的保护范围。以下附上本专利技术部分处理方式及结果统计。附：河蚌三倍体育成结果统计注：上述结果是在母本产卵前10天投喂他莫昔芬，受精卵第一次卵裂前2min、溶氧达5mg/l、热休克3min，雌激素抑制剂浸泡90s所取得的结果。本文档来自技高网...

【技术保护点】
河蚌三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到河蚌人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10～20g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母蚌产卵前5～10天，按常规饲料投喂方法对母蚌进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母蚌投喂5～10g，下午6：00每100g母蚌投喂8～10g；至其卵发育成熟，然后，取公蚌在吊养在一起，使其自然产卵受精，得受精“怀卵”母蚌；（3）热休克处理：观察“怀卵”母蚌受精卵的发育情况，在受精卵第一次卵裂前2～3min，把上述“怀卵”母蚌放入溶氧达5～8mg/l、温度为39～42℃恒温水中，热休克3～5min，待用；（4）雌激素抑制剂溶液配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为120～240mg/l，睾酮的浓度为10～50mg/l；（5）取步骤（3）处理后的“怀卵”母蚌，放入用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温泡浴90～150S，“怀卵”母蚌与溶液重量比为1：2，通过充氧，使溶液中的氧气含量达5～10mg/l；（6）取步骤（5）处理后的“怀卵”母蚌，放入育苗池中进行常规培育；直至产出钩介幼虫，寄生到鱼体，再脱落，形成仔蚌，从而获得河蚌的雄性四倍体纯系；（7）三倍体河蚌的获得：取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。...

【技术特征摘要】
1.河蚌三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到河蚌人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10～20g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母蚌产卵前5～10天，按常规饲料投喂方法对母蚌进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母蚌投喂5～10g，下午6：00每100g母蚌投喂8～10g；至其卵发育成熟，然后，取公蚌在吊养在一起，使其自然产卵受精，得受精“怀卵”母蚌；（3）热休克处理：观察“怀卵”母蚌受精卵的发育情况，在受精卵第一次卵裂前2～3min，把上述“怀卵”母蚌放入溶氧达5～8mg/l、温度为39～42℃恒温水中，热休克3～5min，待用；（4...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨品红，罗玉双，刘飞，
申请(专利权)人：湖南文理学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43