【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系的建立方法。
技术介绍
神经内分泌细胞(NEC)是目前公认的终末分化细胞,是肺癌、胃肠道癌和前列腺癌等肿瘤中常见的细胞类型。具有抗放、化疗的特征。其终末分化特性制约了其在体外的基础研究及新药筛选等应用研究的开展。
技术实现思路
本专利技术的目的在于为前列腺癌去激素治疗后前列腺癌组织内细胞的神经内分泌化导致的前列腺癌抗放、化疗的研究,以及相关新药的筛选、开发等研究,提供基础实验材料的人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系的建立方法。本专利技术的技术解决方案是:一种人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系(本细胞系是申请人建立的细胞系,缩写为NTU2)的建立方法,其特征是:包括下列步骤:(1)NHPrE1细胞系的培养:1:1 DMEM/F12,加5% FBS液,1% ITS,5ng/mL EGF,50ng/mL BPE;于5% CO2,37℃培养;2-3天换液一次,1:3-4传代;(2)神经内分泌亚型细胞NTU2分离:将NHPrE1细胞培养物用胰蛋白酶消化后,1000 RPM离心收集细胞,1X PBS洗涤三次后,用3% BSA于4℃封闭20分钟;加入1:50鼠抗人ChG A抗体 (sigma),4℃孵育30分钟后,用1X PBS洗涤三次;加入羊抗鼠磁珠抗体,4℃孵育30分钟后,用 mini MACS® Separator进行细胞分离;(3)NTU2细胞的扩增:将分离所得阳性细胞用1:1 DMEM/F12培养液,加5% FBS,1% ITS,5ng/mL EGF,50ng/mL BPE;于5% CO2,37℃培养;每 ...
【技术保护点】
一种人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系的建立方法,其特征是:包括下列步骤:(1) 人正常前列腺上皮祖细胞系NHPrE1细胞系的培养:1:1 DMEM/F12,加5% FBS,1% ITS,5ng/mL EGF,50ng/mL BPE;于5% CO2,37℃培养;2-3天换液一次,1:3‑4传代;(2)人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系NTU2的分离和纯化:将NHPrE1培养细胞用胰蛋白酶酶消化后,1000 RPM离心收集细胞,1× PBS洗涤三次后,用3% BSA于4℃封闭20分钟;加入1:50鼠抗人ChG A抗体,4℃孵育30分钟后,用1×PBS洗涤三次;加入羊抗鼠磁珠抗体,4℃孵育30分钟后,用 mini MACS® Separator进行细胞分离;(3)NTU2细胞的扩增:将分离所得阳性细胞用1:1 DMEM/F12培养液,加5% FBS,1% ITS,5ng/mL EGF,50ng/mL BPE;于5% CO2,37℃培养;每3天换液一次;(4)NTU2细胞克隆化:将扩增NTU2细胞用1:1 DMEM/F12培养液,加5% FBS,1% ITS,5ng/mL EGF,50n ...
【技术特征摘要】
1.一种人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系的建立方法,其特征是:包括下列步骤:(1) 人正常前列腺上皮祖细胞系NHPrE1细胞系的培养:1:1 DMEM/F12,加5% FBS,1% ITS,5ng/mL EGF,50ng/mL BPE;于5% CO2,37℃培养;2-3天换液一次,1:3-4传代;(2)人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系NTU2的分离和纯化:将NHPrE1培养细胞用胰蛋白酶酶消化后,1000 RPM离心收集细胞,1× PBS洗涤三次后,用3% BSA于4℃封闭20分钟;加入1:50鼠抗人ChG A抗体,4℃孵育30分钟后,用1×PBS洗涤三次;加入羊抗鼠磁珠抗体,4℃孵育30分钟后,用 mini MACS® Separator进行细胞分离;(3)NTU2细胞的扩增:将分离所得阳性细胞用1:1 DMEM/F12培养液,加5% FBS,1% ITS,5ng/mL EGF,50ng/mL BPE;于5% CO2,37℃培养;每3天换液一次;(4)NTU2细胞克隆化:将扩增N...
【专利技术属性】
技术研发人员:江明,张冲,张永辉,陈苗苗,鄂群,曹靖晨,王海燕,
申请(专利权)人:南通大学,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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