一种前列腺素E1的合成方法技术

本发明专利技术涉及一种前列腺素E1的制备方法，所述方法步骤如下：步骤1、从羊精囊中提取前列腺素湿酶步骤2、前列腺素湿酶进行酶促反应得到前列腺素E1粗品步骤3、粗品过柱纯化步骤4、重结晶精制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物化合物的制备方法，具体涉及一种前列腺素 E1的制备方法。 技术背景 前列腺素 E1，结构如下： 又名：前列地尔，化学名称：（lR，2R，3R)-3-羟基-2--5-氧代环戊烷庚酸。 前列腺素 E1来自于20碳脂肪酸，是人体内存在的广谱性物质。其直接作用于血管 平滑肌，扩张血管和提高血流量，改善微循环的灌注；并具有抑制血小板聚集和血栓A2生 成，抑制动脉粥样硬化脂质斑块形成及免疫复合物的形成；能扩张外周血管和冠状血管，降 低外周血管阻力和血压，防止血栓形成和保护血小板细胞，保护缺血心肌，缩小心肌梗死面 积，抗心力衰竭；并能扩张肾血管，增加肾血流量，清除非蛋白氮，调节水钠平衡，具有利尿 和保护肝脏、肾脏、肺脏等脏器功能的作用。同时具有扩张阴茎动脉、松弛阴茎海绵体平滑 肌，加速阴茎动脉血流速的作用。1982年，来自英国的范恩博士以及来自瑞典的塞缪尔森博 士和伯格斯壮博士因发现并研究前列地尔而获得诺贝尔生理医学奖。 近年来，由于前列腺素 E1的广泛临床应用范围，市场上对其的需求量逐年增加。 现在，国际上已有诸如日、德、美等国家实现前列腺素 E1原料药的大规模工业化生产，但在 产品纯度及市场价格、运输成本等方面很难满足国内药品生产企业的生产诉求。与此同时， 国内对前列腺素 E1原料药的生产大多停留在实验室规模生产阶段，只有少部分能够实现 工业化生产，而其中一部分则是运用的纯化学合成手段，他们生产的原料药产品纯度高，但 生产工艺复杂，生产周期长；再有就是在生产过程中会涉及到大量的有机溶剂的使用及废 液的处理等环境诸多问题。剩下一部分生产企业则是利用大型生物反应器在金属镍及哺乳 动物体内的精囊中提取的生物酶联合催化下进行连续生产，这种生产模式大大降低了该产 品的工艺复杂程度，同时也降低了有机试剂的使用量，但在其生产过程中大量的金属镍的 使用，增加了人体对该原料药的致敏性风险，同时也大大增加了生产成本。
技术实现思路
本专利技术的目的是，提供一种简单有效，且更为实用的前列腺素 E1原料药生产工 艺，以达到降低原料成本，简化生产工艺，缩短生产周期，降低外源致敏性物质出现的风险， 减少有机试剂排放的目的。 本专利技术提供一种用羊精囊提取前列腺素 El的制备方法，所述方法步骤如下： 步骤1、前列腺素湿酶的提取： (1)取新鲜的羊精囊，除去脂肪、肌肉及结缔组织； (2)加入氯化钾水溶液，浸泡； (3)研磨成匀浆； (4)离心得到清液，过滤，滤液调pH为4-6 ; (5)离心得到的沉淀再次匀衆，离心得到清液，过滤，滤液调pH为4-6。 (6)混合步骤⑷和（5)得到的产物即为前列腺素湿酶； 步骤2、酶促反应： (1)前列腺素湿酶中加入分散液，调pH至7-8,加入还原型谷胱甘肽、对苯二酸、二 高-γ -亚麻酸混合溶液，反应； (2)反应液调pH至4-5,离心得到沉淀，沉淀加入有机溶剂； (3)过滤，得到滤液，滤液回收有机溶剂得到浓缩液，加入缓冲液，调pH至8-9,加 入石油醚萃取，得到水层，调pH至3-4,用乙醚萃取，醚层干燥； (4)干燥后的醚层经过滤后，减压蒸除溶剂，得前列地尔粗品。 步骤3、纯化： (1) 200-300目硅胶活化后湿法装柱。 (2)将前列地尔粗品用三氯甲烷溶解后加入硅胶柱中，加入三氯甲烷平衡，洗涤液 洗涤，洗脱液洗脱，收集流出液； (3)蒸除溶剂，得一次纯化品； (4)将得到的一次纯化品重复步（1)~（3)步骤的纯化操作，得二次纯化品。步骤 4、精制： (1)将前列地尔二次纯化品溶于乙酸乙酯中，过滤后，滤液析晶，过滤干燥得一次 重结晶广品； (2)在此用乙酸乙酯重结晶得到二次重结晶产品； (3)二次重结晶产品干燥后得前列地尔精制产品。 优选的，本专利技术的前列腺素 E1的制备方法，步骤如下： 步骤1、前列腺素湿酶的提取： (1)取新鲜的羊精囊，除去多余脂肪、肌肉及结缔组织，速冻冷藏保存。 (2)取冷冻的羊精囊置于浓度为0. 154mol/L的氯化钾水溶液中（以完全没过羊精 囊为准），浸泡30~60min。 (3)将浸泡解冻后的羊精囊加入胶体磨中粉碎成匀浆。粉碎粒度在0.8mm左右的 匀浆。 (4)匀浆液于4000-4500r/min，温度2-8°C，离心20min。将离心后的上清液过滤， 滤液用2mol/L枸橼酸溶液调pH = 5. 0± 1. 0,离心得一次湿酶。 (5)将匀浆液离心后的沉淀再次匀浆得二次湿酶。 (7)将两次所得湿酶混合、称重，记录湿酶质量。 步骤2、酶促反应： (1)将湿酶用磷酸盐/EDTA-2Na混合液分散，用lmol/L氢氧化钾溶液调pH至 7. 5±0. 5,加入磷酸盐缓冲液溶解的还原型谷胱甘肽、对苯二酚、二高-γ-亚麻酸混合溶 液，通氧气35-40°C反应0. 5-1小时，反应完毕冷却至室温。 (2)用稀盐酸溶液调pH至4. 0±0. 5,离心后，滤除上清液，沉淀用2倍体积的丙酮 分散，放置12h。 (3)抽滤丙酮分散液，滤饼用丙酮洗涤，合并滤液及洗涤液。减压蒸除溶剂（可 回收重复利用），向浓缩液中加入pH 8. 2的磷酸盐缓冲液，并用氢氧化钾溶液调pH至 8. 2±0. 5,再用石油醚脱脂。水层用枸橼酸溶液调pH至3. 2±0. 5后，无水乙醚萃取。合并 醚层，用纯化水洗涤，无水硫酸钠干燥醚层8小时以上。 (4)干燥后的醚层经过滤后，减压蒸除溶剂，得前列地尔粗品。 步骤3、纯化： (1)200-300目硅胶活化后湿法装柱。 (2)将前列地尔粗品用三氯甲烷溶解后加入硅胶柱中，依次加入1倍柱体积的三 氯甲烧平衡，3倍柱体积的洗涤液洗涤和5倍柱体积洗脱液洗脱，待洗脱液走完1个柱体积 后开始收集流出液。 (3)将收集液减压蒸除溶剂，得一次纯化品。 (4)将得到的一次纯化品重复步骤（1)~步骤（3)操作，得二次纯化品。 步骤4、精制： (1)将前列地尔二次纯化品按lg : 20ml比例溶于乙酸乙酯中，过滤后密封，室温 下放置2~4h析出结晶，过滤所得结晶抽干后得一次重结晶产品。 (2)将一次重结晶产品按lg : 30ml比例溶于乙酸乙酯中，过滤后密封，室温放置 2~4h析出结晶。过滤所得结晶用乙酸乙酯洗涤后抽干，得二次重结晶产品。 (3)将二次重结晶产品放入真空干燥箱内，在室温、-0· 09MPa下真空干燥4h，得前 列地尔精制广品。 在本专利技术的上述方法中， 其中，步骤2、酶促反应中，各组分重量百分组成如下： 二高-γ-亚麻酸： 0.05%~0.15% 谷胱甘肽： 0.05%~0.15% 对苯二徽:： 0.001% ~0.010% 磷酸盐/EDTA-2Na混合液： 59.81%~59.94% (密度按1 ·0计算） 湿 酶： 39.87% ~39.96% 其中pH8. 2磷酸盐缓冲液的制备如下：分别称取磷酸氢二钾44. 0g，磷酸二氢钾 1. 5g，定容至 1000ml。 其中磷酸盐/EDTA-2Na混合液的制备如下：pH8. 2磷酸盐缓冲液：0. 125mol/L乙 二胺四乙酸二钠溶液（体积比）=9:1。...

【技术保护点】
一种用羊精囊提取前列腺素E1的制备方法，其特征在于，所述方法步骤如下：步骤1、前列腺素湿酶的提取：(1)取新鲜的羊精囊，除去脂肪、肌肉及结缔组织；(2)加入氯化钾水溶液，浸泡；(3)研磨成匀浆；(4)离心得到清液，过滤，滤液调pH为4‑6；(5)离心得到的沉淀再次匀浆，离心得到清液，过滤，滤液调pH为4‑6，(6)混合步骤(4)和(5)得到的产物即为前列腺素湿酶；步骤2、酶促反应：(1)前列腺素湿酶中加入分散液，调pH至7‑8，加入还原型谷胱甘肽、对苯二酚、二高‑γ‑亚麻酸混合溶液，反应；(2)反应液调pH至4‑5，离心得到沉淀，沉淀加入有机溶剂；(3)过滤，得到滤液，滤液回收有机溶剂得到浓缩液，加入缓冲液，调pH至8‑9，加入石油醚萃取，得到水层，调pH至3‑4，用乙醚萃取，醚层干燥；(4)干燥后的醚层经过滤后，减压蒸除溶剂，得前列地尔粗品；步骤3、纯化：(1)200‑300目硅胶活化后湿法装柱；(2)将前列地尔粗品用三氯甲烷溶解后加入硅胶柱中，加入三氯甲烷平衡，洗涤液洗涤，洗脱液洗脱，收集流出液；(3)蒸除溶剂，得一次纯化品；(4)将得到的一次纯化品重复步(1)～(3)步骤的纯化操作，得二次纯化品，步骤4、精制：(1)将前列地尔二次纯化品溶于乙酸乙酯中，过滤后，滤液析晶，过滤干燥得一次重结晶产品；(2)在此用乙酸乙酯重结晶得到二次重结晶产品；(3)二次重结晶产品干燥后得前列地尔精制产品。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：葛存慧，庞睿，吴贵海，王晴，任仲辉，季伟鑫，秦玮莹，孙海波，李生翀，宋春娜，张凯，白宇，
申请(专利权)人：哈药集团生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23