一种脾多肽注射液的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种脾多肽注射液的制备方法，属于生物制剂领域，具体地说，涉及一种由除人以外的哺乳动物的脾脏中提取的脾多肽提取物制备脾多肽注射液的方法。本发明专利技术的方法包括匀浆、超声提取、调节pH值、反复冻融、离心、乙醇沉淀、调节pH值、加热、冷却、过滤、冷冻、融化等步骤。与现有技术相比，本发明专利技术采用超声提取，并结合乙醇沉淀的方法大大提高了脾多肽的提取率，从而得到的脾多肽提取物中多肽的含量高，其临床疗效好。

【技术实现步骤摘要】
一种脾多肽注射液的制备方法
本专利技术属于药物制剂领域，具体地说，涉及一种脾多肽注射液的制备方法。
技术介绍
众所周知，哺乳动物体内有不少人体所需的各种营养成分及活性成分，进而有不少针对从哺乳动物的心脏、肝脏及肌肉组织中提取活性多肽的报道。而脾脏是哺乳动物的外周免疫器官，也是动物体内代谢最为旺盛的器官之一，由于其中含有丰富的细胞基本营养成分及细胞因子，特别是促进细胞代谢的活性成分如多肽类物质和核酸以及免疫调节因子——寡核苷肽等，因而受到研究者的广泛关注。国外对脾提取物的研究工作较早，目前已有用于化妆品的商品，如crydermine及增强免疫功能的保健品，如spleenP.M.G、IM-Encap、Gold-speen500等。《肉类工艺》2002年2期的“猪脾多肽的制备工艺研究”公开了猪脾脏的制备工艺，工艺流程为脾脏——去脂肪——匀浆——脱脂——酶解——终止反应——过滤——吸附脱色——凝胶层析——真空干燥——成品。具体工艺为：取一定量的新鲜猪脾脏，取掉大块的外表脂肪、表皮及皮下筋膜，加1：1的10℃蒸馏水，用组织捣碎机匀浆，按4:1的比例加正己烷或乙醚在常温下密闭抽提2h脱脂，分离得到脱脂的脾脏匀浆；将400ml脾匀浆液，置于恒温水浴锅中，调节温度至(50±2)℃，以Ca(OH)2乳液调节溶液至酶最适pH值，加入30g酶，反应一段时间后，以1:1HCl调pH至中性，同时升温至80℃保持15min，使酶钝化中止反应，纱布过滤，滤液加5％的活性炭吸附脱色，抽滤，过G-15葡聚糖凝胶柱，收集范围的溶液，50℃真空浓缩干燥，得脾脏多肽成品。该工艺采用的是酶解法，通过酶解脾脏中蛋白质来获得多肽，所得多肽成分组成易变动且并非原来天然存在的多肽。CN1634987A公开了一种从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的脾多肽提取物，将哺乳动物组织经去脂肪、匀浆、调酸、冻融破碎、调节pH值沉淀、加热、离心过滤、超滤等步骤制得脾多肽提取物；该药为免疫调节药，能够提高和改善机体免疫功能，可用于原发性和继发性细胞免疫缺陷病(如湿疹、血小板减少、多次感染综合症等)、呼吸道及肺部感染、习惯性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、复发性口疮等疾病治疗，可在治疗放化疗引起的白细胞减少症、白血病、再生性障碍贫血、淋巴瘤及其他恶性肿瘤、改善肿瘤患者恶变质、改善术后或重症患者身体虚弱时辅助使用。然而，采用现有技术的方法提取率低，使得脾多肽提取物中多肽的含量低，从而影响其制剂的疗效。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种脾多肽注射液的制备方法，该方法脾多肽提取率高，得到的提取物中多肽的含量高，疗效好。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下方案：一种脾多肽注射液的制备方法，该方法包括如下步骤：1)取新鲜健康干净的除人以外的哺乳动物的脾脏，加水匀浆，得匀浆液；2)将匀浆液进行超声提取，得提取液；3)提取液调节pH值至3.8～4.2，反复冻融2～3次；最后一次融化后的提取液离心，取上清液过滤，得清液I；4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在75～85％，0～10℃静置12～24小时，滤取上清液，得清液II；5)清液II调节pH值至6.5～7.0，加热，冷却至常温后离心，取上清液过滤，得清液III；6)清液III冷冻，冻实后融化，过滤，清液超滤1～2次，所得超滤液即为脾多肽提取物；7)上述脾多肽提取物过滤至配置罐中，补加注射用水定容，并调节pH值至6.5～7.0，经终端过滤后灌装，灭菌，包装，即得所述的脾多肽注射液。CN1634987A公开了一种从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的脾多肽提取物及制备方法，然而该方法的提取率低，使得脾多肽提取物中多肽的含量低，从而影响其制剂的疗效。本专利技术对脾多肽的提取方法进行了改进，试验表明，采用本专利技术方法脾多肽的提取率高，得到的脾多肽提取物中多肽的含量高，其临床疗效好。其中，步骤1)中，加水的量为脾脏重量的6～10倍，优选8倍。即加水的质量与脾脏重量的比为6:1～10:1，优选8:1。液料比即所加的水的质量与脾脏重量的比。液料比不同对提取率有一定的影响。本专利技术在提取温度为55℃、超声功率为70W、提取时间为12min时，考察了不同液料比对提取率的影响，如图1所示。由图1可知，开始随着液料比增大，脾多肽提取率增加，当液料比为6:1～10:1时，脾多肽提取率大于50％；而当液料比大于8：1以后，则出现降低的趋势。因此，本专利技术中选择液料比为6:1～10:1，优选8:1。步骤2)中，所述的超声提取为在温度50～60℃、超声功率60～80W的条件下超声提取8～16min；优选所述的超声提取为在温度55℃、超声功率70W的条件下超声提取12min。提取温度、超声功率和提取时间对提取率有着较大的影响本专利技术在液料比为8:1、超声功率为70W、提取时间为12min时，考察了不同提取温度对提取率的影响，如图2所示。由图2可知，在一定范围内脾多肽的提取率随温度升高而增加，当提取温度为50～60℃时，脾多肽提取率大于50％；当提取温度为55℃时提取率达到最大，此后，温度上升提取率反而呈下降趋势。因此，本专利技术中选择提取温度为50～60℃，优选55℃。同时，本专利技术在液料比为8:1、提取温度为55℃、提取时间为12min时，考察了不同超声功率对提取率的影响，如图3所示。由图3可知，随超声功率的增加，脾多肽提取率随之提高，当提取功率为60～80W时，脾多肽提取率大于50％；当提取功率为70W时提取率达到最大，此后，超声功率增加提取率反而呈下降趋势。因此，本专利技术中选择提取功率为60～80W，优选70W。本专利技术还在液料比为8:1、超声功率为70W、提取温度为55℃时，考察了不同提取时间对提取率的影响，如图4所示。由图4可知，随着提取时间的延长，脾多肽提取率随之提高，当提取时间为8～16min时，脾多肽提取率大于50％；当提取时间为12min时提取率达到最大，超过12min后，提取率呈减少趋势。因此，本专利技术中选择提取时间为8～16min，优选12min。步骤3)中，所述的冻融为在-18～-22℃下冷冻，在15～22℃下融化。步骤3)和步骤5)中所述离心的条件为3500～4000转/分，离心时间15～20分钟。优选的，步骤5)中，所述的加热为在75～80℃下加热15～20分钟。优选的，步骤6)中，所述的冷冻为在-18～-22℃下冷冻，所述的融化为在10～15℃下融化。优选的，步骤6)中，所述的超滤用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤。本专利技术所述的哺乳动物可为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔等。从猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔等新鲜健康脾脏组织中均可提取本专利技术所述的活性多肽。从生产成本、生产工艺、产品质量稳定性、临床疗效等因素考虑，上述哺乳动物脾脏组织优选牛脾脏组织作为脾多肽提取物的生产原料。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：采用本专利技术的方法脾多肽的提取率高，得到的脾多肽提取物中多肽的含量高，其临床疗效好。附图说明图1为液料比对提取率的影响示意图；图2为提取温度对提取率的影响示意图；图3为超声功率对提取率的影响示意图；图4为提取时间对提取率的影响示意图。具体实施方式以下为本专利技术的具体实施方式，所述的实施例是为了进一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脾多肽注射液的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1)取新鲜健康干净的除人以外的哺乳动物的脾脏，加水匀浆，得匀浆液；2)将匀浆液进行超声提取，得提取液；3)提取液调节pH值至3.8～4.2，反复冻融2～3次；最后一次融化后的提取液离心，取上清液过滤，得清液I；4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在75～85％，0～10℃静置12～24小时，滤取上清液，得清液II；5)清液II调节pH值至6.5～7.0，加热，冷却至常温后离心，取上清液过滤，得清液III；6)清液III冷冻，冻实后融化，过滤，清液超滤1～2次，所得超滤液即为脾多肽提取物；7)上述脾多肽提取物过滤至配置罐中，补加注射用水定容，并调节pH值至6.5～7.0，经终端过滤后灌装，灭菌，包装，即得所述的脾多肽注射液。

【技术特征摘要】
1.一种脾多肽注射液的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1)取新鲜健康干净的除人以外的哺乳动物的脾脏，加水匀浆，得匀浆液；2)将匀浆液进行超声提取，得提取液；所述的超声提取为在温度50～60℃、超声功率60～80W的条件下超声提取8～16min；3)提取液调节pH值至3.8～4.2，反复冻融2～3次；最后一次融化后的提取液离心，取上清液过滤，得清液I；4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在75～85％，0～10℃静置12～24小时，滤取上清液，得清液II；5)清液II调节pH值至6.5～7.0，加热，冷却至常温后离心，取上清液过滤，得清液III；6)清液III冷冻，冻实后融化，过滤，清液超滤1～2次，所得超滤液即为脾多肽提取物；7)上述脾多肽提取物过滤至配置罐中，补加注射用水定容，并调节pH值至6.5～7.0，经终端过滤后灌装，灭菌，包装，即得所述的脾多肽注射液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王静，
申请(专利权)人：深圳市艾民医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44