大蒜素抗菌效果的检测方法技术

本发明专利技术公开了大蒜素抗菌效果的检测方法，包括以下步骤：所需培养基的准备，标准品制备，样品制备，接种培养过程，指示剂显色过程，本发明专利技术是一种高效快速的检测方法，具有较高的经济实用价值。本发明专利技术为饲料添加剂中大蒜素的选择提供了有力依据，在饲料生产和检测中得到了广泛的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及微生物检测
，尤其是设及到一种 和最低抑菌浓度的确定。
技术介绍
大蒜素是从大蒜的球形鱗茎中提取的挥发性的油状物质，有强烈的刺激味和辛辣 味。大蒜具有很强的抑菌和杀菌作用，对多种致病菌，如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等 均有明显抑制和杀灭作用，大蒜还含有丰富的有机营养成分，具有改善饲料适口性、促进 食欲、健胃杀菌、驱虫保健、促进生长、改善动物产品肉质等特点。此外，大蒜在动物体内无 残留，无耐药性，无致崎、致癌、致突变等不良反应。因此，大蒜素是饲料生产中抗菌素的 理想替代品，且使用剂量较低，价格较低，因此在饲料生产中得到了广泛的应用。饲料微生 物检测方法是饲料质量管理必不可少的重要组成部分，一般是贯彻"预防为主"的方针，通 过该检测可W有效的保障饲料的卫生安全，是权衡饲料质量的重要指标之一。通过微生物 检测，能够对饲料的细菌污染程度做出正确评价，为各项卫生管理提供科学依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种。 1.材料 所需培养基：营养肉汤、营养琼脂、稀松的营养琼脂(含0. 15%琼脂的营肉汤)、0. 9%氯 化钢溶液。对照品：大蒜素标准品。样品：大蒜素粉末。 菌种：大肠埃希菌。 试剂：0. 1%浓度刃天青指示剂、麦氏比浊管。[000引用具：灭菌的小试管，96孔板，5ml、2ml、1ml移液枪，灭菌的5ml、2ml、1ml枪头。 2.仪器设备 电子天平，冰箱，37°C培养箱，生物安全柜，真空脉动灭菌柜。 3.实验方法 用接种环薩取大肠埃希菌菌种在营养琼脂平板划线，在37Γ培养18~24h，刮取少量 培养物于0. 9%氯化钢溶液中，摇匀，与麦氏比浊管对比，稀释，直至浊度与0. 5管号浊度(麦 氏比浊管）一致。 吸取100μL上述稀释液接种至10ml营养肉汤中，37°C培养1她，接种50μL培养 肉汤至10ml稀松的营养琼脂中作为大肠埃希菌的起始培养物。 取大蒜素适量，加稀松的营养琼脂制成浓度为0. 5%的供试品溶液，依次稀释，浓 度分别为 0. 25%、0. 125%、0. 0625%、0. 03125%、0. 016%、0. 008〇/〇。 分别取850μL起始培养物，50μL指示剂，和各个浓度100μL供试品溶液，分别混 匀，作为供试液。[001引取850 μ L起始接种物，50 μ L指示剂，和100 μ L 20mg/ml的蒜素溶液，混匀，作为 阳性对照。 取850μL起始接种物，50μL指示剂，和100μL稀松的营养琼脂，混匀，作为阴性 对照。 取200μL稀松的营养琼脂，100μL指示剂，混匀，作为空白对照。 转移200μL供试液至96孔板，每个稀释度加2个孔；37 °C培养化，观察培养过程 中的颜色变化。【具体实施方式】 第一实施例； 来源于临巧万德福食品有限公司的1%的大蒜素的抑菌效果的检测。 第一步：稀松的营养琼脂的制备：称取0. 3g琼脂溶于200ml营养肉汤中，制成 0. 15%琼脂的营养肉汤。[002。 第二步：本专利技术所用的培养基谱养肉汤、营养琼脂、稀松的营养琼脂冷0. 15%琼 脂的营养肉汤)、0. 9%氯化钢溶液）使用前在真空脉动灭菌柜中12rC灭菌15分钟，所有用 具(试管，96孔板，51111、21111、11111移液枪，51111、21111、11111枪头）在真空脉动灭菌柜中121°(：灭 菌30分钟。 第Ξ步：对照品的制备：称取大蒜素标准品（来源：北京北纳创联生物技术研究 院）约20mg，溶于1ml稀松的营养琼脂中，制成约20mg/ml的对照品溶液。 第四步：样品的制备：称取原料大蒜素0. 25g，溶于50ml稀松的营养琼脂中，制成 0. 5%的样品溶液，依次稀释，制成浓度分别为0. 25%、0. 125%、0. 0625%、0. 03125%、0. 016〇/〇、 0.008%〇 第五步：实验过程：用接种环薩取大肠埃希菌菌种在营养琼脂平板划线，在37Γ 培养18~2地，刮取少量培养物于0. 9%氯化钢溶液中，摇匀，与麦氏比浊管对比，稀释，直至 浊度与0. 5管号浊度(麦氏比浊管）一致。[002引吸取100μL上述稀释液，接种至10ml营养肉汤中，37°C培养1她，接种50μL培养 肉汤至10ml稀松的营养琼脂中作为大肠埃希菌的起始培养物。 分别取850μL起始培养物，50μL指示剂，和各个浓度100μL供试品溶液，混匀， 作为供试液。 取850 μ L起始培养物，50 μ L指示剂，和100 μ L 20mg/ml的蒜素溶液，混匀，作为 阳性对照。[002引取850μL起始培养物，50μL指示剂，和100μL稀松的营养琼脂，混匀，作为阴性 对照。[002引取200μL稀松的营养琼脂，100μL指示剂，混匀，作为空白对照。转移200μL混合物至96孔板，每个稀释度加2个孔。37°C培养化，观察培养过程中的颜色变化。其结果如表1所示： 该结果表明，0. 5%和0. 25%浓度的供试品溶液具有抑菌效果，其他浓度的供试品溶液 无抗菌效果。[00础第二实施例； 来源于宜兴天石有限公司的25%的大蒜素的抑菌效果的检测。[003引具体步骤同第一实施例，其结果如表2所示:_该结果表明，0.5%浓度的供试品溶液具有抑菌效果，其他浓度的供试品溶液无抗菌效 果。 第；实施例； 来源于江苏雅博动物保健品有限责任公司一种含有大蒜素添加剂的鸡饲料的抑菌效 果的检测。 具体步骤同第一实施例，其结果如表3所示：该结果表明，0.5%浓度的供试品溶液具有抑菌效果，其他浓度的供试品溶液无抗菌效 果。 W上所述的具体实施例，对本专利技术解决的技术方案和技术效果进行了进一步详细 说明，肯定了大蒜素的抑菌效果，同时也确定了其最低抑菌质量百分浓度为0.5%。本专利技术比 传统的微生物检测方法快速简便，具有较高的应用价值。 W上所述并不用于限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所做的任何修改、 等同替换、改进等，均应包含在本专利技术保护范围之内。【主权项】1. ，其特征在于，包括如下步骤： 1) 用接种环蘸取大肠埃希菌菌种在营养琼脂平板划线，在37°c培养18~24h，刮取 少量培养物于〇. 9%质量浓度的氯化钠溶液中，摇匀，与麦氏比浊管对比，稀释，直至浊度与 0.5号麦氏比浊管浊度一致； 2) 吸取100yL上述稀释液接种至10ml营养肉汤中，37°C培养18h，接种50yL培养后 的营养肉汤至l〇ml稀松的营养琼脂中作为大肠埃希菌的起始培养物； 3) 取大蒜素适量，加稀松的营养琼脂制成质量浓度为0. 5%的供试品溶液，依次稀释， 质量浓度分别为 〇· 25%、0· 125%、0· 0625%、0· 03125%、0· 016%、0· 008% ; 4) 分别取850μL起始培养物，50μL指示剂，和各个浓度100μL供试品溶液，分别混 匀，作为供试液； 5) 取850μL起始培养物，50μL指示剂，和100μL20mg/ml的蒜素溶液，混勾，作为阳 性对照； 6) 取850μL起始培养物，50μL指示剂，和100μL稀松的营养琼脂，混勾，作为阴性对 昭. 7) 取200μL稀松的营养琼脂，100μL指示剂，混匀，作为空白对照； 8) 转移200μL供试液本文档来自技高网...

【技术保护点】
大蒜素抗菌效果的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1）用接种环蘸取大肠埃希菌菌种在营养琼脂平板划线,在37℃培养18～24h，刮取少量培养物于0.9%质量浓度的氯化钠溶液中，摇匀，与麦氏比浊管对比，稀释，直至浊度与0.5号麦氏比浊管浊度一致；2）吸取100μL上述稀释液接种至10ml营养肉汤中，37℃培养18h，接种50μL培养后的营养肉汤至10ml稀松的营养琼脂中作为大肠埃希菌的起始培养物；3）取大蒜素适量，加稀松的营养琼脂制成质量浓度为0.5%的供试品溶液，依次稀释，质量浓度分别为0.25%、0.125%、0.0625%、0.03125%、0.016%、0.008%；4）分别取850μL起始培养物，50μL指示剂，和各个浓度100μL供试品溶液，分别混匀，作为供试液；5）取850μL起始培养物，50μL指示剂，和100μL 20mg/ml的蒜素溶液，混匀，作为阳性对照；6）取850μL起始培养物，50μL指示剂，和100μL稀松的营养琼脂，混匀，作为阴性对照；7）取200μL稀松的营养琼脂，100μL指示剂，混匀，作为空白对照；8）转移200μL供试液至96孔板，每个稀释度加2个孔,37℃培养3h，观察培养过程中的颜色变化。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：倪静，黄彬，薛红芬，邵海艳，
申请(专利权)人：江苏雅博动物保健品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32