本发明专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种快速DNA产物凝胶回收方法，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下，切除多余部分，直接放入4层硅胶膜柱中；在室温下，13000rpm离心2min，收集管中即为DNA溶液。主要解决了主流DNA回收方法时间长、经济成本高等问题。将DNA回收实验的操作时间压缩至2min内完成，单次回收成本降低到原来的1/10。不仅大大简化操作流程，而且降低了时间成本和经济成本。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种快速DNA产物凝胶回收方法。
技术介绍
在基因克隆等多种DNA测序实验中，需要纯化回收聚合酶链式反应(PCR)扩增的特异性产物进行测序与分析。常用鉴定PCR扩增产物的方法是琼脂糖凝胶电泳，相应地对于凝胶电泳分离的DNA片段进行回收也有多种方法，目前最常用的有低熔点琼脂糖凝胶回收和试剂盒柱回收法。相对于以前传统的胶纯化回收方法来说，此两种方法的操作相对简单，但成本相对较高操作也比较繁琐和复杂。实验室最为常用的DNA回收方法是试剂盒柱回收法，如Universal DNA纯化回收试剂盒(天根生化科技有限公司)法。该试剂盒采用独特的缓冲体系和离心吸附柱，既可从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段，又可用于直接纯化PCR产物，能够满足多种实验需要。溶胶液PC中含有pH指示剂，可根据颜色来判断溶胶状态。使用该产品可回收100 bp-8kb大小的DNA片段，回收率可达80%。虽然该试剂盒操作并不复杂，回收效率中上，但其回收操作时长在20-30 min，单次回收成本6-8元人民币。多数分子实验室需要进行大量的DNA回收实验，若使用现有的试剂盒法回收，需要耗费很高的时间成本和经济成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速DNA产物凝胶回收方法，主要解决了主流DNA回收方法时间长、经济成本高等问题。将DNA回收实验的操作时间压缩至2 min内完成，单次回收成本降低到原来的1/10。不仅大大简化操作流程，而且降低了时间成本和经济成本。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案: 采用4层硅胶膜柱过滤回收DNA片段，一步即可完成回收实验，用时仅需2 min。回收方法如下: 切胶:将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽可能切除多余部分)，直接放入4层硅胶膜柱中； 离心回收:在室温下，13000 rpm离心2 min，收集管中即为DNA溶液。本专利技术的优点在于: 1、本专利技术在2min内完成DNA片段回收实验，大大缩减了操作的时间成本； 2、本专利技术单次回收经济成本不到1元人民币，相对实验室常用的DNA回收试剂盒来说成本不足其1/10，大大降低了 DNA回收实验的经济成本； 3、本专利技术操作极其简单，一步即可完成DNA回收实验。【附图说明】图1 两种方法回收2K DNA Marker 2000 bp和500 bp片段结果，M:2K DNA Marker(购自全式金生物技术有限公司)10 yL ;1-4:使用本专利技术方法回收2K DNA Marker (10yL)2000 bp和500 bp片段结果，重复2次；5-6:使用Universal DNA纯化回收试剂盒(购自天根生化科技有限公司)回收2K DNA Marker (10 yL) 2000 bp和500 bp片段结果。图2 两种方法回收 15K DNA Marker 15000 bp、5000 bp 和 lOOObp 片段结果，Μ:15Κ DNA Marker (购自宝生物工程有限公司)10 μ L ; 1-3:使用本专利技术方法回收15K DNAMarker (10 yL) 15000 bp、5000 bp 和 lOOObp 片段结果；4_6:使用 Universal DNA 纯化回收试剂盒(购自天根生化科技有限公司)回收15K DNA Marker (10 yL) 15000 bp,5000bp和lOOObp片段结果。图3 两种方法回收 PCR 产物结果，M:2K DNA Marker，1:PCR 产物 A1 (20 μ L)，2:试剂盒回收PCR产物Al，3:PCR产物A2(20 yL)，4:本专利技术方法回收PCR产物A2。【具体实施方式】实施例1 本专利技术采用4层硅胶膜柱，离心回收DNA片段，一步完成回收。以该专利技术的方法与实验室最常见的Universal DNA纯化回收试剂盒(天根生化科技有限公司)方法做对比试验，回收2K DNA Marker (10 yL)2000 bp和500 bp片段。从回收结果上看，本方法和试剂盒回收后条带均比原条带弱，回收效率在60%~80%。与Universal DNA纯化回收试剂盒相比，本方法回收效率相对会低一些，但重复性很好。由于一般测序实验及DNA片段纯化回收的后续实验对DNA回收率的要求并不是很高，满足回收率40%都可达到后续实验要求。而本方法回收率可达60%~70%，满足后续实验要求。实施例2 为了进一步验证本方法在回收DNA大片段时的效果，使用本方法与Universal DNA纯化回收试剂盒对比回收15K DNA Marker中的15K、5K和IK DNA片段。从回收结果上看，本方法和试剂盒回收后条带均比原条带弱，回收效率在60%~80%。与Universal DNA纯化回收试剂盒相比，在回收5000 bp和1000 bp DNA片段时，本方法回收效率相对会低一些，但条带亮度说明回收产物满足后续实验；而在15000 bp DNA片段的回收上，回收试剂盒回收率明显降低，亮度稍低于本方法，说明本方法回收DNA大片段的效果好于回收试剂盒。从不同分子量DNA回收结果对比，本方法对不同分子量DNA片段的回收率相对稳定，不会因为分子量增大而降低回收率。从条带亮度来看，回收产物满足后续实验要求。实施例3 为了验证本方法满足后续实验的要求，我们使用本方法与Universal DNA纯化回收试剂盒对比回收某基因3’ RACE的PCR产物，并分别做了连接、转化和克隆测序。使用某基因3’ RACE引物，50 μ L体系扩增获得两管PCR产物。分别抽取20 μ L产物跑胶(1%琼脂糖凝胶)，分别采用两种方法切胶回收。回收后将PCR产物与对应的胶回收产物同时上样跑胶。与Universal DNA纯化回收试剂盒相比，两种方法回收率相差无几，满足后续实验要求。将所得DNA溶液与回收试剂盒所得DNA溶液分别进行连接、转化(载体为pEASY-T5 Zero，感受态细胞使用Transl-Tl，均购自全式金生物技术有限公司)，并进行测序。两种方法得到的DNA溶液均可进行连接、转化，转化效率一致，单克隆菌落生长状态一致。测序结果显示，所得基因序列一致，证明两种方法在克隆测序实验中效果相同。该方法已在本实验室进行的大量克隆测序及回收实验中得到验证，满足实验要求。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，凡依本专利技术申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本专利技术的涵盖范围。【主权项】1.一种快速DNA产物凝胶回收方法，其特征在于:所述方法包括如下步骤: (1)切胶:将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下，切除多余部分，直接放入4层硅胶膜柱中； (2)离心回收:在室温下，13000rpm离心2 min，收集管中即为DNA溶液。【专利摘要】本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种快速DNA产物凝胶回收方法，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下，切除多余部分，直接放入4层硅胶膜柱中；在室温下，13000rpm离心2min，收集管中即为DNA溶液。主要解决了主流DNA回收方法时间长、经济成本高等问题。将DNA回收实验的操作时间压缩至2min内完成，单次回收成本降低到原来的1/10。不仅大大简化操作流程，而且本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速DNA产物凝胶回收方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）切胶：将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下，切除多余部分，直接放入4层硅胶膜柱中；（2）离心回收：在室温下，13000 rpm离心2 min，收集管中即为DNA溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蒲小龙，郭志雄，潘东明，潘腾飞，叶如梦，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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