一种制备卡非佐米的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备卡非佐米的方法。本发明专利技术的具体步骤为：A）在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；B）通过固相合成法，依次偶联Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Homophe-OH、Fmoc-Gly-OH，偶联完毕，脱除Fmoc保护基，在三乙胺条件下往树脂中加入二（2-氯乙基）醚合成吗啡啉环，肽树脂裂解得到化合物Ⅰ；C）化合物Ⅰ与化合物Ⅱ发生缩合反应，即得卡非佐米。该工艺直接在载体上合成修饰有效的构件，避免了直接购买或者液相合成昂贵的有效构件，有效地提高了收率、降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多肽类药物的制备方法，具体涉及一种卡非佐米的合成方法。
技术介绍
卡非佐米，英名为：Carfilzomib，是含有环氧骨架的四肽，结构式如下：多发性骨髓瘤是一种浆细胞不正常增生，致使侵犯骨髓的一种恶性肿瘤。恶性骨髓瘤产生时，会引发蚀骨细胞活化，伴随着骨骼外部的硬骨被破坏，引发骨骼疼痛的症状。目前，最常见的治疗多发性骨髓瘤的药物主要有沙立度胺，或来那度胺和地塞米松配合使用以及第一代蛋白酶抑制剂硼替佐米。2012年7月20日，美国食品与药物管理局（FDA）批准了ONYXPHARMSINC公司产品卡非佐米(carfilzomib)注射用冻干粉针剂的上市。卡非佐米是一种四肽基环氧骨架蛋白酶体抑制剂，通过不可逆地结合到N-末端含有苏氨酸的20S蛋白酶体活性位点发挥抗肿瘤细胞增殖和凋亡作用。在动物中，卡非佐米抑制蛋白酶体活性的血液和组织中以及多发性骨髓瘤模型中，血液和实体肿瘤的肿瘤生长延迟。卡非佐米为第二代蛋白酶抑制剂，具有以下优点：首先，它对蛋白酶的抑制作用更加持久且不可逆，因此药效更好，病人产生抗药性的可能性更低；另外，卡非佐米与周围神经突变关系较小且抑制作用更有针对性，因而副作用更小。卡非佐米现有的合成方法为直线合成法，专利US20050245435中，卡非佐米合成步骤如下：N-Boc亮氨酸和苯丙氨酸苄酯缩合反应，然后在三氟乙酸作用下脱保护得到其三氟乙酸盐，之后在N,N-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三氮唑的催化下与氨基酸缩合生成二肽胺，所得二肽胺脱保护后与氯乙酰氯、碘化钠、吗啉反应，再通入氢气，在钯碳催化下还原得到化合物，所得化合物与侧链缩合即得卡非佐米粗品。这种方法能最终合成卡非佐米，但应用于大规模生产时仍存在一些问题，如直线合成法反应收率较低，所用碘化钠氯取代反应收率不高，因此消耗较多的起始原料；而且此合成方法中由于用到氯乙酰氯，污染较大；此外，此合成方法中反应类型较多，反应条件复杂多样，可控性差，不适用于大规模工业生产。因此，研发一种收率高、反应简单可控、适用于工业化生产的卡非佐米新的合成方法具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术人用现有的合成方法，制备卡非佐米，发现现有技术存在的技术问题是：合成收率低，反应类型较多，反应条件复杂多样，可控性差，不适用于大规模工业生产。为此，本专利技术人对卡非佐米的合成方法进行了研究，从而得到了本专利技术的技术方案。本专利技术的目的是提供一种制备卡非佐米的方法。本专利技术的合成路线如图1所示：在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；通过固相合成法，依次偶联Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Homophe-OH、Fmoc-Gly-OH，脱除Fmoc保护基，在三乙胺条件下往树脂中加入二（2-氯乙基）醚合成吗啡啉环，肽树脂裂解得到化合物Ⅰ；化合物Ⅰ与化合物Ⅱ发生缩合反应，即得卡非佐米。本专利技术中一些常用的缩写具有以下含义；Fmoc：芴甲氧羰基Fmoc-AA：芴甲氧羰基保护的氨基酸DIC：N,N′-二异丙基碳化二亚胺EDCI.HCl：1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐PyBOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯HOBt：1-羟基苯骈三唑Gly：甘氨酸Phe：苯丙氨酸Leu：亮氨酸Homophe：高苯丙氨酸DMF：N,N′-二甲基甲酰胺MeOH：甲醇DCM：二氯甲烷NMP：N-甲基吡咯烷酮DMSO：二甲基亚砜TFA：三氟醋酸EDT：乙二硫醇Piperidine：六氢吡啶DMAP：4-二甲氨基吡啶DIEA：N,N′-二异丙基乙胺TMP：2,4,6-三甲基吡啶NMM：N-甲基吗啉为此本专利技术提供一种卡非佐米的合成方法，其步骤如下：步骤1，在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；步骤2，通过固相合成法，依次偶联Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Homophe-OH、Fmoc-Gly-OH，偶联完毕，脱除Fmoc保护基，在三乙胺条件下往树脂中加入二（2-氯乙基）醚合成吗啡啉环，肽树脂裂解得到化合物Ⅰ；步骤3，化合物Ⅰ与化合物Ⅱ发生缩合反应，即得卡非佐米。其中，步骤1所述的固相合成方法，所述树脂固体载体采用2-CTC树脂，所述活化剂系统选自DIEA、TMP或NMM，所述Fmoc-Phe-树脂为0.10~0.90mmol/g取代度的Fmoc-Phe-CTC树脂。其中，步骤1所述的固相合成方法，所述树脂固体载体采用王树脂，所述活化剂系统由DIC、HOBt和DMAP组成，所述Fmoc-Phe-王树脂为0.10~0.90mmol/g取代度的Fmoc-Phe-王树脂。本专利技术中，所述的树脂的取代度是采用紫外吸光光度法测定的树脂的取代度，用体积比为1:4的哌啶和DMF混合溶液将偶联Fmoc保护型氨基酸的树脂上的Fmoc保护基脱保护下来，用紫外吸光光度法测定其浓度，然后采用含Fmoc的氨基酸标准化合物例如Fmoc-Leu-OH，以外标法标定树脂上的Fmoc的mmol数值，除以树脂重量，即得到树脂的取代度或称之为替代度。其中，步骤2所述的固相合成方法，所述方法包括以下步骤：1）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc-Gly-树脂上的Fmoc保护基，得到H-Gly-树脂；2）在偶联剂系统的存在下，H-Phe-树脂和Fmoc-Leu-OH偶联得到Fmoc-Leu-Phe-树脂；3）重复步骤1）、2），依次偶联Fmoc-Homophe-OH、Fmoc-Gly-OH，得到Fmoc-Gly-Homophe-Leu-Phe-树脂；4）偶联完毕，脱除Fmoc保护基，在三乙胺条件下往树脂中加入二（2-氯乙基）醚合成吗啡啉环，肽树脂裂解得到化合物Ⅰ。其中，上述固相合成方法步骤2）所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的任意组合。其中，上述固相合成方法步骤4）在三乙胺条件下往树脂中加入二（2-氯乙基）醚合成吗啡啉环中，树脂、二（2-氯乙基）醚和三乙胺的摩尔比优选为：1:1:3~1:1.2:3，反应温度为15~35℃，反应时间为3~5小时；更优选，树脂、二（2-氯乙基）和三乙胺醚摩尔比优选为：1:1:3，反应温度为15℃，反应时间为3小时。本专利技术的方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：1）摩尔比的选择：树脂、二（2-氯乙基）醚和三乙胺的摩尔比优选为：1:1:3和1:1.2:3；2）反应温度的选择：15℃和35℃；3）反应时间的选择本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备卡非佐米的方法，该工艺直接在载体上合成修饰有效的构件，避免了直接购买或者液相合成昂贵的有效构件，有效地提高了收率、降低生产成本，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 步骤1，在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc‑Phe‑OH偶联得到Fmoc‑Phe‑树脂；步骤2，通过固相合成法，依次偶联Fmoc‑Leu‑OH、Fmoc‑Homophe‑OH、Fmoc‑Gly‑OH，偶联完毕，脱除Fmoc保护基，在三乙胺条件下往树脂中加入二（2‑氯乙基）醚合成吗啡啉环，肽树脂裂解得到化合物Ⅰ：；步骤3，化合物Ⅰ与化合物Ⅱ：：发生缩合反应，即得卡非佐米。

【技术特征摘要】
1.一种制备卡非佐米的方法，该工艺直接在载体上合成修饰有效的构件，避免了直接购买或者液相合成昂贵的有效构件，有效地提高了收率、降低生产成本，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1，在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；
步骤2，通过固相合成法，依次偶联Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Homophe-OH、Fmoc-Gly-OH，偶联完毕，脱除Fmoc保护基，在三乙胺条件下往树脂中加入二（2-氯乙基）醚合成吗啡啉环，肽树脂裂解得到化合物Ⅰ：；
步骤3，化合物Ⅰ与化合物Ⅱ：：发生缩合反应，即得卡非佐米。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：
其中，步骤1所述的固相合成方法，所述树脂固体载体采用2-CTC树脂，所述活化剂系统选自DIEA、TMP或NMM，所述Fmoc-Phe-树脂为0.10~0.90mmol/g取代度的Fmoc-Phe-CTC树脂。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：
其中，步骤1所述的固相合成方法，所述树脂固体载体采用王树脂，所述活化剂系统由DIC、HOBt和DMAP组成，所述Fmoc-Phe-王树脂为0.10~0.90mmol/g取代度的Fmoc-Phe-王树脂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是：
其中，步骤2所述的固相合成方法，所述方法包括以下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓航，余美平，路杨，杨东晖，方晨，周亮，
申请(专利权)人：杭州诺泰制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33