一种竹节皂苷提取物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种竹节参提取物，包括作为活性成分的以下IVa化合物或其药学可接受的盐，还提供一种从竹节参根茎提取单体化合物，包含权利要求1所述的竹节参提取物，以及药学可接受的辅料及载体。将该竹节参提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用。其中，肠粘膜损伤为非甾体抗炎药所引起的肠粘膜损伤。结果表明，竹节参皂苷IVa给药组小肠粘膜损伤及通透性改变明显变小，竹节参皂苷IVa对非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤具有治疗作用。

【技术实现步骤摘要】
一种竹节皂苷提取物及其应用
本专利技术提供一种竹节皂苷提取物及其应用，具体为竹节参皂苷IVa。
技术介绍
非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类临床上广泛使用的抗炎药物，如心脑血管疾病预防及风湿性疾病、疼痛、运动损伤的治疗。近年来临床上推出的缓释剂和肠溶剂如双氯芬酸钠肠溶片，减少胃部损伤的毒副作用，但却把损伤转移到了远端的小肠[1-3]；而随着胶囊内镜的发展，NSAID导致的肠道损伤的诊出率明显上升，被长期忽略的NSAID肠道损伤也越来越受到人们的关注[3,4]，然而对这一威胁人类健康的并发症，目前在其防治上并没有统一合理的方法。因此，积极寻求防治NSAID所导致的并发症已十分迫切。
技术实现思路
本专利技术提供一种竹节皂苷提取物，包括作为活性成分的以下IVa化合物或其药学可接受的盐：一种从竹节皂苷提取物中提取的单体化合物，包含所述的竹节皂苷提取物，以及药学可接受的辅料及载体。将该竹节参皂苷IVa应用于非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤的药物上的应用。经与对照组相比，模型组小肠粘膜通透性显著升高，小肠粘膜损伤评分增高，光镜可见小肠粘膜绒毛发生变性、坏死、脱落，大量炎细胞浸润。而竹节参皂苷IVa给药组小肠粘膜损伤及通透性改变明显变小，竹节参皂苷IVa对非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤具有治疗作用。附图说明图1为伊文思蓝染色检测竹节参皂苷IVa对NASIDs模型小肠黏膜损伤的保护作用。图2HE染色观察竹节参皂苷IVa对小肠黏膜组织的保护活性，其中，a正常组；b模型组；c竹节参皂苷IVa5mg组；d竹节参皂苷IVa20mg组(HE10×10)。图3.竹节参皂苷IVa对GRP78表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂量组。图4.竹节参皂苷IVa对TNFa表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂量组。具体实施方式实施例1实验动物湖北省动物实验中心提供：健康雄性BABL/c小鼠60只，体重18-24g左右，自然光照周期、于恒温、恒湿条件下标准配方的普通饲料喂养，自由进食进水。仪器和试剂倒置荧光显微镜：日本NikonECLIPSETE2000-S；全波长酶标仪：ThermoElectron公司；凝胶成像系统(GelLogic-200)：美国Kodak公司；高性能梯度PCR仪：德国WhatmanBiometra公司；多功能荧光酶标仪：瑞士Tecan集团公司；ECL化学发光系统：上海欧翔科学仪器有限公司。双氯芬酸：石药集团欧意药业有限公司，临用前用1％羧甲基纤维素配制0.5mg/ml；竹节参皂苷IVa：成都迪康科技制药公司，临用前用生理盐水溶解0.5mg/ml、2mg/ml；FD4：美国Sigma公司产品，临用前用PBS溶解配制成20mg/ml溶液；伊文氏蓝：临用前用生理盐水溶解配制成7.5mg/ml溶液。对42只BABL/c小鼠行随机组，标记为：模型组、正常组、竹节参皂苷IVa5mg/kg、20mg/kg组，连续灌胃六天。于第四天给予双氯芬酸5mg/kg(10mg/ml)灌胃。于第七天对小鼠进行手术取材，行肉眼观察及相关的实验研究。小鼠小肠组织的伊文思蓝染色：小鼠术前禁食(12h)不禁水。劲椎脱臼处死，处死前30min尾静脉注射伊文思蓝，剖腹，分离小肠，PBS液冲洗内容物。沿肠系膜对侧切开小肠，粘膜面朝上平铺固定于玻璃板上，滤纸吸干多余水分，数码相机拍摄。FITC-D检测小肠粘膜通透性：给小鼠10％水合氯醛行腹腔注射(0.2ml/只)，以四肢瘫软，呼吸心跳正常为标准，剖腹，距回盲部2cm处选4-5cm小肠，保持肠系膜血管血液供应正常，两端结扎，肠腔注入0.2ml异硫氰酸荧光素标记葡聚糖(FITC-D)，并予以保温，20min后活体取肝脏，称重、匀浆器冰上研磨，按1g/5ml加入1×PBS液，2000rpm/min、30min离心。取上清液于多功能荧光酶标仪(激发波长480nm和发射波长530nm)测量吸光度值，按标准曲线计算FITC-D含量，用统计学方法对实验数据进行分析。每只小鼠取约2-3cm小肠组织，10％中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4um切片，HE染色，倒置荧光显微镜观察组织学改变，组织学评分采用Chiu肠粘膜损伤评分标准[参见表1]。表1.Chiu评分标准统计学分析用spass18.0软件对实验数据行非参数检验和方差分析，结果用平均值与标准差关系表示，(p<0.05)。伊文思蓝染色检测竹节参皂苷IVa对NASIDs小肠黏膜损伤的保护作用。伊文思蓝能够从从血管中漏出到组织损伤处致伤损处局部蓝染，图1显示：阴性对照组小鼠小肠黏膜形态正常、粘膜表面干净；模型组小肠组织可见多个散在分布、大小不等的溃疡,多沿肠系膜缘侧分布，溃疡之间有多处水肿，但未见肠道穿孔。竹节参皂苷IVa给药组，由低浓度至高浓度，肠道粘膜逐渐趋于正常、溃疡数明显减少甚至无明显肉可视变化。竹节参皂苷IVa对NASIDs模型小肠黏膜通透性的影响：实验以FITC-D作为检测探针用于肠粘膜通透性检测。FITC-D是大分子荧光物质，当肠粘膜屏障受损时，它通过损伤部位进入血管而被吸收，因此，通过分光测量该物质的荧光值可反应肠粘膜通透性变化。按标准曲线可测得：模型组肝脏组织中FD4含量显著高于正常组，而竹节参皂苷IVa预处理组；FITC-D含量随着给药浓度增加，呈下降趋势；结果提示竹节参皂苷IVa可以改善NSAIDs所致小肠粘膜通透性的增加。(表2)经spass软件进行非参数检验和方差分析得出各组之间差异存在统计学意义(p<0.05)。表2竹节参皂苷IVa对NSAIDs损伤小肠粘膜的影响a与模型组比较p<0.05组织病理学观察竹节参皂苷IVa对NSAIDs小肠黏膜组织的保护活性：正常对照组小肠黏膜形态结构正常；模型组黏膜绒毛断裂、萎缩,甚至出现脱落或相互融合,大量炎细胞浸润，粘膜下层结构紊乱，形成蜂窝织炎，按Chiu评分标准明显偏高；预防给药组，随着给药浓度增加，粘膜层炎性细胞浸润有所改善，黏膜结构清晰度增加,腺体数目明显改变，膜下层肿胀,结构紊乱明显改善，与模型组对比Chiu评分明显下降。石蜡切片在光镜下观察(图2)：模型组局部粘膜层全层坏死,绒毛坏死脱落,,固有层受损,腺体结构消失，粘膜肌层不完整,损伤甚至达粘膜下层，残留绒毛水肿，大量中性粒细胞等炎性细胞浸润；正常组粘膜形态结构无明显改变；给药组，有低浓度至高浓度，粘膜层绒毛结构趋于完整，绒毛水肿及炎细胞浸润逐渐减轻，固有层结构逐渐清晰，无明显损坏，粘膜下层未受累。免疫荧光染色方法：1.玻片经多聚赖氨酸浸泡特殊处理后干燥备用。连续切片2μm，裱于载玻片上，60℃烤片3h，常规脱蜡，1×PBS洗3次。2.高压加热抗原修复：在电高压消毒锅中放入加有枸橼酸-枸橼酸盐缓冲液的染缸，加盖。在高压消毒锅开启压力阀的情况下将枸橼酸-枸橼酸盐缓冲液加热煮沸。将常规处理好的切片放入缓冲液中，密封高压消毒锅，关闭压力阀。加热至121℃计时2分钟。切断电源，打开压力阀，让高压锅内的压力迅速降低。取出染缸，在室温放置20分钟备用。3.1×PBS洗3次，每次10分钟；4.5％BSA室温封闭30分钟；5.加一抗(用1％BSA稀释)放在湿盒里，4度过夜；6.1×PBS洗3次，每次10分钟；7.加二抗(用1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种竹节皂苷提取物，其特征在于，包括作为活性成分的以下IVa化合物或其药学可接受的盐：

【技术特征摘要】
1.一种竹节皂苷提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用，肠粘膜损伤为非甾体抗炎药所引起的肠粘...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁丁，张长城，刘朝奇，王婷，周志勇，顿耀艳，赵海霞，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42