一种人参皂苷提取物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种人参皂苷提取物及其制备方法。提取物中含有Rb1、Rb2、Rc、Rd人参主皂苷和转化得到的抗肿瘤活性物质原人参二醇（PPD）。其制备方法采用冻融法提取人参皂苷，该方法包括以下步骤：a、取鲜人参，去除异物后切成片；b、放入超低温冰箱中冷冻，然后解冻，反复冻融；c、粉碎后加入80%甲醇水溶液超声提取，过滤，滤液减压浓缩；d、加入去离子水溶解后，用乙醚、饱和正丁醇溶液萃取，减压浓缩，得到人参皂苷提取物。本发明专利技术方法操作简单，与传统的有机溶剂法相比提取收率高、成本低，并且能够得到抗肿瘤活性物质原人参二醇（PPD）。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然产物分离提取领域，具体设及一种人参皂巧提取物及其制备方 法。
技术介绍
人参（PanaxginsengC.AMeyer)为五加科人参属多年生宿根草本植物，主产于 吉林、迂宁、黑龙江、河北、山西等地，是我国名贵的中药材，具有主补五脏、安精神、定魂魄、 止惊惇、除邪气、生津止渴、安神益智、益寿延年之功效，是滋补的佳品，有"百草之王"的美 誉。人参皂巧是人参的主要成分之一，约占人参总质量的4%。人参皂巧是一种固醇类化合 物，属=祗类皂巧，由巧元和糖连接而成，具有相似的基本结构，根据糖巧基结构的不同分 为3类：齐墳果酸型（如Ro)、人参二醇型（如化1、化2、Rg3、化I、化2、PPD)、人参S醇型 巧e、Rgl、化1、PPT)，其中F2、Rg3、化2等存在于野山参和红参中并且含量极低，称为稀有人 参皂巧。目前从人参中分离得到150余种人参皂巧单体，其具有改善微循环、保护屯、功能、 提高组织抗缺氧能力、抗癌、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗福射、抗疲劳等多种生物活性。 目前，提取人参皂巧的方法有W下几种，煎煮法、溫浸法、乙醇回流提取法、微波提 取法、超声波提取法、索氏提取法、柱层析法、超临界萃取法、酶提取法等。其中，乙醇回流提 取法提取效率高，但是醇对于叶绿素的溶解性较大，不易去除，从而影响提取物质量；超声 波提取法应用于许多植物的有效成分的提取，操作简单，提取时间短，得率高，但是提取效 果受人参含水量的影响，同时存在噪音大，影响人体健康，难W实现规模化生产的不足。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种人参皂巧提取物，W及通过冻融法提取人参皂巧的制备 方法，该方法操作简单、提取率高、成本低，最重要的是在冻融过程中实现人参皂巧的转化， 使得人参皂巧提取物中含有抗肿瘤活性物质原人参二醇（PPD)。 本专利技术的目的通过采用W下技术方案实现： 一种人参皂巧提取物，由W下冻融法提取制备： 曰、取鲜人参，去除异物后切成小片； b、放入超低溫冰箱中冷冻，然后解冻，反复冻融； C、粉碎后加入80%甲醇水溶液超声提取，过滤，滤液减压浓缩；t加入去离子水溶解后，用乙酸、饱和正下醇溶液萃取，减压浓缩，得到人参皂巧提取 物，所得到的人参皂巧提取物中含有化1、化2、Rc、Rd人参主皂巧和转化得到的抗肿瘤活性 物质原人参二醇（PPD)。 -种人参皂巧提取物的制备方法，包括W下步骤： 曰、取鲜人参，去除异物后切成片； b、放入超低溫冰箱中冷冻，然后解冻； C、粉碎后加入80%甲醇水溶液超声提取，过滤，滤液减压浓缩； t加入去离子水溶解后，用乙酸、饱和正下醇溶液萃取，减压浓缩，得到人参皂巧提取 物。进一步地，所述的b步骤中冷冻溫度为-30°C至-80°C，冷冻时间为5-25h;在18°C 至25°C下自然解冻5-25h;重复冻融b步骤1-6次。 进一步地，所述的C步骤加入80%甲醇水溶液50-200血，在50°C超声提取 10-50min。 进一步地，所述的d步骤中，将C步骤得到的粗提物用40-60血去离子水溶解，用 等体积的乙酸萃取S次，保留下层，用40-60mL饱和正下醇溶液提取，减压浓缩，得到人参 皂巧提取物。 进一步地，所述的d步骤所得到的人参皂巧提取物中含有化1，化2,Re,Rd人参主 皂巧和转化得到的抗肿瘤活性物质原人参二醇（PPD)。 冻融法是一种广泛用于动植物、微生物和病理医学实验的方法，是指反复冷冻与 融化时由于细胞中形成了冰晶，使剩余液体中盐浓度增高，导致膜组织结构不同的程度改 变的一种方法。表现为细胞器膜脂质双分子层变化，横向的脂质分离成单个结构域，W及 膜通透性的变化，从而有利于胞内物质流出。有报道冻融法被用于农杆菌、根瘤菌的转化研 究，W及被用于植物血清素、叶绿素糖、动物血纤维蛋白原的提取和基因工程受体细胞破碎 等诸多领域。 本专利技术的有益效果在于： (1)采用冻融技术提取人参有效成分人参皂巧，该方法中人参经过反复冻融导致细胞 膜和组织结构的机械损伤，增强膜的通透性，促进植物细胞代谢产物的释放，从而提高有效 成分的提取率。 (2)冻融法提取人参皂巧过程中，实现人参皂巧的转化，即多糖链人参皂巧巧曰 化1等）转化为生物活性更强的低糖链人参皂巧（F2等）或无糖链的原人参二醇（PPD);提取 物中生成有抗肿瘤活性物质原人参二醇（PPD)，运是在冻融法应用于人参皂巧提取中从未 有报道的。【附图说明】图1为本专利技术实验人参皂巧提取物中稀有人参皂巧PPD标准曲线。【具体实施方式】 为了更清楚地理解本专利技术，下面通过具体的实施例进一步做详细描述。运些实施 例仅用于对本专利技术进一步说明，而不用于限制本专利技术的范围。[001引实施例1 准确称取一定量人参(鲜参)，去除异物后切成小片；-30°c冷冻12h，室溫20°C下解冻 5h，反复冻融3次；粉碎后加入80%甲醇水溶液，50°C超声提取20min，过滤，滤液减压浓缩； 加入去离子水溶解后，用饱和正下醇溶液萃取，减压浓缩，得到人参皂巧提取物。经HPLC测 试，得到人参皂巧化1含量为8. 06mg/g、Re含量为4. 79mg/g、化2含量为5. 30mg/g、Rd含 量为 1. 95mg/g。实施例2 准确称取一定量人参(鲜参)，去除异物后切成小片；-70°C冷冻12h，室溫18°C至25°C下解冻lOh，反复冻融4次；粉碎后加入80%甲醇水溶液50-200血，50°C超声IO-SOmi，过滤， 滤液减压浓缩，得粗提物；为粗提物中加入40-60mL去离子水溶解后，用等体积的乙酸萃取 =次，保留下层，用40-60血饱和正下醇溶液提取，减压浓缩，得到人参皂巧提取物。经HPLC 测试，得到人参皂巧化1含量为7. 53mg/g，Rc含量为4. 84mg/g，化2含量为5. 40mg/g，Rd含 量为 1. 64mg/g。[001引实施例3 准确称取一定量人参(鲜参)，去除异物后切成小片；-80°C冷冻lOh，室溫18°C至25°C下解冻5-25h，反复冻融5次；粉碎后加入80%甲醇水溶液，50°C超声提取30min,过滤，滤 液减压浓缩，得粗提物；在粗提物中加入去离子水溶解后，，用等体积的乙酸萃取=次，保留 下层，用40-60mL饱和正下醇溶液提取，减压浓缩，得到人参皂巧提取物。经HPLC测试，得 到人参皂巧化1含量为6. 35mg/g，Rc含量为3. 22mg/g，化2含量为4. 07mg/g，Rd含量为 1. 09mg/g0 在实施例1、2、3的实施过程中，调节冻融条件可得到不同比例的人参皂巧提取 物，并且在冻融过程中实现人参皂巧的转化，得到抗肿瘤活性物质原人参二醇（PPD)，其含 量达到0.llmg/g。人参皂巧提取物中稀有人参皂巧PPD标准曲线如图1。 测试实施例 准确称取一定量人参，分别按照实施例1-3提供的方法提取人参皂巧，同时将未经冻 融的人参作为对照组提取人参皂巧，利用高效液相色谱（HPLC)测定人参皂巧含量。 高效液相色谱法测定人参皂巧的具体步骤为： a、 精密准确称取人参皂巧标准品，色谱级甲醇溶解，利用峰面积绘制标准曲线，如图1 所示，X:峰面积；y:浓度（mg/mL); b、 色谱条件为：流动相：水（A)-乙腊度)，洗脱梯度如表1所示；流速：lmL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人参皂苷提取物，由以下冻融法提取制备：a、取鲜人参，去除异物后切成小片；b、放入超低温冰箱中冷冻，然后解冻，反复冻融；c、粉碎后加入80%甲醇水溶液超声提取，过滤，滤液减压浓缩；d、加入去离子水溶解后，用乙醚、饱和正丁醇溶液萃取，减压浓缩，得到人参皂苷提取物，所得到的人参皂苷提取物中含有Rb1、Rb2、Rc、Rd人参主皂苷和转化得到的抗肿瘤活性物质原人参二醇（PPD）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：尹成日，陈贺，吴昊，金英今，
申请(专利权)人：延边大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22