本发明专利技术公开了一种抗动脉硬化鱿鱼蛋白质短肽的分离方法。其主要解决现有鱿鱼内脏利用率低、附加值小的问题。其是将新鲜鱿鱼内脏捣碎，加去离子水，匀浆，得鱿鱼内脏浆液；鱿鱼内脏浆液采用酶解法制得鱿鱼内脏酶解液，鱿鱼内脏酶解液采用HP-20树脂柱进行层析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液对酶解液进行梯度洗脱，收集甲醇洗脱液，旋转蒸发浓缩，最终得到抗动脉硬化鱿鱼蛋白质短肽。本发明专利技术工艺合理、操作可行，适合规模化工厂生产，得到的鱿鱼内脏短肽可作为药剂学方面的辅料，其附加值高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肽的制备，尤其是一种从鱿鱼内脏中得到抗动脉硬化鱿鱼蛋白质短肽 的分离方法。
技术介绍
随着我国远洋捕捞业的迅速发展，鱿鱼已经成为我国主要的水产加工原料。一直 以来鱿鱼的加工利用基本停留在其胴体上，内脏、足、耳等一些加工副产物利用率较低，而 这些废弃物中含有丰富的蛋白质。鱿鱼内脏约占鱿鱼湿重的15%，而鱿鱼内脏含有约19%的 蛋白质。目前，鱿鱼内脏采用酶解发酵法，可作为制造酱油或天然调味品的原料。国外如西 班牙和日本已有鱿鱼酱油的生产与销售，而国内也有天然调味品研究报道。但是如何高效 对鱿鱼内脏进行水解以得到活性短肽的研究较少。 心脑血管疾病是全球人类死亡的首因，动脉硬化是其中最常见而重要的类型，至 今还没有良药。近年研究发现短肽类活性物质能够抑制诸多器官如心、肺、肾、肝的纤维化。
技术实现思路
为了克服现有技术中鱿鱼内脏利用率低、附加值小的不足，本专利技术提供一种工艺 合理、操作可行、具有抗动脉硬化活性、附加值高的抗动脉硬化鱿鱼蛋白质短肽的分离方 法。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种抗动脉硬化鱿鱼蛋白质短肽的 分离方法，其特征在于：经过下列工艺步骤： (1)原料预处理：选取新鲜的鱿鱼内脏为原料，放入组织捣碎机中捣碎，按照1 : 1~3 的比例加入去离子水，混匀，得鱿鱼内脏浆液； ⑵酶解：将步骤⑴中得到的鱿鱼内脏浆液放入容器中，加入酶活力〇. 5~1万U的 蛋白酶，置于预热的恒温水浴锅中，恒温温度为55±5°C，计时酶解；酶解完毕后，将酶解液 置于沸水浴中加热灭酶10-15min，冷却至室温后，控温离心，得到鱿鱼内脏酶解液； (3) 酶解液分离：将步骤（2)中得到的鱿鱼内脏酶解液用去离子水溶解，采用HP-20树 脂柱进行层析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液对酶解液进行梯度洗脱，收集甲醇洗脱 液，旋转蒸发浓缩，得鱿鱼内脏短肽。 进一步，本专利技术的，其还经过下列工 艺步骤： (4) 抗动脉硬化活性评价：将步骤（3)得到的鱿鱼内脏短肽进行HMG-CoA还原酶抑制 活性评价。 所述的蛋白酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、木 瓜蛋白酶中的一种。 所述的控温离心是控制温度4°C，离心机转速控制6000~8000r/min，离心10~ 20min〇 所述的HMG-CoA还原酶抑制活性评价，其方法为：圆底96孔平板孔内注入2. 5 mmol/LHMG-CoA、2-8U/mgHMG-CoA还原酶、10mmol/LNADPH和鱿鱼内脏短肽，构成50yL 的反应体系；在37°C于337nm处每隔4min连续测定80min，通过NADPH吸光度的变化以 评定鱿鱼内脏短肽对HMG-CoA还原酶的抑制作用； 其HMG-CoA还原酶抑制率的计算公式为：其中，在计算公式中，R为抑制率（%); 心和Κε分别为样品和对照组的吸光度直线斜率。 本专利技术采用酶解法制备鱿鱼内脏酶解液，鱿鱼内脏酶解液采用ΗΡ-20树脂柱进 行层析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液对酶解液进行梯度洗脱，收集甲醇洗脱液，旋转 蒸发浓缩，最终得到具有抗动脉硬化作用的活性短肽。本专利技术提取得到的鱿鱼内脏短肽可 作为药剂学方面的辅料，可制成供临床应用片剂、软胶囊剂、颗粒剂、冲剂、口服液、注射剂， 其附加值高。本专利技术工艺合理、操作可行，适合规模化工厂生产，且提取得到的鱿鱼内脏短 肽进行HMG-CoA还原酶抑制活性评价，证明具有抗动脉硬化的活性。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。 实施例1 ，经过下列工艺步骤： (1) 原料预处理：选取新鲜的鱿鱼内脏为原料，放入组织捣碎机中捣碎，按照1 : 2的 比例加入去离子水，混匀，得鱿鱼内脏浆液； (2) 酶解：将步骤（1)中得到的鱿鱼内脏浆液放入容器中，加入酶活力8000U的碱性蛋 白酶，置于预热的恒温水浴锅中，恒温温度为55°C，计时酶解，每隔10min用玻璃棒搅拌一 次；酶解完毕后，将酶解液置于沸水浴中加热灭酶15min，冷却至室温后，控制温度4°C，离 心机转速控制8000r/min，离心10min，得到鱿鱼内脏酶解液； (3) 酶解液分离：将步骤（2)中得到的鱿鱼内脏酶解液用去离子水溶解，采用HP-20树 脂柱进行层析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液对酶解液进行梯度洗脱，收集甲醇洗脱 液，旋转蒸发浓缩，得鱿鱼内脏短肽； (4) 抗动脉硬化活性评价：将步骤（3)得到的鱿鱼内脏短肽进行HMG-CoA还原酶抑制 活性评价；其中，所述的HMG-CoA还原酶抑制活性评价，其方法为：圆底96孔平板孔内注 入 2. 5mmol/LHMG-CoA、5U/mgHMG-CoA还原酶、10mmol/LNADPH和鱿鱼内脏短肽，构成 50μL的反应体系；在37°C于337nm处每隔4min连续测定80min，通过NADPH吸光度的 变化以评定鱿鱼内脏短肽对HMG-CoA还原酶的抑制作用； 其HMG-CoA还原酶抑制率的计算公式为：其中，在计算公式中，R为抑制率（%); 心和Κε分别为样品和对照组的吸光度直线斜率。实施例2 ，经过下列工艺步骤： (1)原料预处理：选取新鲜的鱿鱼内脏为原料，放入组织捣碎机中捣碎，按照1 : 3的 比例加入去离子水，混匀，得鱿鱼内脏浆液； (2) 酶解：将步骤（1)中得到的鱿鱼内脏浆液放入容器中，加入酶活力10000U的中性 蛋白酶，置于预热的恒温水浴锅中，恒温温度为50°C，计时酶解，每隔10min用玻璃棒搅拌 一次；酶解完毕后，将酶解液置于沸水浴中加热灭酶l〇min，冷却至室温后，控制温度4°C， 离心机转速控制6000r/min，离心20min，得到鱿鱼内脏酶解液； (3) 酶解液分离：将步骤（2)中得到的鱿鱼内脏酶解液用去离子水溶解，采用HP-20树 脂柱进行层析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液对酶解液进行梯度洗脱，收集甲醇洗脱 液，旋转蒸发浓缩，得鱿鱼内脏短肽； (4) 抗动脉硬化活性评价：将步骤（3)得到的鱿鱼内脏短肽进行HMG-CoA还原酶抑制 活性评价；其中，所述的HMG-CoA还原酶抑制活性评价，其方法为：圆底96孔平板孔内注 入 2. 5mmol/LHMG-CoA、8U/mgHMG-CoA还原酶、10mmol/LNADPH和鱿鱼内脏短肽，构成 50μL的反应体系；在37°C于337nm处每隔4min连续测定80min，通过NADPH吸光度的 变化以评定鱿鱼内脏短肽对HMG-CoA还原酶的抑制作用； 其HMG-CoA还原酶抑制率的计算公式为： 其中，在计算公式中，R为抑制率（%);心和Κε分别为样品和对照组的吸光度直线斜率。 实施例3 ，经过下列工艺步骤： (1) 原料预处理：选取新鲜的鱿鱼内脏为原料，放入组织捣碎机中捣碎，按照1 : 1的 比例加入去离子水，混匀，得鱿鱼内脏浆液； (2) 酶解：将步骤（1)中得到的鱿鱼内脏浆液放入容器中，加入酶活力5000U的胰蛋 白酶，置于预热的恒温水浴锅中，恒温温度为60°C，计时酶解，每隔10min用玻璃棒搅拌一 次；酶解完毕后，将酶解液置于沸水浴中加热灭酶12min，冷却至室温后，控制温度4°C，离 心机转速控制7000r/m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗动脉硬化鱿鱼蛋白质短肽的分离方法，其特征在于：经过下列工艺步骤：(1)原料预处理：选取新鲜的鱿鱼内脏为原料，放入组织捣碎机中捣碎，按照1︰1～3的比例加入去离子水，混匀，得鱿鱼内脏浆液；(2)酶解：将步骤(1)中得到的鱿鱼内脏浆液放入容器中，加入酶活力0.5～1万U的蛋白酶，置于预热的恒温水浴锅中，恒温温度为55±5℃，计时酶解；酶解完毕后，将酶解液置于沸水浴中加热灭酶10‑15 min，冷却至室温后，控温离心，得到鱿鱼内脏酶解液；(3)酶解液分离：将步骤(2)中得到的鱿鱼内脏酶解液用去离子水溶解，采用HP‑20 树脂柱进行层析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液对酶解液进行梯度洗脱，收集甲醇洗脱液，旋转蒸发浓缩，得鱿鱼内脏短肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨劲峰，吴文惠，孟哓琴，包斌，
申请(专利权)人：荣成广润水产食品有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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