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ELISA检测试剂盒两种稀释液指示剂制造技术

技术编号:12776012 阅读:249 留言:0更新日期:2016-01-27 19:08
本发明专利技术ELISA检测试剂盒两种稀释液指示剂属于分析检测技术领域。为酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒在研制过程中,针对每步实验步骤所用稀释液,加入对试验结果无干扰作用的染料指示剂,避免操作失误,确保最终检测结果可靠。其具体步骤为:(1)选择不同颜色、不同特性的染料,经溶解配制成浓缩液;(2)经试验优化确定指示剂在稀释液中含量;(3)通过与国内、外ELISA检测试剂盒的试验验证,证明所用指示剂对检测结果判定无影响。本发明专利技术填补了我国ELISA检测试剂盒所用不同稀释液无颜色区别,解决了ELISA操作过程中存在的加样跳孔或重复加样问题,避免检测过程出现差错。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ELISA稀释液指示剂的专利技术,属于分析检测

技术介绍
ELISA检测技术广泛应用于人、动、植物疫病及体内多种目标成分检测;食品安全监测中农药、兽药残留筛查等领域。由于其操作简单,所需设备价低量少,敏感性高、特异性强,因此得以广泛应用。在ELISA检测
,无论夹心法、间接法还是竞争法所用的稀释液主要有2种。国外进口试剂盒中2种不同的稀释液中均加有不同的指示剂,以防止操作者混用。此外,每一反应步骤所用成分经稀释后,加入酶标板孔槽内因有明显颜色,操作者可有效防止加样失误造成的跳孔或错加,从而保障检测结果的准确性和可重复性。我国各类ELISA试剂盒在稀释液中未添加不同的指示剂,当样品数量多,在加样过程中容易出现跳孔或重复加样问题,造成检测结果重复性及准确性差。因此开展此项专利技术研究。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是所选指示剂必须颜色鲜艳、水溶性好,不易让操作者皮肤及所接触的材料着色,不易粘附在酶标反应孔内壁和试验台面上;对原有试剂盒的检测结果判定没有影响。为解决上述技术问题,本专利技术是通过以下技术方案实现:(1)选择不同颜色、不同特性的染料,经溶解配制成浓缩液。将亮蓝及碱性蓝26两种染料用纯净水充分溶解,均配制成0.5mg/ml水溶液,分装于棕色塑料瓶内,4℃冰箱保存。(2)按不同浓度分别加入ELISA各反应步骤所用的稀释液中,比较对检测结果的影响。将试剂盒中样品稀释液,按每6ml加入不同体积的碱性蓝26水溶液(0.5mg/ml),分别观察指示剂颜色、对酶标板孔壁的粘附性及对结果的影响,最终确定每6ml样品稀释液加120ul碱性蓝26水溶液(0.5mg/ml)。将试剂盒中抗体-酶复合物稀释液,按每6ml加入不同体积的亮蓝水溶液(0.5mg/ml),分别观察指示剂颜色深浅、对酶标板孔壁的粘附性及对结果的影响,最终确定每6ml抗体-酶复合物稀释液加120ul亮蓝水溶液(0.5mg/ml)。具体实施方式通过与国内、外ELISA试剂盒系列试验验证,所用指示剂对检测结果的判定无影响。按上述试验结果筛选的指示剂及使用浓度分别加入到已商品化的国、内外ELISA检测试剂盒,与原试剂盒所用稀释液同时对相同样品进行验证试验,根据OD值及最终结果判定为评判指标。实例1国外牛结核病γ干扰素ELISA检测试剂盒验证结果1.实验方法及步骤(1)指示剂的配制:将亮蓝及碱性蓝26分别配制成0.5mg/ml水溶液。(2)稀释液的配制:将试剂盒中血浆稀释液,按每6ml加入120ul碱性蓝26水溶液(0.5mg/ml);将试剂盒中抗体-酶复合物稀释液,按每6ml加入120ul亮蓝水溶液(0.5mg/ml);(3)分别用新配置的2种稀释液稀释样品及抗体-酶复合物,同时用试剂盒原对应的稀释液同时对22份样品进行检测,测定样品OD值,按试剂盒标准判定结果。2.实验结果新配置的加亮蓝及碱性蓝26的2种稀释液ELISA检测结果与原ELISA检测结果OD值基本无差异,所检样品结果判定完全一致。表1牛结核病γ干扰素ELISA检测试剂盒(国外产品)验证结果实例2国内猪瘟抗体ELISA检测试剂盒验证结果1.实验方法及步骤(1)指示剂的配制:将亮蓝及碱性蓝26分别配制成0.5mg/ml水溶液。(2)稀释液的配制:将试剂盒中血清样品稀释液,按每6ml加入120ul碱性蓝26水溶液(0.5mg/ml);将试剂盒中抗体-酶复合物稀释液,按每6ml加入120ul亮蓝水溶液(0.5mg/ml);(3)分别用新配置的2种稀释液稀释样品及抗体-酶复合物,同时用试剂盒原对应的稀释液同时对32份样品进行检测,测定样品OD值,按试剂盒标准判定结果。2.实验结果新配置的加亮蓝及碱性蓝26的2种稀释液ELISA检测结果与原ELISA检测结果OD值基本无差异,所检样品结果判定完全一致。表2猪瘟抗体ELISA检测试剂盒(国内产品)验证结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种染料指示剂用于ELISA检测稀释液,其特征在于,利用抗原抗体反应体外反应特性,染料对生物组织的亲嗜性,染料对酶标板孔壁的物理吸附特性,进行系列试验筛选而成。

【技术特征摘要】
1.一种染料指示剂用于ELISA检测稀释液,其特征在于,利用抗原抗体反
应体外反应特性,染料对生物组织的亲嗜性,染料对酶标板孔壁的物理吸附特
性,进行系列试验筛选而成。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,ELISA样品稀释液和抗体-
酶复合物稀释液所用指示剂为碱性蓝26和亮蓝。
3.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员:赖平安刘鑫何悦柏亚铎张伟张朝晖汪琳高志强
申请(专利权)人:赖平安
类型:发明
国别省市:北京;11

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