乌龟三倍体纯系高效育成的方法技术

本发明专利技术公开了一种乌龟三倍体纯系高效育成的方法，包括如下步骤：他莫昔芬喂养料的配备、投喂他莫昔芬喂养料、冷休克处理、雌激素抑制剂溶液的配制、用雌激素抑制剂溶液均匀喷雾等。过此方法，可获得100%的三倍体纯系，提高了三倍体的育成率与出苗率，减少了育种与选种的麻烦，更主要是对自然水产品种种质和生态环境无污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及乌龟的繁育方法，具体涉及一种乌龟三倍体纯系高效育成的方法。
技术介绍
乌龟隶属爬行纲、龟鳖目、龟科，是现存古老的爬行动物，常见的为二倍体，身上长有非常坚固的甲壳，雌龟生长速度为一领龄龟体重在15克左右，二龄龟50克，三龄龟100克，四龄龟200克，无龄龟250克，雄龟生长慢，性成熟最大个体一般为250克以下。因三倍体的不育特征，使乌龟在生长速度、抗病性、肉质等方面表现出更为显著的优势。现有技术中，要获得三倍体不育乌龟，最快捷有效的方式是通过四倍体乌龟与二倍体乌龟倍间杂交获得，那么就需要建立遗传稳定、纯度极高的四倍体乌龟体系。但在乌龟的遗传育种中，目前为止还未见乌龟三倍体高效育成的报道。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种方法稳定、种群纯度高达100%的乌龟三倍体纯系高效育成的方法。为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：乌龟三倍体纯系高效育成的方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到乌龟常规饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10～16g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母龟产蛋前5～10天，按常规饲料投喂方法对母本进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g乌龟投喂20～30g，下午6：00每100g乌龟投喂10～15g，直至产蛋；（3）冷休克处理：在一次卵裂时，采用冷休克的方法，把步骤（2）中的受精蛋放入温度为-1～1℃的冷箱中，持续时间为3～5min；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为180～250mg/l，睾酮的浓度为100～150mg/l；（5）用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对步骤（3）处理后的受精蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为10～20ml，保持孵化器的温度29～33℃、湿度50～90%，进行孵化；从而获得乌龟雄性四倍体纯系。（6）取步骤（5）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。本专利技术的优点：1、本专利技术中对母本进行添加他莫昔芬饲料投喂，起到抑制DNA分裂和促雄性的双重作用的同时，将受精蛋第一次卵裂的时间推迟了3～5min，并提高所有受精蛋第一次卵裂的同步程度（可达99%），为操作下一步提供时间保障和奠定染色体加倍基础；2、在受精卵第一次卵裂采用冷休克处理，进一步阻止其染色体分裂，加强了四倍体的形成机率；3、雌激素抑制剂溶液喷洒，再一次强化与保证其雄性的转化率；4、用纯系的雄性四倍体与原有的雌性二倍体回交，有效保证了三倍体的纯度。因而通过此方法，可获得100%的三倍体纯系，提高了三倍体的育成率与出苗率，减少了育种与选种的麻烦，更主要是对自然水产品种种质和生态环境无污染。具体实施方式现结合具体实施例，对本专利技术作进一步描述。实施例一乌龟三倍体纯系高效育成的方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到乌龟常规饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为16g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母龟产蛋前5天，按常规饲料投喂方法对母本进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g乌龟投喂30g喂养料，下午6：00每100g乌龟投喂15g喂养料；（3）冷休克处理：在一次卵裂时，采用冷休克的方法，把步骤（2）中的受精蛋放入温度为0℃的冷箱中，持续时间为5min；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为180mg/l，睾酮的浓度为100mg/l；（5）用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对步骤（3）中的受精蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为15ml，保持孵化器的温度29℃、湿度80%，进行孵化；从而获得乌龟雄性四倍体纯系。（6）取步骤（5）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。实施例二乌龟三倍体纯系高效育成的方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到乌龟常规饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为16g/500g饲料，待用；（2）投喂：在母龟产蛋前10天，按常规饲料投喂方法对母本进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g乌龟投喂25g，下午6：00每100g乌龟投喂15g；（3）冷休克处理：在一次卵裂时，采用冷休克的方法，把步骤（2）中的受精蛋放入温度为-1℃的冷箱中，持续时间为3min；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为230mg/l，睾酮的浓度为140mg/l；（5）用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对步骤（3）中的受精蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为20ml，保持孵化器的温度33℃、湿度70%，进行孵化；从而获得乌龟雄性四倍体纯系。（6）取步骤（5）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。上述两个实施例仅为本专利技术的优选方案之二，并不能限制本专利技术的保护范围，任意与本专利技术等同或相似的技术手段视为本专利技术的保护范围。以下附上本专利技术部分处理方式及结果统计。附：乌龟三倍体育成结果统计注：上述结果是母龟产蛋前10天投喂他莫昔芬喂养料，冷休克3min所取得的结果。本文档来自技高网...

【技术保护点】
乌龟三倍体纯系高效育成的方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到乌龟常规饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10～16g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母龟产蛋前5～10天，按常规饲料投喂方法对母本进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g乌龟投喂20～30g，下午6：00每100g乌龟投喂10～15g，直至产蛋；（3）冷休克处理：在一次卵裂时，采用冷休克的方法，把步骤（2）中的受精蛋放入温度为‑1～1℃的冷箱中，持续时间为3～5min；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为180～250mg/l，睾酮的浓度为100～150mg/l；（5）用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液，放入喷雾器中，对步骤（3）处理后的受精蛋进行均匀喷雾，用量每100只受精蛋为10～20ml，保持孵化器的温度29～33℃、湿度50～90%，进行孵化；从而获得乌龟雄性四倍体纯系。（6）取步骤（5）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。...

【技术特征摘要】
1.乌龟三倍体纯系高效育成的方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到乌龟常规饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10～16g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母龟产蛋前5～10天，按常规饲料投喂方法对母本进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g乌龟投喂20～30g，下午6：00每100g乌龟投喂10～15g，直至产蛋；（3）冷休克处理：在一次卵裂时，采用冷休克的方法，把步骤（2）中的受精蛋放入温度为-1～1℃的冷箱中，持续时间为3～5min；（4...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨品红，韩庆，黄春红，
申请(专利权)人：湖南文理学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43